氣相色譜法測(cè)定樟酚酊中樟腦含量

陳 剛

(湖南省張家界市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 張家界 427000)

樟酚酊系張家界市人民醫(yī)院制劑注冊(cè)品種，協(xié)定處方，由樟腦、苯酚、甘油、乙醇等組方，具有消炎、止癢等功效，主要用于預(yù)防和治療皮膚瘙癢癥。該品種原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較簡(jiǎn)單[1]，僅規(guī)定了性狀、化學(xué)鑒別等檢驗(yàn)項(xiàng)目，未制定含量測(cè)定檢測(cè)指標(biāo)。為較好地控制其內(nèi)在質(zhì)量，筆者采用氣相色譜(GC)法對(duì)樟酚酊中樟腦進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

GC－2010型氣相色譜儀(日本島津)，AOC－5000型自動(dòng)進(jìn)樣器，GCsolution色譜工作站;TM－WAX(天美)毛細(xì)管柱(30 mm ×0.32mm，0.25μm);AUW220D 型電子分析天平(日本島津)，1020a超純水器(重慶摩爾)，KQ2200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山超聲儀器公司)。樟腦對(duì)照品(批號(hào)為 110747－201008，純度 97.0%，供含量測(cè)定用)，苯酚對(duì)照品(批號(hào)為100509－200401，供鑒別用)，水楊酸甲酯(批號(hào)為 110707－201011，內(nèi)標(biāo)物，純度99.9%)，均來(lái)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;高純氮?dú)?批號(hào)為20110329，純度99.999%，長(zhǎng)沙日臻氣體有限公司)，水為超純水，其他試劑為分析純;樟酚酊樣品3批(批號(hào)分別為20110901，20110929，20110930，張家界市人民醫(yī)院制劑室)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以 TM－Wax毛細(xì)管柱(30mm×0.32mm×0.25μm)為分析柱，F(xiàn)ID檢測(cè)器，分流進(jìn)樣，分流比40∶1，進(jìn)樣口溫度:230℃，柱溫:125℃，檢測(cè)器溫度:250℃。樟腦峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于 1.5。

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液制備

精密稱(chēng)取水楊酸甲酯1.139 39 g(純度99.9%)，精密稱(chēng)定，置25mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 對(duì)照品溶液制備和校正因子測(cè)定

精密稱(chēng)取樟腦對(duì)照品0.021 19 g(純度97.0%)，置25mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1mL，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。吸取1μL注入氣相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算校正因子。

2.4 供試品溶液制備

精密量取本品2 mL置50 mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):按樟酚酊處方組成除不加樟腦外，制成缺“樟腦”的陰性樣品，照供試品溶液同法制成陰性對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各1μL，分別注入氣相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜圖中，在樟腦峰相應(yīng)的保留時(shí)間附近，無(wú)干擾峰檢出。氣相色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 氣相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密稱(chēng)取樟腦對(duì)照品 0.234 71 g(純度97.0%)，置25mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液。另精密稱(chēng)取水楊酸甲酯0.991 14 g(純度99.9%)，置25mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)貯備溶液。精密量取對(duì)照品貯備溶液1，2，3，5，7mL分別置25mL容量瓶中，各瓶精密加入內(nèi)標(biāo)貯備溶液1mL，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取1μL，注入氣相色譜儀。以樟腦與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比為縱坐標(biāo)(Y)、樟腦質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，得線性回歸方程 Y=0.906 39X －0.005 88，r=0.999 9(n=5)，線性范圍為 0.364 3 ～2.549 9 g/L。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液1μL，按上述色譜條件進(jìn)樣，重復(fù)6次，測(cè)定對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值。結(jié)果的 RSD為0.46%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品(批號(hào)為20110901)溶液1 μL，按上述色譜條件，分別在 0，2，4，8，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定樟腦和內(nèi)標(biāo)物的峰面積，計(jì)算校正因子，以?xún)?nèi)標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果的 RSD為0.13%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批號(hào)(20110901)的樟酚酊樣品6瓶，分別精密吸取2mL，照供試品溶液制成6份供試液，按上述色譜條件測(cè)定樟腦含量。結(jié)果的 RSD=0.23%(n=6)，表明方法精密度高，重現(xiàn)性較好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱(chēng)取樟腦對(duì)照品 0.223 49 g(純度97.0%)，精密稱(chēng)定，置10mL量瓶中，加無(wú)水乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液(21.678 53 g/L)。再精密稱(chēng)取水楊酸甲酯 0.990 15 g(純度99.9%)，精密稱(chēng)定，置25 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)貯備溶液(39.566 39 g/L)。另取已知含量的樣品[批號(hào)為 20110901，含量為標(biāo)示量的 99.63%(19.926 g/L)]0.5，1，2mL 共 6 份，置 50mL量瓶中，分別精密加入對(duì)照品貯備溶液(21.678 53 g/L)0.5，1，2mL，再分別精密加入內(nèi)標(biāo)貯備溶液1mL，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取1μL，注入氣相色譜儀，記錄峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樟腦的含量和回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樟腦加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.6 樣品含量測(cè)定

取樣品 3 批(批號(hào)為 20110901，20110929，20110930)，按供試品溶液制備方法制成供試液，精密吸取1μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定樟腦和內(nèi)標(biāo)物的峰面積，以?xún)?nèi)標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果3批樣品中樟腦含量分別為標(biāo)示量(100mL∶2 g)的99.63%，99.48%，99.54%。

3 討論

曾有報(bào)道應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定樟腦含量的方法[2]。由于氣相色譜法具有分離速度快、效率高、保留時(shí)間短、試驗(yàn)成本相對(duì)較小等優(yōu)點(diǎn)，故對(duì)于既可用液相又可用氣相時(shí)，一般考慮首選氣相色譜法。

改變柱溫，可改善分離效能。文中所述色譜條件未采用程序升溫，樟腦與溶劑(乙醇)、內(nèi)標(biāo)物等成分能達(dá)到較好分離。經(jīng)試驗(yàn)，按上述色譜條件采用程序升溫(柱溫為120℃保持5min，以10℃ /min的速度升至160℃，保持2 min)，結(jié)果樟腦和內(nèi)標(biāo)物(水楊酸甲酯)也能達(dá)到較好分離，樟腦峰保留時(shí)間在3～4min左右，可滿(mǎn)足含量測(cè)定要求。兩種方法均適用的原因是本品藥物組分較少，分離容易。若是復(fù)雜組分的樣品，應(yīng)以程序升溫法較好。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:1 108.

[2]余小平，舒金富，黃 華，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定樟腦苯酚溶液中兩組分的含量[J].藥物分析雜志，2006，26(8):1 161－1 162.