正交試驗法優選芍黃通便合劑的水提取工藝＊

郭廷東，唐志立，謝雨洮，張 惠，向 薇

(四川省南充市中心醫院中藥劑科，四川 南充 637000)

芍黃通便合劑由白芍、大黃、大腹皮、檳榔等組方，具有寬腸通便、行氣導滯、潔腸凈腑的功效，適用于氣機不暢、腑實不通引起的便秘，阿片類藥物引起的便秘，術后便秘等癥[1]。該方是我院臨床應用多年的協議處方，療效確切，目前尚無不良反應發生，因此選為院內制劑研發，便于服用，為臨床便秘提供了新的用藥選擇。筆者以方中君藥白芍有效成分芍藥苷及總的水浸出物為指標對其水提取工藝進行了考察，以期為擴大生產提供依據。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，包括2695泵、自動進樣器、柱溫箱，2487二極陣列檢測器;電子天平;芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為0736－9912);芍黃通便合劑(南充市中心醫院制劑室提供，規格為100mL/瓶，批號為111121);陰性樣品(南充市中心醫院制劑室);乙腈、磷酸為色譜純，水為超純水，其余試劑試藥均為分析純;試驗所用中藥飲片購于南充市藥業集團中藥飲片廠。

2 方法與結果

2.1 芍藥苷含量測定[2]

2.1.1 色譜條件

色譜柱:Phenomene C18柱(250 mm ×4.60 mm，5μm);流動相:乙腈 －0.1% 磷酸(20∶80)，流速:1.0 mL/min;檢測波長:230 nm;柱溫:37℃，進樣量:10μL。保留時間12min左右。

2.1.2 溶液制備

取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解制成每1mL含68.2μg的溶液，即得對照品溶液。精密量取芍黃通便合劑2mL，加95%乙醇稀釋，搖勻，過濾，取濾液，定容至25mL，即得供試品溶液。按處方組成同法同比例制成不含白芍的陰性樣品，并按供試品溶液的制備方法制備，作為陰性對照品溶液。

2.1.3 方法學考察

干擾試驗:分別精密量取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各10μL，按上述色譜條件進樣測定。結果表明，陰性對照品在芍藥苷保留時間處無色譜峰，樣品溶液中芍藥苷與其他成分分離較好，表明陰性對照品對測定無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密吸取芍藥苷對照品溶液 2，4，8，10，12，15μL進樣，測定其峰面積，以峰面積值(Y)對進樣量(X)進行線性回歸，得方程 Y=1.59 ×106X+5.05(r=0.999 7)。結果表明，芍藥苷進樣量在0.136～1.023μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10μL，連續進樣6次，測定峰面積，結果的 RSD=0.58%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一批號供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8，12 h進樣10μL，測定峰面積。結果的 RSD=0.9%(n=6)，表明供試品在12 h內穩定。

重復性試驗:取樣品成品液6份，依法制備供試品溶液，進樣10 μL 測定。結果芍藥苷平均含量為 1.613 g/L，RSD=1.3%(n=6)，表明方法的重復性好。

加樣回收試驗:精密量取已知含量的樣品6份(成品液)，每份 1mL，分別加入對照品溶液 1.5，1.5，1.6，1.6，1.7，1.7mL，按上述樣品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，計算平均回收率。結果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收率試驗結果(n=6)

2.2 水提取最佳工藝研究

2.2.1 因素水平選擇

根據處方中藥物的性質，經過初步考察，以提取后濾液中水浸出物與芍藥苷含量為考察指標，選取對提取效率影響較大的提取時間(因素A)、提取次數(因素 B)、加水量(因素 C)作為考察因素，按表2水平，采用 L9(34)正交試驗。

2.2.2 正交試驗

取9份一瓶量處方藥材(大黃除外)，適當碎段，按正交設計方案，煎煮，過濾，濃縮至約100mL。量取濃縮液25mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定質量，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。依據2.1.2項下供試品溶液的配制方法進行樣品處理，在擬訂色譜條件下測定芍藥苷的含量。結果見表3。

2.2.3 試驗結果分析

從表3中級差 R值可知，影響水浸出物和芍藥苷含量的因素大小依次為A＞B＞C，即提取時間＞提取次數＞加水量，最佳提取工藝為A2B2C3，即每次提取1.5 h，提取2次，加水12倍。由方差分析可知，A因素有顯著意義，應取A2，B因素稍有影響，但B2、B3差別不大，從節約能源和縮短工序考慮選擇B2，C因素為不顯著因素，即加水量對提取結果影響不大。故最佳提取工藝條件選擇為A2B2C1，即提取2次，每次1.5 h，加水8倍。方差分析見表4。

2.2.4 驗證試驗

根據最佳工藝條件，即8倍水，提取2次，每次1.5 h，提取3批，測得其結果見表5。可知，驗證試驗結果與正交試驗結果一致，說明提取工藝條件基本穩定可行，確定白芍、大腹皮、決明子、火麻仁、檳榔、白術等水提取工藝為:8倍水，提取2次，每次1.5 h。

表2 正交試驗因素水平表

3 討論

白芍為方中君藥，試驗表明，白芍能使大腸黏液分泌增加，促進小腸、大腸的推動運動，并使小腸、大腸含水量增多，對便秘有較好療效[3]，白芍的活性成分是芍藥苷，故本試驗以芍藥苷為評價指標之一。大黃致瀉的主要成分為結合型蒽醌，久煎瀉下作用減弱[4]，大黃在提取過程中，溫度和時間對大黃蒽醌類成分影響較大，研究證明，夾層鍋蒸汽煎煮2次，每次10min，可結合型蒽醌蒽苷溶出率最高[5]。因此，方中大黃采用單煎，取湯液，配液時加入的方法。

表3 L9(34)正交試驗結果

表4 方差分析結果

表5 驗證試驗結果

[1]任大成.中醫辨證治療阿片性便秘62例療效觀察[J].中國中醫藥信息雜志，2007，14(1):72.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2010:附錄 36－38.

[3]覃俊佳，覃 平，羅宇東，等.白芍瀉下作用機理的實驗研究[J].中國中醫藥科技，1998:5(3):155－157.

[4]凌一揆.中藥學[M].上海:上海科學技術出版社，1984:71.

[5]鄭虎占，董澤宏，佘 靖.中藥現代研究與應用[M].北京:學苑出版社，1997:385.