新型大麻制劑O－1602和大麻二酚對LPS導致的嚙齒動物小腸運動紊亂的影響*

林旭紅， 李永渝， 馮雅靜， 曹明華， 徐 菁， 李 琨， 馮佳燕， 余良英

(同濟大學醫學院病理生理教研室，同濟大學消化系統疾病研究所，上海200092)

大麻類物質包括植物大麻或其提取物，在治療胃腸道疾病方面具有悠久的歷史，但由于精神方面的副作用，限制了它們的應用。近10年來，隨著實驗研究的不斷深入，大麻類物質藥理效應的生物化學基礎已逐漸得到認識，不少作用專一、副作用小的大麻類新制劑不斷被研制出來。目前已報道的大麻制品有60多種，它們與內源性大麻素(cannabinoid，CB)一樣，主要通過大麻素1型(cannabinoid-1，CB1)受體和大麻素2型(cannabinoid-2，CB2)受體介導，發揮對胃腸運動、免疫功能、食欲控制、上皮生長和再生的調控作用，其中CB受體在胃腸運動調節方面的作用已得到廣泛認可［1-3］，本實驗室前期研究也發現，CB1受體參與生理及病理生理條件下大鼠、小鼠胃腸道運動功能的調節，CB2受體調控胃腸道運動僅限于胃腸道的某些區域或某些疾病狀態［4］。

隨著對大麻制劑研究的不斷深入，最近在哺乳類發現一種與CB1和CB2受體具有同源序列［5-6］、并表達與CB配體結合的關鍵氨基酸的G蛋白偶聯受體 55(G-protein-coupled receptor 55，GPR55)，它能被一些 CB配體激活［7-8］，因此認為 GPR55是一種新的CB受體。針對這種新的CB受體的配體大麻二酚(cannabidiol，CBD)和O-1602是2種典型的非精神性新型大麻制劑，它們的毒副作用小，具有一定的抗炎作用，但與胃腸運動的關系仍不清楚。本文通過在體與離體實驗研究，探討O-1602和CBD對脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導的大鼠、小鼠小腸運動功能紊亂的影響;在此基礎上，用Western blotting檢測GPR55蛋白表達情況，ELISA法測定血清腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor α，TNF-α)及白細胞介素6(interleukin 6，IL-6)水平，采用傳統的細胞內微電極技術觀察O-1602和CBD對平滑肌細胞膜電位的影響，用定磷法測定平滑肌組織Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase)的活性，旨在闡明其作用機制，為其可能的開發應用提供理論依據和實驗依據。

材料和方法

1 在體實驗

1.1 動物及分組 8～10周C57BL小鼠(18～20 g)36只，雌雄各半，購自第二軍醫大學動物中心。實驗前禁食不禁水12 h，隨機分為6組:對照組、感染性腸紊亂組、CBD組、O-1602組、CBD+LPS組和O-1602+LPS組。參照Li等［4］的方法制備感染性腸運動紊亂模型，即小鼠腹腔注射LPS組400 μg/kg。對照組以等體積生理鹽水代替LPS，CBD+LPS組和O-1602+LPS組在造模前10 min腹腔分別注射1 mg/kg CBD和1 mg/kg O-1602。

1.2 小鼠上消化道轉運功能測定 參照前期實驗方法［4］檢測不同處理組小鼠小腸的排推功能。即:單獨注射藥物30 min或合用LPS后，小鼠每10 g體重灌胃0.1 mL碳末懸液。灌胃后20min頸椎脫臼處死動物，馬上移除幽門至盲腸段小腸，測量碳末移行的距離，計算碳末占整個小腸的百分比，結果表示為各組小腸排推率占對照組的百分比。同時心臟取血，離心取血清，留取回腸迅速投入-80℃冰箱備用。

1.3 Western blotting法測定小鼠小腸GPR55蛋白含量 取小鼠回腸組織加入蛋白裂解液［組成:HEPES 25 mmol/L(pH 7.5)，EDTA 1 mmol/L，NaCl 150 mmol/L，MgCl210 mmol/L，PMSF 1 mmol/L，加入1%乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P-40，NP-40)，2%甘油(glycerol)，10 mg/L抑肽酶(aprotinin)］，勻漿，充分裂解后離心取上清液，檢測樣品蛋白濃度(BCA，上海申能博彩)。等濃度樣品加入5×上樣緩沖液(碧云天生物技術研究所)，95℃煮沸10 min使蛋白變性。將樣品(40 μg蛋白)在4%～10%Tris-SDS-PAGE膠中電泳1.5 h，轉移到硝酸纖維素膜上，5%脫脂牛奶封閉1 h，滴加GPR55多克隆抗體(1∶500 稀釋，Caymen Chemical)，4 ℃孵育過夜，滴加羊抗兔IgG-HRP(1∶1 000稀釋，艾比瑪特生物醫藥上海有限公司)，室溫孵育 1 h，用 ImageQuant LAS4000 Mini化學發光成像分析儀檢測蛋白條帶，內參照用β-actin單克隆抗體(1∶1 000稀釋，Sigma)檢測。

1.4 血清TNF-α和IL-6水平檢測 按ELISA試劑盒(R＆D)說明書步驟操作。

2 離體實驗

2.1 動物及分組 在自發性收縮實驗(200～250 g雄性SD大鼠36只，購自中科院上海動物中心)、電刺激誘導的收縮實驗(18～20 g C57BL小鼠36只，購自Charles River)、膜電位實驗(18～20 g雄性ICR小鼠36只，購自中科院上海動物中心)和Ca2+-AT-Pase測定實驗(18～20 g雄性ICR小鼠36只，購自中科院上海動物中心)中各隨機分為6大組:對照組、感染性腸運動紊亂組、CBD組(10-9mol/L～10-7mol/L)、O-1602組(10-9mol/L～10-7mol/L)、CBD+LPS(10-9mol/L～10-7mol/L)組和O-1602+LPS組(10-9mol/L～10-7mol/L)。

2.2 器官浴槽記錄大鼠回腸自發性收縮 大鼠禁食12 h，麻醉下頸椎脫臼處死，迅速取出近端回腸，參照Bashashati等［9］的方法制備回腸肌條。肌條在1 g的前負荷下收縮，標本至少穩定60 min(每隔15 min用新鮮37℃ Kreb’s液沖洗肌條)后開始實驗。

待肌條自發收縮活動平穩后開始向浴槽內加藥，包括單獨加 LPS，再進行O-1602(10-9mol/L、10-8mol/L 和 10-7mol/L)或 CBD(10-9mol/L、10-8mol/L和10-7mol/L)分別與LPS(1.5 mg/L)共孵育的研究(非累積性給藥)，觀察肌條收縮情況的變化。每種藥物濃度觀察20 min，再加入下一個濃度。實驗結束時，加入10-4mol/L乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)檢測組織反應性，選擇反應良好的肌條進行統計。用SMUP-E4生物電信號處理系統(上海嘉龍教學儀器廠)記錄組織收縮情況，以加藥前5 min作為對照反應，結果表示為加藥后15～20 min內平滑肌收縮活動平均振幅的變化(g)。

2.3 小鼠電刺激誘導的收縮活性 回腸肌條制備同上，肌條的一端固定于肌槽底部與電極夾相連的掛鉤上，另一端穿過2個相距0.6 cm的環形鉑電極，以絲線連接張力換能器。標本平衡后開始進行電刺激，分別選 1 Hz、2 Hz、5 Hz、10 Hz、20 Hz 和 50 Hz，刺激參數為:每種頻率連續2次用恒定電壓脈沖40 V、0.5 ms刺激，每5 min一次，每次持續10 s。加藥方法同前，平滑肌收縮變化用Hellige耦合器和放大器(Orbeco-Hellige)放大，用Spike軟件記錄。加藥前連續3次電刺激誘導的收縮均值作為對照反應，結果表示為加藥后15～20 min內平滑肌收縮活動平均振幅的變化(g)。

2.4 小鼠回腸平滑肌細胞膜電位及慢波的記錄同上處死小鼠取出小腸，在碳酸氫鹽緩沖液中沿腸系膜側剪開小腸。在體視顯微鏡下去除粘膜層，制備空腸平滑肌組織(2 mm寬，5 mm長)，將組織固定于硅膠板，置于組織浴槽底部，孵育在37℃ Kreb’s液，充以氧氣和二氧化碳，以2 mL/min的速度持續灌流，穩定2 h。采用傳統的細胞內微電極技術記錄平滑肌細胞細胞內電反應［10］包括膜電位(membrane potential，Em)和慢波。具體方法如下:將尖端直流阻抗為50～80 MΩ，充滿0.5 mol/L KCl的玻璃微電極［外直徑1.5 mm，內直徑0.84 mm，拉制參數:加熱溫度(heater)9.25，亞磁力(megnet)6，磁力(main megnet)9］固定在微電極操縱器上，調節操縱器，將電極尖端推進至標本表面，刺入細胞，記錄電反應，所記錄的慢波電位通過高輸入阻抗放大器放大信號。在獲得小鼠小腸平滑肌細胞基礎膜電位活動后，在灌流液中加入不同濃度的O-1602、CBD或LPS，或LPS與以上大麻制劑同用，觀測其對膜電位活動及慢波的影響。

2.5 小鼠回腸平滑肌組織Ca2+-ATPase測定 同上制備小鼠平滑肌肌條，精確稱重組織，以0.9%生理鹽水稀釋制成10%勻漿，分別于250 μL回腸平滑肌組織勻漿液中加入各組藥物，使CBD和O-1602終濃度分別為10-7mol/L、10-8mol/L和10-9mol/L，LPS終濃度為1.5 mg/L。反應2 min后，加入2.5%戊二醛100 μL，終止反應，根據預試結果，樣本稀釋10倍進行酶促反應，檢測 Ca2+-ATPase(南京建成生物科技有限公司)，具體操作按說明書進行。同時用BCA蛋白定量試劑盒(上海申能博彩)測定組織蛋白濃度。以每小時每毫克組織蛋白中ATP酶分解ATP產生1 μmol無機磷的量為一個ATP酶活力單位［即 mmolPi·(g protein)-1·h-1］，公式:ATPase 活力［103U·(g protein))-1］=［(測定管A值-對照管A值)/(標準管A值-空白管A值)］×標準管濃度(0.02 mmol·L-1)×6×10/蛋白濃度(g protein·L-1)。

3 統計學處理

應用SPSS 11.5統計軟件分析，數據以均數±標準誤(ˉ±sE)表示，先用Levene方法進行方差齊性檢驗，若樣本所來自總體符合方差齊性要求，則對其進行單因素方差分析(ANOVA)，隨后再進行Dunnett’s檢驗分析;若樣本所來自總體的方差不齊，采用非參數檢驗(Kruskal-Wallis檢驗)。以P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 小鼠小腸排推功能的改變

對照組小鼠小腸推進率為100%，O-1602和CBD腹腔注射均不影響正常小鼠上消化道轉運，而LPS非常顯著減慢上消化道轉運(74.2% ±3.6%，P＜0.05)，說明在感染狀態下，胃腸傳輸功能明顯下降，表現為傳輸速度較正常組顯著減慢。CBD預處理明顯逆轉LPS導致的上消化道轉運減慢(124.5%±9.4%，P＜0.05)，見表1，O-1602未發揮明顯的拮抗效應。

表1 O－1602或CBD對小鼠上消化道轉運功能的影響Table 1.Effect of O-1602 or CBD on upper gastrointestinal(GI)transit in mice(%.±sE.n=6)

表1 O－1602或CBD對小鼠上消化道轉運功能的影響Table 1.Effect of O-1602 or CBD on upper gastrointestinal(GI)transit in mice(%.±sE.n=6)

*P＜0.05 vs control group;#P＜0.05 vs LPS group.

Treatment Upper GI transit Control 100.0±6.5 CBD 102.2±7.0 O-1602 106.2±4.5 LPS 66.6±3.6*CBD+LPS 116.7±9.4#O-1602+LPS 89.5±3.9

2 小鼠回腸組織中GPR55蛋白的表達

與未處理組比較，O-1602和CBD單獨應用均不影響小鼠回腸GPR55蛋白表達，腹腔注射LPS后，回腸組織GPR55蛋白表達水平明顯增高(P＜0.01)，CBD預處理顯著降低LPS導致的GPR55表達的升高(P＜0.01)，O-1602對LPS的效應則無明顯作用，見圖1。

3 血清TNF－α和IL－6水平的變化

如圖2所示，腹腔注射LPS后，小鼠血清TNF-α和IL-6水平明顯升高(P＜0.01)，提示LPS處理后促炎機制被激活。同時，我們發現O-1602對2種細胞因子水平均無明顯影響(P＞0.05)，CBD拮抗LPS導致的大鼠血清IL-6水平升高(P＜0.01)，但不影響TNF-α水平(P＞0.05)。

Figure 1.Effect of O-1602 or CBD on the expression of GPR55 protein in mice ileum.±sE.n=6.＊＊P＜0.01 vs control;##P＜0.01 vs LPS group.圖1 O－1602或CBD對小鼠回腸GPR55蛋白表達的影響

Figure 2.Effect of CBD or O-1602 on the levels of TNF-α(A)and IL-6(B)in serum of mice.±sE.n=6.＊＊P＜0.01 vs control;##P＜0.01 vs LPS.圖2 CBD或O－1602對小鼠血清TNF－α和IL－6的影響

4 大鼠回腸自發性收縮活動的變化

10-9mol/L和10-8mol/L O-1602均不影響回腸收縮，而10-7mol/L O-1602明顯抑制回腸自發性收縮，與對照組相比，下降至67.9% ±8.7%，P＜0.05，見圖3A，但對LPS抑制回腸收縮無明顯作用。單獨應用LPS抑制大鼠回腸自發性收縮，與對照組相比，下降至59.5%±7.4%，P＜0.01，見圖3B。

CBD對正常肌條自發性收縮無明顯影響，但LPS造模前、后10 min應用CBD(劑量為10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L)可阻斷 LPS對回腸自發性收縮的效應，即逆轉LPS對回腸收縮的抑制，從LPS組59.5% ±7.4%分別升高至79.7% ±6.1%，P＜0.05;99.1% ±3.7%，P＜0.01;96.3% ±8.3%，P＜0.01，見圖3B。

Figure 3.Effect of O-1602 on the spontaneous contraction of the isolated rat uleum(A)and effect of CBD on LPS-induced contraction disturbances in the isolated rat ileum(B).±sE.n=6.*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs control，#P＜0.05，##P＜0.01 vs LPS.圖3 O－1602對大鼠回腸自發性收縮的影響和CBD對LPS導致的大鼠回腸收縮紊亂的影響

5 電刺激誘導的小鼠回腸收縮的變化

電刺激引起小鼠回腸規律性的相位性收縮，隨著刺激頻率的增高，收縮振幅逐漸升高，10 Hz～20 Hz刺激時變化最明顯，至50 Hz時達到最大收縮，見圖4。我們選用10 Hz作為后續研究的基礎。單獨應用O-1602使收縮幅度分別降至86.6%±11.7%、82.2%±9.0%和76.9%±10.3%(P＞0.05，P＞0.05，P＜0.05)，但CBD不影響這種收縮活動，見圖5。而模型組失去這種收縮模式，腸蠕動明顯加速，見圖6，LPS組在用藥后5 min時收縮力即開始升高，而且收縮的改變隨時間延長而明顯，至30 min時與對照組比，升至179.0%±12.7%(P＜0.01)。如圖6所示，O-1602加入LPS預處理的回腸肌條孵育后，在有效濃度范圍內呈濃度依賴性抑制LPS對腸段收縮的促進作用(167.9% ±18.1%，P＜0.05;150.1%±16.7%，P＜0.01;142.3%±15.5%，P＜0.01);CBD對LPS導致的胃腸運動紊亂的影響與O-1602類似，其對腸段收縮的抑制程度分別為156.5%±13.2%(P＜0.01)、156.3%±12.0%(P＜0.01)和153.2% ±10.9%(P＜0.01)。

Figure 4.Electrically-evoked frequency-dependent contraction of mouse ileum.±sE.n=6.圖4 電刺激誘導的小鼠回腸頻率依賴性收縮

Figure 5.Effect of O-1602 or CBD on electrically-evoked(10 Hz)contraction of mouse ileum.±sE.n=6.*P＜0.05 vs control.圖5 O－1602或CBD對10 Hz電刺激誘導的小鼠回腸收縮的影響

6 小鼠回腸平滑肌細胞膜電位及慢波的變化

各濃度的O-1602和CBD對小鼠回腸平滑肌細胞膜電位無明顯影響(P＞0.05)，慢波振幅也沒有顯著改變(P＞0.05);在LPS處理的回腸組織，O-1602和CBD對降低的平滑肌細胞膜電位均無明顯作用(P＞0.05)。

7 小鼠回腸平滑肌組織Ca2+－ATPase活性的變化

如圖7所示，正常小鼠平滑肌組織Ca2+-ATPase活性為(4.7±0.6)×103U· (g protein)-1，高濃度(10-7mol/L)O-1602明顯增強平滑肌組織肌漿網Ca2+-ATPase活性［(17.6±1.4)×103U· (g protein)-1，P＜0.01］，而各濃度CBD 均不影響 Ca2+-ATPase活性;LPS處理后，其平滑肌組織 Ca2+-ATPase活性顯著增強［(29.7±6.9)×103U·(g protein)-1，P＜0.01］，單獨以各濃度CBD預處理后，10-8mol/L和10-7mol/L均可逆轉LPS對平滑肌組織Ca2+-ATPase活性的升高效應，與LPS組相比，差異顯著［分別為(16.4±5.9)×103U·(g protein)-1和(14.6±3.5)×103U·(g protein)-1，P ＜0.05］。O-1602對LPS升高平滑肌細胞Ca2+-ATPase活性的作用無明顯影響(P＞0.05)。

Figure 6.Effect of O-1602 or CBD on LPS-induced electrically-evoked contraction disorder of mouse ileum. ± sE.n=6.＊＊P ＜0.01 vs control;#P ＜0.05，##P ＜0.01 vs LPS.圖6 O－1602或CBD對LPS誘導的小鼠回腸電刺激收縮紊亂的影響

討 論

胃腸道(gastrointestine，GI)運動紊亂發生于多種情況，是多種不同病因和發病機制所導致的一系列疾病的共同表現，尤其是炎癥相關GI疾病引起的小腸運動紊亂，常導致GI內過度增殖的腸道病原菌釋放腸毒素，由此加重GI運動紊亂。因此對其發病機制的探究及有效治療藥物的尋求一直是這一領域的熱點課題。

在體LPS模型被經常用來作為大、小鼠感染性腸運動紊亂模型［11］，我們在前期工作的基礎上，采用400 μg/kg腹腔注射復制小腸運動紊亂模型，結果表明，小鼠小腸運動明顯受損，表現為上消化道轉運功能明顯抑制。多項研究［12-14］表明，電刺激導致肌肉穩定的單相收縮，這種收縮反應是由膽堿能和神經介導的由乙酰膽堿從腸神經釋放引起的，因為這種反應被阿托品和河豚毒素完全阻斷，通過觀察體外小鼠回腸與LPS共孵育時平滑肌收縮振幅的改變，我們發現在10 Hz刺激頻率下，LPS明顯促進小鼠回腸平滑肌收縮，這一效應發生快，并有明顯的時間依賴性，至30min時達到高峰，這在 Duncan等［12］和Bashashati等［9］的研究中得到證實。而在自發性收縮的研究中，相同濃度的LPS明顯抑制大鼠回腸平滑肌收縮，說明不同收縮方式對LPS顯示不同的反應。較多研究認為，LPS導致腸運動紊亂的機制主要涉及促炎介質損傷肌肉收縮和/或降低肌層神經叢神經遞質釋放［15-17］，LPS通過激活腸肌層及腸外肌層大量巨噬細胞，分泌眾多細胞因子和炎癥介質，進一步影響胃腸道運動，本實驗中也見到LPS處理的小鼠血清TNF-α和IL-6水平明顯升高。

研究表明，多種CB制劑可用來治療胃腸道動力相關疾病，并主要通過CB1、CB2受體發揮作用，但由于其同時激活腦內CB1受體引起精神作用，限制了它們在臨床的應用。在過去的幾年中，大麻類物質對GPR55的藥理作用已得到深入研究，然而還存在爭議［18］，并且沒有充足證據證明位于腸道的GPR55的功能。本課題組前期研究發現，GPR55 mRNA在大鼠十二指腸、回腸和結腸均有表達，且回腸量最多，免疫組織化學結果顯示GPR55主要存在于大鼠十二指腸、回腸和結腸肌層神經叢［19］，本實驗中也觀察到，小鼠回腸也有GPR55表達，有趣的是，在小鼠炎癥腸道，GPR55表達在蛋白水平明顯上調，提示炎癥時GPR55受體激活，可能參與病理狀態下胃腸功能(包括運動功能)的調節，這一發現與經典CB受體相似［20］。CBD為植物大麻中研究得最透徹的非精神性生物活性成分，是GPR55受體拮抗劑，近年發現也有反向激動的作用;而O-1602是人工合成的CBD類似物，作為潛在的GPR55激動劑，在某些病理過程中均發揮重要作用。本研究發現，單獨應用O-1602和CBD不影響GPR55表達，在LPS導致的炎癥腸道，CBD明顯降低GPR55蛋白表達，同時有效降低小鼠血清IL-6水平，這與我們課題組的另一項胰腺炎研究中得到的結果相吻合［21］，提示CBD在體內通過抗炎機制改善小腸運動。

Figure 7.Effects of O-1602，CBD and LPS on the activity of Ca2+-ATPase in smooth muscle tissues.±sE.n=6.＊＊P＜0.01 vs control;#P＜0.05 vs LPS.圖7 O－1602、CBD和LPS對平滑肌組織Ca2+－ATPase活性的影響

胃腸道平滑肌是胃腸道動力的核心單位，各種因素最終都要通過胃腸道平滑肌來發揮調控胃腸道動力的作用，體外實驗中我們發現，各濃度的CBD對10Hz電刺激誘導的收縮無明顯影響，在LPS導致的10Hz電刺激收縮紊亂模型，CBD預處理可以逆轉LPS的效應，這與文獻報道的CBD抗痙攣作用一致［22］。而在自發性收縮的研究中，CBD對正常肌條自發性收縮無明顯影響，在劑量為10-9mol/L、10-8mol/L和10-7mol/L時阻斷LPS對回腸自發性收縮的效應，即逆轉LPS對回腸收縮的抑制，提示CBD對病理腸道發揮雙向調節作用，主要取決于病理腸道的狀態。O-1602(10-7mol/L)抑制小鼠回腸平滑肌電刺激引起的收縮幅度，并在一定程度拮抗LPS引起的電刺激收縮的加強，但不影響病理狀態下回腸自發性收縮。這表明，在正常大、小鼠，CBD不改變回腸收縮活性，也不改變膽堿能運動功能;病理狀態下，CBD不僅改變平滑肌收縮活性，而且改變膽堿能運動功能。高濃度的O-1602可以改變正常小腸平滑肌的收縮活性，又可通過突觸前GPR55抑制膽堿能運動功能;在病理狀態下，O-1602可通過抑制膽堿能運動功能，減輕LPS導致的小腸運動紊亂。

胃腸道平滑肌細胞膜電位是影響平滑肌反應性，進而改變其舒縮活動的主要因素，前期實驗中我們發現針對經典CB1和CB2受體的相關CB制劑對小腸運動功能的影響與平滑肌細胞膜電位之間有一定聯系。為了進一步明確O-1602和CBD對小腸運動的作用機制，我們觀察了二者對小腸平滑肌細胞膜電位和慢波的影響，結果發現，O-1602和CBD這兩種新制劑在生理及病理生理狀態下對平滑肌細胞內的電變化均無明顯影響，說明它們與經典CB受體的配體作用機制有所不同，其胃腸動力效應可能不包括平滑肌細胞膜電位的改變，這一結論需要進一步測定電壓依賴性鈣通道(voltage-dependent calcium channel，VDCC)等離子通道電流加以確定。

對平滑肌收縮來說，需要有起細胞的興奮、傳導、電-機械偶聯等多個環節。Ca2+濃度是平滑肌收縮反應中的關鍵因素。Ca2+-ATPase存在于細胞膜及內質網/肌漿網上，是肌漿網中含量最豐富的蛋白，對建立跨膜的離子梯度，維持細胞膜電位、正常細胞生理活動和代謝，具有重要作用，是調節鈣穩態的最重要物質，平滑肌細胞舒張期胞漿內Ca2+濃度下降的70%～90%的鈣離子是通過它回攝取的，因此，可以將腸道組織Ca2+-ATPase活力作為腸道能量代謝及功能損傷的重要指標。為了明確O-1602和CBD的作用途徑，我們測定了平滑肌組織Ca2+-ATPase的活性，結果發現，LPS和高濃度的O-1602均能明顯增強小鼠空腸平滑肌組織Ca2+-ATPase活性，從而增加Ca2+經細胞內向胞外的轉運，達到減少胞內Ca2+、抑制平滑肌收縮的效應;而CBD單獨應用對平滑肌組織Ca2+動員無明顯影響，但可以拮抗LPS導致的Ca2+-ATPase活性的增強。以上結果與最近的一項CBD在神經系統通過調節鈣穩態，介導神經保護的研究結果相似［23］。在本實驗條件下，低劑量O-1602不動員胞內Ca2+，在高濃度時顯示抑制Ca2+的效應，但對LPS導致的Ca2+-ATPase活性升高沒有影響，這與其對回腸肌條自發性收縮的結果一致。以上結果表明，O-1602和CBD對Ca2+-ATPase活性的調節可能是影響回腸平滑肌自發性收縮的機制之一。

總之，我們的結果表明，在體內，CBD通過抗炎作用有效改善小腸運動;在體外，O-1602和CBD選擇性拮抗LPS導致的小腸運動紊亂，其機制不是通過改變平滑肌細胞膜電位，而可能與其調節Ca2+-ATPase活性有關。

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