慢性乙型肝炎患者細胞免疫狀態分析

宋慧萍 曾祥銓

[摘要] 目的 研究慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞亞群變化及其臨床意義。 方法 對200例慢性乙型肝炎患者和80例健康者，采用流式細胞儀檢測T淋巴細胞亞群的改變。 結果 HBeAg陰性慢性乙肝患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+顯著高于HBeAg陽性患者，分別為（36.70±3.58）、（32.16±4.51）、（1.72±0.37）和（31.21±4.25）、（28.72±3.23）、（1.54±0.45）（P＜0.05）。慢性乙型肝炎患者輕度組、中度組、重度組CD4+ T分別為（40.21±5.26）、（36.25±4.53）、（27.51±4.36），組間比較差異有統計學意義（P＜0.05），CD8+ T分別為（31.25±4.55）、（27.19±3.38）、（15.27±2.63），CD4+/CD8+分別為（1.63±0.42）、（1.29±0.32）、（0.75±0.23），組間比較差異有統計學意義（P＜0.05）。 結論 慢性乙型肝炎患者機體T淋巴細胞功能有不同程度降低，HBeAg陰性的慢性乙肝患者具有相對較強的細胞免疫狀態，隨病情程度加重，細胞免疫功能狀態亦逐級下降。

[關鍵詞] 慢性乙型肝炎；細胞免疫；T淋巴細胞亞群

[中圖分類號] R512.6+2???[文獻標識碼] A???[文章編號] 2095-0616（2012）15-16-03

Anaysis of the cellular immune status in chronic hepatitis B patients

SONG?Huiping??ZENG?Xiangquan

Department of Infectious Diseases, Sanming First Hospital Affiliated Fujian Medical University,Sanming 365000,China

[Abstract] Objective To study the possible cause of the difference in cellular immue status in patiens chronic hepatitis B. Methods 200 patients with hepatitis B hospitalized from 2010 to 2011 and 80 cases of healthy subjects were investigated and peripheral T lymphocybe subsets were examined by flow cytometry. Results The quantity of CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+ in HbeAg-negative group was higher than that in HBeAg-positive group,their values were (36.70±3.58)、(32.16±4.51)、(1.72±0.37) and (31.21±4.25)、(28.72±3.23)、(1.54±0.45)(P＜0.05)，the counts of CD4+、CD8+ and the ratio of CD4+/CD8+ were reduced by in patients with chronic hepatitis B in light group,meidium group and serious group.There was significant difference between the three groups. Conclusion The celllular immune was lower than that in the healthy subjects,cellular immune status was stronger than that in patients with HBeAg-positive,with the worsening of illness,cellular immune status was lower and lower.

[Key words] Chronic hepatitis B;Cellular immunity;T lymphocybe subsets

慢性乙型肝炎（HBV）感染的自然病程分為免疫耐受期、免疫清除期、非活動或低復制期三個階段，在免疫清除階段出現慢性乙型肝炎臨床表現，如乏力、納差、嘔吐、黃疸等及ALT升高、HBV-DNA滴度下降、肝組織的壞死炎癥。慢性乙型肝炎患者的細胞免疫反應在清除病毒的同時，亦可導致肝細胞損傷，而患者機體免疫反應的不同導致不同的臨床表現。筆者應用流式細胞儀檢測慢性乙型肝炎患者T淋巴細胞亞群水平，研究其臨床意義。

1?資料與方法

1.1?一般資料

患者來源于2010年4月～2011年5月福建醫科大學附屬三明第一醫院感染科住院的200例慢性乙肝患者，其中慢性輕度組60例，中度組80例，重度組60例；男140例，女60例；年齡16～72歲，平均（42.5±4.3）歲。正常對照組80例為同一醫院健康體檢者，肝功能正常，甲、乙、丙、戊病毒性肝炎血清標志物為陰性。

1.2?診斷標準

慢性乙型肝炎的診斷符合2000年中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯合修訂的《病毒性肝炎防治方案》標準，HBeAg陰性、陽性慢性乙型肝炎的診斷及慢性乙型肝炎輕度、中度、重度診斷根據2005年我國《慢性乙型肝炎防治指南》標準執行。

HBeAg陰性慢性乙型肝炎：即患者血清HBsAg和HBV DNA陽性，HBeAg持續陰性，抗-HBe陽性或陰性，血清丙氨酸轉氨酶ALT持續或反復異?；蚋谓M織學檢查有肝炎病變。輕度：病情較輕，可反復出現乏力、頭暈、食欲減退、厭油、尿黃、肝區不適、睡眠欠佳、肝稍大有輕觸痛，可有輕度脾大。部分癥狀、體征缺如。肝功能指標僅1或2項輕度異常。中度：癥狀、體征、實驗室檢查介于輕度和重度之間。重度：有明顯或持續的肝炎癥狀，如乏力納差、腹脹、尿黃、便溏等，伴有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣、脾大、ALT和（或）AST反復或持續升高，白蛋白降低、丙種球蛋白明顯升高。

1.3?研究方法

所有檢測對象均在入院次日清晨空腹肘靜脈采血3 mL，其中1 mL EDTA.K2抗凝作為T淋巴細胞亞群測定。使用美國Coulter公司制造BECKmancoulter EP2cs XL/FC500/Altra的流式細胞分析儀，BECKmancoulter公司生產的原裝試劑對所取標本作T淋巴細胞亞群的檢測,同一標本重復操作2次，記錄結果后取平均值。

1.4?統計學處理

數據使用PEMS 3.1統計軟件進行統計分析，實驗數據以（）表示，各組間變量比較采用單因素方差分析，多個均數間兩兩比較采用q檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2?結果

2.1?HBeAg陰、陽性兩組慢性乙肝患者的T細胞亞群及CD4計數分類比較

HBeAg陰、陽性組的總T、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD4絕對計數、CD8絕對計數與正常對照組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。組間比較，HBeAg陰性組較HBeAg陽性組具有更高的CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例和CD4+、CD8+計數，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2?慢性乙型肝炎患者輕度、中度、重度T細胞亞群及CD4計數分類比較

慢性乙型肝炎患者輕度組、中度組、重度組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例和CD4+、CD8+計數均低于正常對照組（P＜0.05），組間比較，輕度組、中度組、重度組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例和CD4+、CD8+計數逐級下降，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

3?討論

人體成熟T細胞按表型不同可分為CD3+ CD4+和CD3+ CD8+ T細胞, 這兩類細胞又簡稱CD4+ T細胞和CD8+ T細胞；按功能不同可分為輔助性T細胞（Th）、細胞毒T細胞（Tc）、介導遲發型超敏反應T細胞（TDTH）及抑制性T淋巴細胞（Ts）。其中CD4+ T細胞主要是Th細胞，而CD8+ T細胞主要是Tc細胞，因此CD4+/CD8+的比值常被臨床上作為評估機體免疫狀態的指標[1]。

HBV感染者的細胞免疫狀態在其病情發展中發揮著重要作用，不同的免疫狀態造成不同的臨床表現及病理類型。當機體細胞免疫功能正常時，可徹底清除病毒；多表現為急性肝炎，當機體細胞免疫功能低下時，病毒不能完全清除，導致慢性肝炎；當機體細胞免疫處于超敏狀態時，導致大量肝細胞壞死，發生重型肝炎。T細胞分類與機體的細胞免疫狀態有密切聯系，研究表明[2-3]，如果CD4+ T細胞的分化以Th2亞群為主，將促進體液免疫反應，并抑制細胞免疫反應，減弱CD8+ T細胞的活性，抗病毒反應被弱化，這是造成乙肝病毒感染慢性化的主要原因。進一步的研究表明[4-5]，在慢性乙型肝炎患者中，機體的免疫狀態特別是細胞免疫水平，和HBV復制活躍程度密切相關。

筆者研究發現，HBeAg陰性患者、HBeAg陽性患者與健康對照組比較均有不同程度的細胞免疫功能下降，而前兩者在CD4+細胞比例、絕對數及CD4+/CD8+比例上比較差異均有統計學意義，表現為HBeAg陰性患者具有更高的CD4+T細胞活性，且HBeAg陰性患者比HBeAg陽性患者具有更高的CD4+/CD8+ T淋巴細胞活性。因此，臨床上表現為HBeAg陰性患者病毒清除能力較強、病毒復制水平比HBeAg陽性患者明顯減弱。有研究發現[6-7]，在慢性乙型肝炎患者中，HBeAg具有特殊的免疫耐受性，它的存在是宿主對乙肝病毒形成免疫耐受的重要因素。HBeAg能誘導相關免疫細胞凋亡下調Th1細胞活性，同時激活Th2細胞反應，導致機體的細胞免疫功能下降，從而削弱宿主對HBV的抗病毒應答，影響HBV復制水平。因此筆者推測，HBeAg陰性患者可能由于缺乏免疫耐受因子HBeAg，從而誘導了相對較高的細胞免疫狀態，使得HBV DNA復制活動受到抑制。

CD4+細胞的數量和功能下降，直接導致細胞免疫功能低下。CD8+細胞毒性T細胞對清除病毒感染有重要作用，其產生依賴CD4+淋巴細胞的存在，而且CD4+細胞中的Th1通過直接對肝細胞的溶解或通過細胞因子的產生而間接使病毒清除，同時使肝臟損傷加重。本組研究結果表明，慢性乙型肝炎患者外周血總CD3+、CD4+、CD8+細胞百分比、絕對計數和CD4+/CD8+比值均低于正常對照組，并且隨病情程度加重，以上指標亦逐漸降低，提示慢性乙型肝炎患者均存在不同程度的細胞免疫功能低下，且慢性乙型肝炎患者輕度、中度、重度隨著病情程度逐漸加重，細胞免疫功能逐級下降，其中以慢性乙型肝炎（重度）下降最為顯著。有研究表明，慢性重型肝炎發病前均存在不同程度的免疫抑制，肝功能衰竭時，患者外周血T淋巴細胞發生T

細胞活化凋亡的數量明顯低于慢性乙型肝炎輕中度患者[8]，且CD8+細胞毒細胞過度活化，導致嚴重肝組織破壞。

總之，通過本研究表明T淋巴細胞亞群可反映慢性乙型患者免疫狀態，對指導免疫調節劑的使用有一定的參考價值。目前臨床上所使用的抗病毒藥物大多只能抑制病毒復制，清除病毒必須依賴機體正常免疫功能，因此消除慢性HBV感染后免疫耐受狀態，重建有效的T細胞免疫，是治療慢性乙型肝炎的關鍵。在對患者進行抗病毒治療的同時，適時輔以積極有效的免疫調節治療,可能會提高抗病毒治療療效，并且減少停藥后的復發。

[參考文獻]

[1] 邢同京，章廉，侯金林，等.慢性乙肝患者Th1/Th2應答與乙肝病毒感染單個核細胞的關[J].第一軍醫大學學報，2000，20（2）：117-119.

[2] Bertoletti A，Gehring AJ.The immune response during hepatitis B virus infection[J].J Gen Virol，2006， 87（Pt6）：1439-1449.

[3] Mizukoshi E，Sidney J，Livingston B，et al.Cellular immune responses to the hepatitis B virus polymerase [J].J Immunol，2004，173（9）：5863-5871.

[4] 金伯泉，李恩善，許輝，等.細胞和分子免疫學[M].北京：世界圖書出版社，1995：259-285.

[5] Schlaak JF，Tully G，Lohy HF，et al.HBV-specific immune defectin chronic hepatitisB（CHB）is correlated with dysregulation of pro-and anti-inflammatory cytokines[J].Clin Exp Immunol，1999，115（3）：508-514.

[6] Bozkaya H，Bozdayi M，Turkyilmaz R，et al.Cirulating IL-2，IL-10 and TNF-alpha in chronic hepatitis B: their relations to HBeAg status and the activity of liver disease[J].Hepagastroenterology，2000，47（36）：1675-1679.

[7] 邢漢前，辛紹杰，趙景民，等.HBV慢性感染患者免疫耐受期肝組織內T、B淋巴細胞的變化[J].世界華人消化雜志， 2005，13（13）：1529-1534.

[8] 季偉，王慧芬，馮傳前，等.慢性乙型肝炎患者外周血淋巴細胞凋亡的檢測及臨床意義[J].中華肝臟病雜志，1997，7：77-79.

（收稿日期：2012-03-21）