高效液相色譜法測(cè)定濕毒清膠囊中黃芩苷的含量

天津市大港藥檢所（300270）董憲鳳

濕毒清膠囊為常用復(fù)方制劑，是治療皮膚瘙癢癥的良藥。由地黃、當(dāng)歸、丹參、黃芩、蟬蛻、苦參、白蘚皮、甘草、土茯苓等9味中藥材組成。為了更加有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量，對(duì)處方黃芩中黃芩苷的含量，利用HPLC法進(jìn)行含量測(cè)定，方法操作簡(jiǎn)便易行，具有分離好、靈敏度高、穩(wěn)定性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀 LC－2010AHT，島津高效液相色譜儀工作站LC－Solution，Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：110715-200514，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；濕毒清膠囊（廣西玉林制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)為261200、261016、261025）；甲醇和磷酸為色譜純，水為純化水。

附表1 回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

附表2 濕毒清膠囊中黃芩苷的含量

2 方法和結(jié)果[1]

2.1 色譜條件[2][3][4]色譜柱為Diamonsil C18柱，流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸（52∶48∶0.2），流速為0.8ml/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm，進(jìn)樣量10ul。

2.2 對(duì)照品溶液的制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精取黃芩苷對(duì)照品10.24mg置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液，精取1ml置10ml容量瓶中，加50%甲醇溶解稀釋至刻度。進(jìn)樣量分別為6ul、8ul、10ul、12ul、14ul、16ul，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量回歸，結(jié)果黃芩苷在1.23～3.28ug范圍內(nèi)呈線性，回歸方程：f（x）=1.1x+1.9×105，r=0.9999。

2.3 樣品溶液的制備 取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，混勻，精取約0.5g，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液備用。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為20ug/ml的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣量為10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得黃芩苷峰面積的平均值為1931354，RSD=1.1%。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同批號(hào)（261200）的樣品0.5g，按樣品配制方法制備5份，進(jìn)樣量為10μL測(cè)定黃芩苷的含量，RSD=1.4%（n=5）。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一濃度的供試品溶液于不同時(shí)間測(cè)定，結(jié)果表明在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已測(cè)得黃芩苷含量的樣品，分別加入黃芩苷對(duì)照品按樣品測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定（見(jiàn)附表1）。

2.8 樣品測(cè)定 取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，按所給色譜條件分別測(cè)定峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算含量（見(jiàn)附表2）。

2.9 陰性干擾試驗(yàn) 按處方工藝制備陰性對(duì)照液，同法測(cè)定對(duì)照品溶液、樣品溶液與陰性對(duì)照溶液的色譜圖，結(jié)果表明，在此色譜條件下，黃芩苷可與其他成分基線分離，陰性組分無(wú)干擾。

3 討論

本文對(duì)樣品流動(dòng)相進(jìn)行了探索，甲醇-水-磷酸（52∶48∶0.2）、甲醇-水-冰醋酸（60∶40∶1）、甲醇-水-冰醋酸（54∶46∶0.2）、甲醇-0.4%磷酸（47∶53），試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，選用上述流動(dòng)相分離效果好。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)測(cè)定黃芩苷在波長(zhǎng)為276nm處有最大吸收峰。雖然此方法簡(jiǎn)便、易操作，具有分離好、靈敏度高、穩(wěn)定性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，但由于產(chǎn)地、采收時(shí)間等因素的影響，致使?jié)穸厩迥z囊黃芩中黃芩苷含量的測(cè)定結(jié)果存在有一定的差異，故還應(yīng)嚴(yán)格控制原料藥的質(zhì)量。