HPLC法測定松花粉中山柰酚的含量

2012-10-25 05:54:54朱彩芳酈紅巖

藥學研究 2012年12期

王正，顧蓉，朱彩芳，酈紅巖

(江蘇吉貝爾藥業有限公司，江蘇鎮江212009)

松花粉是松科植物馬尾松(Pinus massoniana Lamb.)、油松(Pinus tabuliformis Carr.)或同屬數種植物的干燥花粉，具有收斂止血，燥濕斂瘡的功效，用于外傷出血、濕疹、黃水瘡、皮膚糜爛、膿水淋漓［1］。目前國家衛生部已確認松花粉為新資源食品，并列為普通食品管理。

松花粉中含有豐富的蛋白質、脂肪、維生素、微量元素、糖類等物質，現代研究大多側重于松花粉中氨基酸、微量元素的檢測［2］，對其中的生物活性物質黃酮類成分的研究報道很少。唐雨［3］等研究發現松花粉中含有山柰酚等黃酮類化合物，但對其黃酮類化合物具體成分的定量研究報道很少，本文參考相關文獻［4～6］，對其所含的山柰酚進行了含量測定，提供了對松花粉進行質量控制的方法和依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器島津LC－10A高效液相色譜儀，LC－10ATVP泵，SPD－10AVP可見紫外檢測器;浙大智達N2000雙通道色譜工作站;Satorius CP225D電子天平;HH恒溫水浴鍋(金壇中大儀器廠)。

1.2 試藥山柰酚對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110861－200808，供含量測定用)，甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。樣品購自云南，經江蘇大學歐陽臻教授鑒定為松花粉。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Kromasil C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動相:甲醇－0.4% 磷酸溶液(65∶35);流速:1.0 mL·min－1;柱溫:30 ℃;檢測波長:360 nm;進樣 20 μL。理論板數按山柰酚峰計算應不低于2 500。

2.2 對照品溶液的制備精密稱取山柰酚對照品適量，加80%甲醇制成每1 mL含25 μg的對照品溶液，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備取本品粉末約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.4 線性關系的考察分別精密吸取一定量的山柰酚對照品儲備液(濃度為 248.7 μg·mL－1)，加 80%甲醇制成濃度為 6.220、12.435、24.870、49.740、99.480 μg·mL－1的對照品溶液，分別精密吸取20 μL注入液相色譜儀，以進樣量(μg)為橫坐標(X)，峰面積積分值A為縱坐標(Y)，進行線性回歸，計算得回歸方程為 Y=16.663X －0.035 6，r=0.999 7，結果表明山柰酚在 0.124 4 ～1.989 6 μg 范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗精密吸取2.2項下對照品溶液，依法測定，連續進樣6次，測定峰面積，RSD為1.68%，表明其精密度良好。

2.6 穩定性試驗取同一樣品供試液，分別在0、2、4、6、8 h測定山柰酚峰面積，其RSD為1.05%，表明樣品在8 h內具有良好的穩定性。

2.7 重復性試驗分別精密稱取同一批樣品6份，依法處理，測定，結果樣品中山柰酚的平均含量為2.767 mg·g－1，RSD 為1.23%。