草莓灰霉病拮抗酵母菌的篩選鑒定及對(duì)采后草莓品質(zhì)的影響

秦曉杰，許皎姣，索 娜，周海蓮，何 洋，肖紅梅

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇南京 210095)

草莓灰霉病拮抗酵母菌的篩選鑒定及對(duì)采后草莓品質(zhì)的影響

秦曉杰，許皎姣，索 娜，周海蓮，何 洋，肖紅梅*

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇南京 210095)

從南京市馬群草莓生產(chǎn)基地的草莓果實(shí)、葉片上分離篩選到一株對(duì)灰霉病具有明顯抑制效果的拮抗酵母菌N1，結(jié)合生理生化特性及26S rDNA D1/D2區(qū)序列分析鑒定其為季也蒙畢赤酵母(Pichia guilliermondii)。通過(guò)用不同濃度N1菌懸液處理打孔后的草莓，發(fā)現(xiàn)菌懸液濃度越高，抑制效果越好，最佳濃度為5×108CFU/mL，其病斑直徑比對(duì)照組小了32.3%。拮抗菌N1處理后果實(shí)于(2±1)℃、相對(duì)濕度(RH)90%～95%下冷藏，結(jié)果表明，拮抗酵母N1菌對(duì)果實(shí)酸含量無(wú)顯著影響，但能保持草莓果實(shí)的光澤和硬度，維持VC含量和可溶性固形物含量，并顯著減小了失重率，提高了草莓的冷藏品質(zhì)，從而顯著延長(zhǎng)草莓的貯藏壽命。由此推測(cè)，該拮抗酵母菌具有很好的商業(yè)應(yīng)用前景。

草莓，生物防治，季也蒙畢赤酵母，灰葡萄孢

草莓營(yíng)養(yǎng)豐富，素有“水果皇后”之稱(chēng)，但由于其組織嬌嫩多汁，果皮很薄，因而在采收和貯運(yùn)中易受到損傷和微生物侵染導(dǎo)致其腐爛變質(zhì)［1］。其中由灰葡萄孢引起的灰霉病為草莓生產(chǎn)中最主要的病害之一［2］，嚴(yán)重時(shí)可使草莓采后損失達(dá)50%以上，這直接影響了生產(chǎn)者的利益，也限制了草莓的進(jìn)一步發(fā)展。長(zhǎng)期以來(lái)，控制草莓采后病害最有效的方法仍然是使用化學(xué)殺菌劑，然而，隨著抗藥性和農(nóng)藥殘留［3］等問(wèn)題的出現(xiàn)以及人們對(duì)環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，利用拮抗微生物來(lái)控制草莓采后病害在世界各地日益普及。目前已經(jīng)分離出許多具有拮抗作用的細(xì)菌、放線(xiàn)菌和酵母菌，而許多研究表明酵母菌是一種理想的生防制劑［4］，因?yàn)樗哂心軌蚋缴谥参锷厦妫瑢?duì)植物和人類(lèi)沒(méi)有致病性且能迅速增殖、遺傳穩(wěn)定、有較強(qiáng)抗逆性等優(yōu)點(diǎn)，更容易被人們所廣泛接受。如檸檬形克勒克氏酵母(Kloeckera apiculata)對(duì)柑橘的指狀青霉(Penicillium digitatum)以及草莓和葡萄的灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的腐爛［5－6］具有明顯的防效;異常畢赤酵母(Pichia anomala)和橄欖假絲酵母(Candida oleophila)對(duì)香蕉的冠腐病［7］及蘋(píng)果的灰霉病［8］生防效果較佳;膜醭畢赤酵母 (Pichia membranaefaciens)可防治桃子的褐腐病［9］等。為了更好的利用微生物資源進(jìn)行果蔬采后病害防治，本實(shí)驗(yàn)從草莓及其葉片上分離到一株對(duì)草莓灰霉病有明顯抑制作用的酵母菌N1，結(jié)合生理生化特性和26S rDNA D1/D2區(qū)序列比對(duì)，鑒定為季也蒙畢赤酵母(Pichia guilliermondii)，研究了N1對(duì)采后草莓冷藏品質(zhì)的影響，探索了該菌種在草莓采后貯藏保鮮中應(yīng)用的可能性，以尋求一種理想、安全的方法控制草莓采后病害。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

“豐香”(Toyonoga)草莓 江蘇省南京馬群草莓種植基地;灰葡萄孢 分離自草莓果實(shí)。

YX280B型手提式不銹鋼蒸汽消毒器 上海三申醫(yī)療器械有限公司;SW－CJ－ID型單人凈化工作臺(tái)

蘇州凈化設(shè)備有限公司;NIKON顯微鏡 日本尼康;BSA124－CW電子天平 賽多利斯有限公司;移液槍(100μL、1000μL) 北京金花;SPX－150B－Z型生化培養(yǎng)箱 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠; HZQ－F160型全溫振蕩培養(yǎng)箱 太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠。

1.2 拮抗酵母菌的分離與篩選

1.2.1 拮抗酵母菌的分離純化 將10g果實(shí)樣品研磨成漿，葉片1～2片，分別加入100mL無(wú)菌水，在250r/min下充分振蕩 30min，做梯度稀釋(10－5～10－7)，各取100μL涂布于PAD平板上，28℃下培養(yǎng)2～3d，挑取特征各異的酵母菌單菌落，反復(fù)平板劃線(xiàn)分離、純化。

1.2.2 拮抗菌的篩選

1.2.2.1 離體篩選 平板對(duì)峙法:先將供試拮抗酵母菌株和病原菌分別進(jìn)行平板活化，然后采取網(wǎng)格的方式用接種環(huán)將拮抗酵母菌株接入PDA平板，同時(shí)在PDA平板中央打孔接入培養(yǎng)了7d左右的灰霉菌，28℃下培養(yǎng)5～7d，測(cè)量灰霉的直徑大小。每個(gè)處理3個(gè)平板，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

將上述有效的拮抗酵母菌株采用以上方法進(jìn)行復(fù)篩。每個(gè)處理3個(gè)平板，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.2.2 活體篩選 在草莓果實(shí)腰部用用已滅菌的打孔器打1個(gè)直徑為3mm(寬)×4mm(深)的孔，每孔注入20μL的5×108CFU/mL拮抗酵母菌懸液，以無(wú)菌生理鹽水作為對(duì)照(CK)，2h后都接種20μL的5×105spore/mL病原菌孢子懸液，室溫晾干后，果實(shí)放于一次性可降解塑料盒內(nèi)，貯藏于25℃、RH 95%的恒溫培養(yǎng)箱中。每組處理30個(gè)果實(shí)，3d后測(cè)定果實(shí)病斑直徑，計(jì)算防治效果。

1.3 拮抗酵母菌鑒定

1.3.1 菌落性狀與生理生化特征 將拮抗酵母菌接種于PDA平板上，28℃培養(yǎng)2d后觀察它的生長(zhǎng)特征和形態(tài)特征。參照文獻(xiàn)［10］鑒定菌株的生理生化特征。

1.3.2 26S rDNA序列分析鑒定［11－12］酵母菌 26S rDNA通用引物由生工生物工程(上海)有限公司合成，進(jìn)行序列測(cè)定并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.4 不同濃度酵母菌液對(duì)草莓病斑直徑的影響

拮抗酵母菌液濃度分別為 5×106、5×107、5×108、5×109CFU/mL。處理方法同1.2.2.2。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 拮抗酵母菌N1處理對(duì)草莓冷藏效果的影響將果實(shí)隨機(jī)分成兩組，一組浸漬5×108CFU/mL N1酵母菌懸液30s作為處理組，另一組浸漬生理鹽水作為對(duì)照組，分別浸漬30s。室溫晾干后，將果實(shí)放于一次性可降解塑料盒內(nèi)，貯藏于(2±1)℃、RH 90%～95%下。每隔2d觀察并測(cè)定品質(zhì)指標(biāo)。每處理500個(gè)果實(shí)，設(shè)3個(gè)平行，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.6 指標(biāo)測(cè)定方法

1.6.1 病斑直徑及防治效果 病斑直徑采用十字交叉法測(cè)量［13］，防治效果(%)=(對(duì)照病斑直徑－處理病斑直徑)/對(duì)照病斑直徑 ×100。每處理 30個(gè)果實(shí)。

1.6.2 貯藏壽命 草莓腐爛指數(shù)達(dá)15%或失重率達(dá)5%時(shí)定義為貯藏壽命結(jié)束。按下式計(jì)算草莓的貯藏壽命:貯藏壽命=Σ(草莓果實(shí)對(duì)應(yīng)的貯藏天數(shù)×果實(shí)個(gè)數(shù))/果實(shí)總個(gè)數(shù)。每處理40個(gè)果實(shí)。

1.6.3 失重率 采用稱(chēng)重法，失重率(%)=(果實(shí)原始質(zhì)量－測(cè)量時(shí)質(zhì)量)/原始質(zhì)量×100。每處理40個(gè)果實(shí)。

1.6.4 硬度 采用GY－B型果實(shí)硬度計(jì)測(cè)定。每處理30個(gè)果實(shí)，取平均值。

1.6.5 可溶性固形物 采用手持折光儀測(cè)定。每處理30個(gè)果實(shí)，取平均值。

1.6.6 色澤 采用MINOLTA CR－200色彩色差儀測(cè)定果實(shí)表皮顏色的L*、a*和b*值，隨機(jī)選取果實(shí)腰部平整處進(jìn)行測(cè)定。每處理40個(gè)果實(shí)，取平均值。

1.6.7 酸含量 采用酸堿滴定法［14］測(cè)定。每處理30個(gè)果實(shí)，取平均值。

1.6.8 VC含量 采用碘滴定法［15］測(cè)定。每處理30個(gè)果實(shí)，取平均值。

1.7 數(shù)據(jù)處理與分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理采用 SAS軟件進(jìn)行處理，采用ANOVA方差分析和鄧肯氏多重比較處理之間的差異顯著性(p=0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 篩選

2.1.1 離體篩選 將分離得到的85株菌通過(guò)網(wǎng)格平板對(duì)峙實(shí)驗(yàn)進(jìn)行離體篩選，得到對(duì)灰霉病有顯著抑制作用的酵母菌17株，其中顯示出顯著的抑制作用(p＜0.05)拮抗酵母菌為N1、PJ15、PJS5、PJS6、PJS9、 G5(見(jiàn)表1)。

2.1.2 活體篩選 將通過(guò)離體篩選得到的6株菌進(jìn)行活體篩選。通過(guò)統(tǒng)計(jì)草莓的腐爛率和病斑直徑，評(píng)價(jià)各株拮抗酵母菌對(duì)草莓灰霉病的抑制效果，結(jié)果見(jiàn)表2。從草莓上分離的N1、PJS6、PJS9在病斑直徑及發(fā)病率上都顯示出極顯著的抑制作用(p＜0.05)，但PJS6、PJS9會(huì)在草莓打孔的傷口表面形成一層白色物質(zhì)，影響外觀。而N1處理下的草莓病斑直徑為0.75cm，比CK組要小0.61cm，防治效果達(dá)到45%，對(duì)草莓灰霉病顯示出較高的抑制效果。

表1 分離的拮抗菌對(duì)灰葡萄孢的抑制Table 1 Inhibition of Botrytis cinereaby the isolated microorganisms

表2 分離的拮抗菌對(duì)草莓灰葡萄孢的抑制Table 2 Inhibition of Botrytis cinerea of strawberries by the isolated microorganisms

2.2 拮抗酵母菌N1的鑒定

2.2.1 菌落性狀與生理生化特征 酵母菌N1在PDA平板上形成的菌落(圖1A)成圓形，乳白色，表面隆起，邊緣整齊，直徑2～4mm，表面無(wú)光澤，質(zhì)地粘稠，有芳香味。菌體細(xì)胞(圖1B)呈長(zhǎng)橢圓形，出芽生殖，(3～10)μm×(1～4)μm(長(zhǎng)×寬)。具體生理生化指標(biāo)見(jiàn)表3。

綜合分析酵母菌N1的形態(tài)特征和生理生化特征，參照J(rèn).A.巴尼特等［10］的鑒定方法，初步鑒定該酵母菌是季也蒙畢赤酵母(Pichia guilliermondii)。

2.2.2 26S rDNA序列分析鑒定 將N1的測(cè)序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中上進(jìn)行同源性分析，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)(圖2)。通過(guò)比對(duì)發(fā)現(xiàn)N1與季也蒙畢赤酵母HJM(Pichia guilliermondii strain HJM)、季也蒙畢 赤 酵 母 EXOC14B (P.guilliermondiistrain EXOC14B)的同源性為99%，結(jié)合2.2.1結(jié)果，初步確定 N1 菌株為季也蒙畢赤酵母(Pichia guilliermondii)，在GenBank中登陸號(hào)為JX125041，電泳擴(kuò)增結(jié)果如圖3所示。

圖1 拮抗酵母菌N1的形態(tài)特征Fig.1 The morphological characteristic of the antagonistic yeast N1

表3 酵母菌N1的生理生化特征Table 3 Physiological and biochemical characteristics of N1 yeast strain

圖2 基于26S rDNA D1/D2區(qū)序列構(gòu)建的N1系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.2 Phylogenetic tree based on 26S rDNA D1/D2 domain sequences of N1

圖3 N1的PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.3 PCR amplification results of N1

2.3 不同濃度N1酵母菌液對(duì)草莓病斑直徑的影響

如圖4所示，使用N1酵母菌懸液處理草莓果實(shí)能有效抑制灰霉病病斑的擴(kuò)展，減輕草莓果實(shí)的腐爛，且濃度越高抑制效果越好。其中，經(jīng)5×108CFU/mL N1酵母菌懸液處理的草莓果實(shí)病斑直徑為0.90cm，比對(duì)照組1.33cm小了32.3%，對(duì)灰葡萄孢有顯著的抑制作用。而 5×108CFU/mL處理結(jié)果與5×109CFU/mL的相差不大，故選用5×108CFU/mL濃度作為最佳濃度，并用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)中。

圖4 不同濃度的N1酵母菌懸液對(duì)草莓果實(shí)灰葡萄孢發(fā)病病斑直徑的影響Fig.4 Effects of different concentrations of N1 on strawberry fruit lesion development of Botrytis cineria infection

2.4 拮抗酵母菌N1處理對(duì)草莓冷藏效果的影響

2.4.1 冷藏期間草莓果實(shí)失重率、腐爛率變化 隨著貯藏期的延長(zhǎng)，處理組與對(duì)照組的失重率均有所增加，處理組草莓果實(shí)失重率顯著低于對(duì)照組(p＜0.05)。對(duì)照組在冷藏9d后失重率開(kāi)始大幅上升，在12d時(shí)已達(dá)到10.45%。而處理組冷藏前期果實(shí)保持較好，冷藏后期失重率才開(kāi)始明顯升高，冷藏至15d時(shí)，處理組果實(shí)和對(duì)照組果實(shí)的失重率分別為4.97%和16.38%(圖5－A)。

對(duì)照組部分果實(shí)冷藏3d開(kāi)始出現(xiàn)腐爛現(xiàn)象，表現(xiàn)為外表皺縮，顏色變暗，出現(xiàn)水斑，香氣減少，部分果實(shí)霉變;而酵母菌懸液處理組只有個(gè)別果實(shí)表面有水斑現(xiàn)象，果實(shí)風(fēng)味等感官良好，且無(wú)霉變出現(xiàn)，有較好的食用和商品價(jià)值，直到9d才有明顯的腐爛現(xiàn)象。冷藏9d時(shí)，處理組和對(duì)照組腐爛指數(shù)分別為9.425%和14.65%。冷藏15d時(shí)，處理組果實(shí)和對(duì)照組的腐爛指數(shù)分別為15.55%和30.25%(圖5－B)，有顯著差異(p＜0.05)，此時(shí)的對(duì)照組大部分已經(jīng)腐爛。當(dāng)草莓腐爛率達(dá)15%或失重率達(dá)5%時(shí)定義為貯藏壽命結(jié)束，由此可知處理組和對(duì)照組草莓的貯藏壽命分別是14d和10d，拮抗酵母菌N1處理延長(zhǎng)了草莓的貯藏壽命。

圖5 冷藏期間草莓果實(shí)失重率(A)、腐爛率(B)的變化Fig.5 Changes in weight loss rate(A)，decay rate(B)during cold storage

2.4.2 冷藏期間草莓果實(shí)硬度和可溶性固形物變化 從圖6－A中可以看出，貯藏期間果實(shí)硬度開(kāi)始會(huì)有輕微上升，在貯藏9d后處理組和對(duì)照組開(kāi)始出現(xiàn)差異，處理組草莓硬度較高且略有上升，直至12d時(shí)硬度開(kāi)始下降;而對(duì)照組在貯藏9d后硬度開(kāi)始下降，與處理組區(qū)別顯著(p＜0.05)。冷藏12d時(shí)，處理組果實(shí)和對(duì)照組果實(shí)的硬度分別為2.29和1.58(圖6－A)，這說(shuō)明拮抗酵母菌N1較好地保持草莓的感官品質(zhì)。整個(gè)貯藏過(guò)程中，處理組和對(duì)照組可溶性固形物含量總體均呈下降趨勢(shì)，但對(duì)照組下降迅速而處理組變化很小，在冷藏6～9d處理組可溶性固形物略微上升波動(dòng)。冷藏9d后兩組可溶性固形物含量開(kāi)始出現(xiàn)差異(圖6－B)，對(duì)照組迅速下降而處理組開(kāi)始上下波動(dòng)。這說(shuō)明酵母菌懸液處理能夠在一定程度上保持草莓冷藏期間的可溶性固形物含量。

圖6 冷藏期間草莓果實(shí)硬度(A)、可溶性固形物(B)的變化Fig.6 Changes in Firmness(A)，Soluble solids content(B)during cold storage

圖7 冷藏期間草莓果實(shí)顏色L*、a*和b*值的變化Fig.7 Changes of fruit color (L*，a*and b*values)during cold storage

2.4.3 冷藏期間草莓果實(shí)色澤變化 由于草莓果實(shí)采摘時(shí)只有七八成熟，冷藏過(guò)程中，隨著草莓果皮中葉綠素被分解和花青素積累，果實(shí)明度和顏色會(huì)有所變化。總的來(lái)說(shuō)，從圖7可以看出，對(duì)照組和處理組L*值均顯出下降趨勢(shì)，但處理組的效果較好，L*值下降緩慢。前6d處理組和對(duì)照組L*值基本保持不變，第9d開(kāi)始產(chǎn)生分歧，對(duì)照組L*值開(kāi)始隨貯藏時(shí)間呈顯著下降趨勢(shì)，草莓顏色變暗，嚴(yán)重影響商品價(jià)值，處理組與空白組趨勢(shì)一致，但變化較小(p＞0.05)。由此可見(jiàn)酵母菌懸液處理能在一定程度上保持草莓的光澤。處理組和對(duì)照組的a*和b*值差異不顯著(p＞0.05)，均隨貯藏時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增大，這說(shuō)明果皮顏色逐漸轉(zhuǎn)紅轉(zhuǎn)黃，酵母菌懸液處理對(duì)草莓果皮的顏色變化沒(méi)有太大影響。

2.4.4 冷藏期間草莓果實(shí)酸含量和VC含量的變化由圖8－A可知，在貯藏期間，酸含量總體呈下降趨勢(shì)。處理組與對(duì)照組相比相差不大，這說(shuō)明拮抗酵母菌并未顯著提高草莓的風(fēng)味。由圖8－B可知，在貯藏期間，VC含量呈下降趨勢(shì)。處理組的最大損失率為36.0%，小于對(duì)照組的43.3%，VC損失率較小。這說(shuō)明拮抗酵母菌一定程度上保存了草莓的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，但是并未產(chǎn)生顯著效果。

圖8 冷藏期間草莓果實(shí)可滴定酸含量(A)、VC含量(B)的變化Fig.8 Changes of content of titratable acid(A) and VC(B)during cold storage

3 結(jié)果與討論

3.1 本實(shí)驗(yàn)主要是通過(guò)離體和活體結(jié)合進(jìn)行拮抗酵母菌的篩選，在離體實(shí)驗(yàn)中N1防效要低于PJS9、PJ15、G5，但在活體實(shí)驗(yàn)時(shí)N1卻表現(xiàn)出較好的拮抗效果，這可能由于在離體實(shí)驗(yàn)中，酵母菌占領(lǐng)營(yíng)養(yǎng)和空間的速度低于病原菌菌絲的蔓延速度;但在果實(shí)傷口做拮抗實(shí)驗(yàn)時(shí)，酵母菌只要占領(lǐng)傷口的營(yíng)養(yǎng)和空間就能有效控制病菌的生長(zhǎng)。對(duì)于果蔬病害生防菌的篩選，一般都根據(jù)離體實(shí)驗(yàn)進(jìn)行篩選［16］，但許多研究表明，平板篩選與其實(shí)際的拮抗效果可能沒(méi)有必然的聯(lián)系［17－18］，本實(shí)驗(yàn)就先通過(guò)離體實(shí)驗(yàn)篩選出拮抗效果較佳的6株菌，然后在草莓進(jìn)行驗(yàn)證，最終得到了防效較好的拮抗酵母菌N1。

3.2 利用傳統(tǒng)的生理生化特性分析結(jié)合26S rDNA D1/D2序列分析對(duì)拮抗酵母菌N1的分類(lèi)地位進(jìn)行了研究，確定N1為季也蒙畢赤酵母。季也蒙畢赤酵母在蘋(píng)果、柑橘、梨、草莓［19－20］等水果用于抑制灰霉、青霉、綠霉、根霉等病害的防治已被廣泛的報(bào)道，以往文獻(xiàn)有幾例草莓灰霉病生防菌篩的報(bào)道，但篩選到一株對(duì)草莓灰霉病具有明顯防效的季也蒙畢赤酵母較少報(bào)道。

3.3 拮抗酵母菌N1菌懸液處理對(duì)草莓的冷藏品質(zhì)有積極的作用，雖對(duì)草莓風(fēng)味沒(méi)有產(chǎn)生顯著變化，但處理過(guò)的草莓貯藏壽命顯著延長(zhǎng)，失重率和腐爛率顯著減小，果實(shí)硬度和可溶性固形物含量得到較好的維持，草莓果實(shí)也保持了較好的光澤。這可能是由于季也蒙畢赤酵母能夠很好地定殖在草莓上面，分泌β－1，3－葡聚糖酶和幾丁質(zhì)酶等在內(nèi)的胞外溶解酶來(lái)與病原菌爭(zhēng)奪養(yǎng)分和空間［21］，控制果蔬的發(fā)病率，減少了腐爛率。Wisniewski等［22］證明了季也蒙畢赤酵母能夠吸附在灰霉的菌絲細(xì)胞壁上，改變灰霉某些糖類(lèi)和蛋白質(zhì)的完整性。Zhao Yan和Dianpeng Zhang的研究也表明了季也蒙畢赤酵母能誘導(dǎo)寄主包括過(guò)氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸氨(PAL)酶和β－1，3－葡聚糖酶等酶［23－24］的活性，這些酶［25］能夠?qū)Ｒ恍缘那宄唧w內(nèi)的活性氧或者阻止它們的產(chǎn)生，同時(shí)參與果蔬體內(nèi)酚類(lèi)物質(zhì)、植保素、木質(zhì)素等多種抗性物質(zhì)的合成，從而延緩了果蔬硬度的下降，提高了抗病性，保證了果蔬的色澤及營(yíng)養(yǎng)成分，最終起到保護(hù)果蔬的作用。

3.4 通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)可以推測(cè)出該拮抗酵母菌具有很大的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用前景。但本研究只是對(duì)拮抗酵母菌的篩選鑒定以及對(duì)冷藏品質(zhì)的影響做了簡(jiǎn)單的研究，要真正應(yīng)用于實(shí)踐，達(dá)到化學(xué)防治的效果，還需要將其與其他外源物質(zhì)結(jié)合處理，如殼聚糖、金屬鹽類(lèi)、植物激素、氨基酸等［26－28］，以達(dá)到提高酵母菌防治效果的目的，這些還有待更加深入的研究，而關(guān)于田間防效及商業(yè)化產(chǎn)品開(kāi)發(fā)也需要進(jìn)一步的探索。

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Screening and identification of antagonistic yeast against the gray mould disease and effect on quality of postharvest strawberry

QIN Xiao－jie，XU Jiao－jiao，SUO Na，ZHOU Hai－lian，HE Yang，XIAO Hong－mei*
(College of Food Science and Technology，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，China)

The antagonistic yeast N1 with a high ability of inhibiting the gray mould(Botrytis cinerea)disease on strawberry was isolated from the strawberry fruits and leaves in Nanjing Maqun with in vitro and in vivo methods.This strain was preliminarily identified asPichia guilliermondiibased on the similarity analysis of its physiologicalbiochemical characteristics and 26S rDNA D1/D2 domain sequence.Pretreatment with different concentrations of N1 could decrease the incidence of rot on postharvest strawberry after inoculation with pathogenic fungiBotrytis cinerea.The result showed that the higher concentration of N1，the inhibition effect on the gray mould disease was better.The best inhibition concentration of N1 was 5×108CFU/mL which could decrease the incidence of rot to 32.3%，compared with rot only inoculating with pathogenic fungi.Postharvest strawberries treated with the antagonist were stored at(2±1)℃ with RH 90%～95%，the results showed that the antagonist treatment had little effect on acid content，but could maintain fruit luster，firmness，soluble solid and vitamin C content，also reduce weight loss rate remarkably and extend storage life.These results revealed a potential commercial application of N1 as an antagonist for controlling the fruit postharvest diseases.

strawberry;biological control;Pichia guilliermondii;Botrytis cinerea

TS205.9

A

1002－0306(2012)21－0330－07

2012－03－29 *通訊聯(lián)系人

秦曉杰(1990－)，女，碩士研究生，研究方向:食品科學(xué)。

江蘇省科技計(jì)劃項(xiàng)目(BE2010385);國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目(GJ0724);南京農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)業(yè)項(xiàng)目(1008cy12)。