nm23-H1基因與非小細胞肺癌轉移的關系

周 霖

深圳市光明新區人民醫院外科，廣東深圳 518106

nm23-H1基因與非小細胞肺癌轉移的關系

周 霖

深圳市光明新區人民醫院外科，廣東深圳 518106

目的探討nm23-H1基因表達與非小細胞肺癌轉移的關系。方法選擇筆者所在醫院2006年2月～2011年10月收治的肺癌手術患者46例，應用免疫組織化學SABC方法對46例NSCLC組織標本進行nm23-H1表達的檢測。結果46例NSCLC中nm23-H1過度表達為50%（23/46），其中鱗癌nm23-H1過度表達為47.62%（10/21），腺癌為58.33%（7/12），兩者比較差異有統計學意義（P＜0.05）；nm23-H1的陽性表達與淋巴結轉移呈負相關（P＜0.01）。結論nm23-H1可作為預測NSCLC淋巴結轉移及預后的指標。

非小細胞肺癌；nm23-H1；免疫組織化學；轉移

nm23基因是目前研究較多的轉移抑制基因，包括nm23-H1和nm23-H2。nm23編碼的產物具有抑制腫瘤轉移的功能，nm23在分化良好的腫瘤中成高水平表達，且nm23基因表達與淋巴轉移成負相關，與無病生存期、整個生存期呈正相關。所以臨床檢測nm23基因表達高低可作為判斷有無腫瘤轉移的一個重要目標。

1 材料與方法

1.1 組織標本

選取筆者所在醫院2006年2月～2011年10月收治的肺癌手術標本、臨床及隨訪資料齊備的患者46例，其中，男34例，女12例；年齡33～84歲，平均（62.5±3.2）歲；其中鱗癌21例，腺癌12例，大細胞癌5例，小細胞癌8例。標本以10%福爾馬林固定，石蠟包埋，肺癌組織學類型按WHO標準分類[1]，組織病理學分級按國際抗癌聯合會（UICC）標準[2]。

1.2 PCR引物

根據 Gen Bank Database（ACCESSION X75598）提供的nm23-H1基因全序列，組織DNA根據常規的方法進行提取并有所改進。參考Duenas等[3]的方案，設計擴增nm23-H1基因5個外顯子的引物。見表1。

表1 擴增nm23-H1基因外顯子的PCR引物

1.3 PCR擴增

PCR反應系統組成為：5 μL 10×反應緩沖液，5 μL 2 mmol/L 4×dNTP（Sigma產品），2 μL 2 mmol/L 上游及下游引物，100 ng模板DNA，2.5 UTaq酶（華美生物工程公司），加超純水至50 μL。循環條件為：94℃變性1 min，60～64℃退火1 min，72℃延伸1 min，循環30次。

2 結果

2.1 nm23-H1基因缺失與肺癌病理生理的關系

46例肺癌組織標本中14例占30.43%，存在nm23-H1等位基因缺失，均為雜合性缺失，未見純合性缺失。14例中12例為EcoRⅠ和BglⅡ酶切雜交帶均有缺失，2例僅有BglⅡ酶切雜交帶缺失，46例癌旁肺組織標本未檢測到nm23-H1基因缺失。nm23-H1陽性顆粒主要位于胞漿中。見圖1。

46例NSCLC中nm23-H1過度表達為50%（23/46），其中鱗癌nm23-H1過度表達為47.62%（10/21），腺癌為58.33%（7/12），兩者比較差異有統計學意義（P＜0.05），在SCLC中未見有nm23-H1表達。本研究中nm23-H1等位基因缺失與肺癌原發腫瘤大小、部位、病理類型、細胞分化程度、TNM分期以及患者性別和年齡均無明顯關系（P＞0.05）。nm23-H1等位基因缺失與肺癌病理生理特征的關系見表2。

圖1 nm23-H1在肺中分化腺癌胞漿、核膜中呈陽性表達（ABC×200）

2.2 nm23-H1等位基因缺失與肺癌轉移的關系

46例中16例伴有淋巴結轉移，其中10例占62.5%存在nm23-H1等位基因缺失；不伴淋巴結轉移的30例中，僅4例占13.3%存在等位基因缺失。兩組比較差異有統計學意義（P＜0.01）。見表3。

表2 nm23-H1基因缺失與肺癌病理生理的關系

表3 nm23-H1基因缺失與肺癌轉移的關系

3 討論

nm23-H1等位基因缺失在不同的腫瘤存在較大差異。相關報道[4]在人乳腺癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、腎癌和大腸癌中nm23-H1等位基因缺失率為33.3%、25%、8%和12.5%。本研究中46例NSCLC癌中14例檢測出nm23-H1等位基因缺失，缺失率為30.43%，略高于Leone等的報道。這可能是經兩種酶切后檢測到的nm23-H1等位基因缺失率較用一種酶切的缺失率高的結果。nm23-H1常由于等位基因缺失，低表達及突變而失活，功能或（和）結構異常的nm23-H1基因常與腫瘤的轉移表型有關，如乳腺癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤和卵巢癌等[5]。筆者檢測46例NSCLC標本，共檢測到14例占30.43%存在nm23-H1等位基因缺失，觀察到nm23-H1等位基因缺失與肺癌轉移有密切關系。

[1]洪雷，崔雅靜，姜達，等.胸苷酸合成酶多態性與非小細胞肺癌易感性及淋巴結轉移的關聯性研究[J].河北醫藥，2011，33（24）：3744-3746.

[2]鄭海霞，申東蘭，周清華，等.nm23-H1基因逆轉肺癌細胞轉移表型的功能鑒定 [J].北京大學學報（醫學版），2005，V37（3）：335-336.

[3]Duenas Gonzalez A，Abad Hernandez MM，Garria Mata J，et al.Analysis of nm23-H1 expression in breast cancer. Correlation with p53 expression and clinicopathologic findings[J].Cancer Lett，1996，101（2）：137-142.

[4]黃宗海，蘇國強，毛乾國，等.血管內皮生長因子與nm23-H1基因在青年女性乳腺癌組織中的表達及其與預后之間的關系[J].第一軍醫大學學報，2004，24（12）：1398-1401.

[5]梅同華，李長毅，黃愛龍.非小細胞肺癌nm23-H1等位基因缺失與淋巴結轉移關系的研究[J].第三軍醫大學學報，2005，6（12）：1266-1268.

R734.2

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2095-0616（2012）12-36-02

2012-04-17）