復方甘草酸單銨注射液家兔體內藥代動力學研究

邵益丹，莊讓笑，席建軍，方紅英，王福根

(浙江中醫藥大學附屬第六醫院，浙江 杭州 310014)

甘草酸是甘草的有效成分，甘草酸單銨屬甘草有效成分的第2代提取物，具有較強的抗炎、保護肝細胞膜以及改善肝功能的作用[1]。復方甘草酸單銨注射液是我院的特色制劑，臨床上用于治療病毒性肝炎和各種肝臟損傷。筆者建立測定家兔體內甘草酸單銨血藥濃度的反相高效液相色譜法，并對數據進行計算分析，得到其在家兔體內的藥代動力學參數[1]，為復方甘草酸單銨注射液的進一步研究提供依據。

1 儀器與試藥、動物

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);高速低溫冷凍離心機(上海市離心機械研究所);XW-80A型漩渦混合器(上海醫大儀器廠)。甘草酸單銨標準品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110731-201013);甘草酸單銨(西安富捷藥業有限公司，批號為20091105);甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。新西蘭大耳白家兔，體重為2.0～3.0 kg，由浙江省醫學科學研究院提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱:Eclipse XDB-C18柱(150mm×4.6mm，5μm);流動相:0.01 mol/L磷酸-乙腈(60∶40);柱溫:30℃;流速:1.0 mL/min;檢測波長:252 nm。在此條件下，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液配制

精密稱取甘草酸單銨0.5 g，置250 mL輸液瓶中，加水60 mL溶解，根據復方甘草酸單銨注射液處方配制，調節pH至7.0，加水至100 mL，即得甘草酸單銨溶液。

2.3 血漿樣品處理[2]

精密吸取0.1 mL家兔血漿，置1.5 mL尖底離心管，加入0.4 mL甲醇，漩渦振蕩1 min，混合均勻，10 000 r/min離心15 min，取上清液，用氮氣吹干，加流動相0.1 mL溶解，取20μL進樣。

2.4 方法學考察

血漿標準曲線制備:精密稱取甘草單酸銨標準品100 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并定容至刻度，即得標準品貯備液(質量濃度為1 000 mg/L)，將貯備液依次稀釋成1 000，500，400，200，100，50，25，10，5 mg/L 的標準溶液。精密吸取標準溶液各0.1 mL，加入到0.1 mL血漿中，漩渦振蕩1 min，混合均勻，按2.3項下自“加入0.4 mL甲醇”起處理后，以甘草酸單銨質量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=12.448 X-30.069，r2=0.999 6(n=9)。結果表明，甘草酸單銨質量濃度在5～1 000 mg/L范圍內與峰面積線性關系良好。

回收率試驗:取空白血漿0.1 mL，分別加入1 000，100，5 mg/L甘草酸單銨標準溶液0.1 mL，每個濃度平行5份，按2.3項下自“加入0.4 mL甲醇”起處理后，測定峰面積，將血樣峰面積代入回歸方程計算回收率。結果見表1。

表1 回收率試驗結果(n=5)

精密度試驗:取空白血清0.1 mL，加入質量濃度為1 000，100，5 mg/L甘草酸單銨標準溶液0.1 mL，每個濃度平行3份，依法處理后放4℃冰箱內保存。日內重復測定5次，連續測定5 d，計算日內精密度及日間精密度。結果日內 RSD分別為0.93%，2.15%和3.66%;日間 RSD分別為1.33%，3.90%和5.11%。

穩定性試驗:取質量濃度為1 000，100，5 mg/L甘草酸單銨標準品溶液0.1 mL，加入到0.1 mL空白血漿中，按2.3項下自“加入0.4 mL甲醇”起處理后，分別于1，2，5，10 d進樣測定。結果峰面積的 RSD分別為1.26%，2.49%，2.91%，2.56%。

2.5 血藥濃度與藥代動力學參數測定

取復方甘草酸單銨注射液，按50 mg/kg劑量于家兔耳緣處靜脈注射，分別于 0.5，1，2，3，4，8，10，12，18，24 h 時取靜脈血，30 min內分離血漿，按2.3項下自“精密吸取0.1 mL血漿”起處理，將得到的峰面積代入標準曲線計算濃度，數據用DAS藥動學程序處理，求得藥動力學參數[3]。

靜脈注射后甘草酸單銨在體內最大血藥濃度(Cmax)為(470.3±85.9)mg/L、達峰時間(Tmax)為(30.1±16.2)min，0～∞藥時曲線下面積(AUC0～∞)為(95 752.4±5 781.5)mg/(L·min)，0～ t藥時曲線下面積(AUC0～t)為(83861.1 ±4 518.9)mg/(L·min)，清除率(CLz)為(0.000 8±0.000 2)L/(min·kg)，表觀分布容積(Vz)為(0.19±0.03)L/kg，半衰期(t1/2z)=(145.3±35.3)min。

3 討論

筆者比較了甲醇、乙腈和三氯乙酸沉淀蛋白的效果，結果甲醇沉淀蛋白后，甘草酸單銨峰形以及保留時間比較理想。本試驗建立的反相高效液相色譜法測定甘草酸單銨的血藥濃度，樣品處理簡單，專屬性高，線性范圍包括了所有體內血藥濃度實測數據點，高、中、低3個質量濃度水平的回收率均大于90%，日內及日間變異均小于10%，達到了生物樣品測定的要求[4]。

[1]李松龍.甘草酸二銨胃內滯留漂浮型緩釋片兔體內藥動學[J].中國醫院藥學雜志，2008，28(13):1 079-1 082.

[2]孫 黎，曹惠明，沈金芳，等.靜滴異甘草酸鎂注射液的人體藥代動力學研究[J].中國藥理學通報，2005，21(11):1 348-1 351.

[3]孫曼春，方世平，王智勇，等.鹽酸左氧氟沙星在健康人體內的藥代動力學研究[J].中國藥業，2010，19(3):5-6.

[4]付志玲，劉春芝，房敏峰，等.雙丹方中丹皮對丹參藥代動力學的影響[J]. 中成藥，2010，20(1):127-130.