高效液相色譜法測(cè)定小兒至寶丸中橙皮苷含量

馬 侖，韓慧琴

(1.河北省張家口市第四醫(yī)院，河北 張家口 075061; 2.河北省張家口市藥品檢驗(yàn)所，河北 張家口 075061)

小兒至寶丸是2005年版《中國(guó)藥典(一部)》[1]收載品種，處方由陳皮、紫蘇葉、廣藿香、薄荷等25味藥組成，具有疏風(fēng)鎮(zhèn)驚、化痰導(dǎo)滯的功能，用于小兒風(fēng)寒感冒、停食停乳、發(fā)熱鼻塞、咳嗽痰多、嘔吐泄瀉的治療。方中陳皮的主要成分橙皮苷具有較強(qiáng)的抗炎作用，還能抑制胃腸平滑肌收縮，緩解胃腸積滯[2]。為更好地控制小兒至寶丸的質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法，對(duì)橙皮苷的含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695-2996型高效液相色譜儀(美國(guó));Shimadzu UV-2450型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本);Mettler AE 163型電子天平(瑞士)。橙皮苷對(duì)照品(含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110721-200512);小兒至寶丸(北京同仁堂股份有限 公 司 ，批 號(hào) 分 別 為 8015172，8015167，8015002，8015165，7015441);陰性樣品自制;乙腈和甲醇為色譜純，水為去離子水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Capcell pak-C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(12∶14∶74);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):284 nm;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:10μL。

2.2 溶液制備

取橙皮苷對(duì)照品0.011 31 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置50 mL容量瓶用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取小兒至寶丸適量，剪碎，混勻，取約1 g，精密稱(chēng)定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，加熱回流30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液過(guò)0.45μm微孔濾膜，即得供試品溶液。按處方比例制備缺陳皮藥材的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法操作，即得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn):分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見(jiàn)圖1。可見(jiàn)，對(duì)照品溶液有較好峰形，供試品溶液中的橙皮苷峰能與其他雜質(zhì)峰獲得較好分離，分離度大于1.5。陰性對(duì)照品溶液在與對(duì)照品溶液峰相應(yīng)的保留時(shí)間未出現(xiàn)雜質(zhì)峰，無(wú)干擾，表明方法專(zhuān)屬性強(qiáng)。

線(xiàn)性關(guān)系考察:分別精密吸取對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為0.226 2 g/L)10，5，2μL 和稀溶液(質(zhì)量濃度為0.022 62 g/L)10，5，1 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，以橙皮苷峰面積積分值對(duì)橙皮苷對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程 Y=1 784 168X+7 555.5，r=0.999 98(n=6)。結(jié)果表明，橙皮苷進(jìn)樣量在0.02～2.2μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果橙皮苷峰面積的 RSD為0.98%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，照上述方法和色譜條件，分別在 0，1， 2，3，4，10，15，20，24 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果橙皮苷峰面積的 RSD為1.3%(n=9)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào)為8015172)適量，研細(xì)，混勻，取0.8，1.0，1.2 g各3份，精密稱(chēng)定，依法制成供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果樣品的平均含量為1.243 mg/g，RSD為0.68%(n=9)。

加樣回收試驗(yàn):精密稱(chēng)取已知含量的樣品(橙皮苷含量為1.243 mg/g)0.5 g，每2份為1組，分別用質(zhì)量濃度為0.007 63，0.012 71，0.013 81 g/L的橙皮苷對(duì)照品甲醇溶液代替甲醇，按2.2項(xiàng)下的方法操作，制成供試品溶液，按擬訂的色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取5批小兒至寶丸，按2.2項(xiàng)下的方法操作，制成供試品溶液，按擬訂的色譜條件測(cè)定，計(jì)算樣品含量，結(jié)果在1.24～1.97 mg/g之間。

2.5 耐用性試驗(yàn)

取同一批樣品(批號(hào)為8015002)適量，研細(xì)，混勻，精密稱(chēng)定適量，按2.2項(xiàng)下方法操作，制成供試品溶液，選用不同廠家的色譜柱[Capcell PakC18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)Waters SymmetryshieldTMRP18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)]按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果的RSD為0.4%，表明該方法耐用性好。

3 討論

本試驗(yàn)在參考文獻(xiàn)[3-6]的基礎(chǔ)上對(duì)色譜條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，選用甲醇-乙腈 -0.1%磷酸溶液(12∶14∶74)為流動(dòng)相，結(jié)果峰純度、峰形、分離度均比較好。

橙皮苷為黃酮類(lèi)化合物，分子中含有酚羥基，顯酸性，為了使峰形對(duì)稱(chēng)，不出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，流動(dòng)相中加入了小濃度磷酸，結(jié)果表明峰形對(duì)稱(chēng)、分離度高。

本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，可用于小兒至寶丸的質(zhì)量控制。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:132.

[2]張冬松，高慧媛，吳立軍.橙皮苷的藥理活性研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2006，8(7):25-26.

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[6]韓 海.反相液相色譜法測(cè)定胃腸康顆粒劑中橙皮苷的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17(3):367-368.