夏桑菊顆粒快速檢驗方法探討

汪文峰(天門市黃潭鎮衛生院藥劑科，湖北 天門 431700)

周 芳(十堰市中醫醫院藥劑科，湖北 十堰 442011)

陳銀華(十堰市食品藥品監督檢驗所，湖北 十堰 442000)

夏桑菊顆粒快速檢驗方法探討

汪文峰(天門市黃潭鎮衛生院藥劑科，湖北 天門 431700)

周 芳(十堰市中醫醫院藥劑科，湖北 十堰 442011)

陳銀華(十堰市食品藥品監督檢驗所，湖北 十堰 442000)

目的：建立夏桑菊顆粒的快速檢驗方法。方法：對4批不同廠家、批號的夏桑菊顆粒進行實驗，在衛生部中藥成方制劑收載的檢驗標準的基礎上對鑒別項化學反應及薄層色譜提取方法、溶劑和展開系統進行了改進。結果：改進后的檢驗方法簡便、快速，經濟、環保，結果更加明顯。結論：該方法適合于夏桑菊顆粒的快速篩查。

夏桑菊顆粒；快速檢驗；熊果酸

夏桑菊顆粒收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第15冊，具有清肝明目、疏風散熱、除濕痹、解瘡毒的功能。用于風熱感冒、目赤頭痛、高血壓、頭-暈耳鳴、咽喉腫痛、疔瘡腫毒等癥狀，并可作清涼飲料[1]。處方為夏枯草500g、桑葉175g、野菊花80g，經加工制成1000g顆粒，夏枯草為主藥。筆者在原檢驗標準的基礎上，對夏桑菊顆粒的快速檢驗方法進行了探討。

1 材料與試劑

共收集4個廠家的4批樣品：四川金藥師制藥有限公司，批號：090501；四川菲德力制藥有限公司，批號：100308；太極集團四川綿陽制藥有限公司，批號：55100019；四川蜀中制藥有限公司，批號：090104。

陰性對照用野菊花藥材：亳州宏宇飲片廠，產地湖北，批號100813；桑葉：亳州市永剛飲片廠，產地湖北，批號091227。

熊果酸對照品：中國藥品生物制品檢定所，批號742-8701，鑒別用。硅膠G薄層預制板購自青島海洋化工廠分廠。試驗所用試劑均為分析純。

2 方 法

2.1鑒別一的改進

原標準收載方法：取本品5g，置乳缽中研細，移至錐形瓶中，加乙醇25ml，置水浴上微熱半小時，濾過，濾液置蒸發皿中，置水浴上蒸干，滴加三氯化銻飽和的氯仿溶液，再蒸干，即顯紫褐色。

改進后的方法：取本品20g，研細，加乙醇約15～20ml(以控制濾液約2ml為度)，研磨5min，濾過，取濾液1～2滴，點于濾紙上，吹干，加三氯化鋁試液1～2滴，吹干，置紫外光燈(365nm)下觀察，顯黃綠色熒光。

2.2鑒別二的改進

原標準收載方法：取樣品20g置于磨口三角燒瓶中，加水100ml，鹽酸15ml，置水浴中加熱回流2h，取出，濾過，棄去濾液，殘渣揮干，用乙醚振搖提取3次，每次25ml，合并乙醚提取液，回收盡乙醚，殘渣用乙醚2ml溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15μl、對照品溶液2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶5∶8∶0.5)為展開劑，展開，取出，涼干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

改進后方法的不同處如下：取本品20g，研細，加乙醇約15～20ml(以控制濾液約2ml為度)，研磨5min，濾過，濾液作為供試品溶液。展開劑改為環己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶0.5)。噴顯色劑后，熱風吹至斑點顯色清晰。其它同原標準。

2. 3陰性對照溶液的制備

按樣品的制備工藝，從中除去夏枯草藥材，制得陰性樣品，同供試品溶液的制備方法制得陰性對照溶液。

3 鑒別試驗結果

3.1鑒別一改進試驗結果

按改進后的方法，鑒別一改進試驗結果見圖1。

圖1 鑒別一改進試驗結果

3.2鑒別二改進試驗結果

按改進后的方法，對收集到的4批夏桑菊顆粒和自制的陰性對照溶液進行實驗，結果斑點清晰，易于辨別，陰性無干擾，能滿足快速檢驗的要求。見圖2。

圖2 鑒別二改進試驗結果

4 討 論

4.1在鑒別一中改用三氯化鋁反應

在原標準鑒別一中，三氯化銻反應主要是用于在無水條件下檢測萜類、甾體和黃酮類化合物，屬通用型顯色劑，專屬性相對較差。另外，三氯化銻高毒且有強腐蝕性，遇水強烈反應產生氯化氫并生成不溶于水的三氧化二銻，粘附于玻璃器皿壁，試驗完成后不易清洗。夏枯草果穗中主要含熊果酸、齊墩果酸和β-香樹脂醇等三萜類化合物，其中熊果酸含量較高。夏桑菊顆粒的三味藥中均含有較多黃酮及其苷類成分，桑葉中含有蕓香苷、槲皮素、異槲皮苷等，野菊花中含有刺槐素、木犀草素及其苷類等，夏枯草中含有蘆丁、異槲皮苷、木犀草素、夏枯草苷等[2]。因此筆者將鑒別一改為三氯化鋁反應，用于檢測黃酮類化合物更有針對性。該方法操作簡便快速，反應明顯，空白無干擾，重現性好。

4.2鑒別二中薄層鑒別提取溶劑及方法的選擇

按中藥成方制劑中的方法制備供試品，加鹽酸處理后的樣品，棄去濾液，殘渣含大量水，很難揮干。用乙醚振搖提取，不易提取充分，而且合并的乙醚提取液因含有水分而不易蒸干，容易導致最后制得的供試品溶液中熊果酸含量偏低，薄層層析后供試品色譜中，在與熊果酸對照品色譜相應的位置上，無斑點出現或僅限淡黃色斑點，需加大數倍的點樣量才能出現與熊果酸對照品色譜相應的紅色斑點。而且殘渣最后用2ml乙醚溶解作為供試品溶液，乙醚沸點低，揮發快，使點樣量不易控制，污染大。

為了篩選出簡便快捷環保的提取方法，比較了乙醚超聲提取[3]、無水乙醇超聲提取[4]、乙醇超聲提取和乙醇研磨提取等方法，幾種方法差異不大，考慮快速、簡便的原則，我們采取研磨的方法。在溶劑的選擇上，綜合考慮廉價、易得、環保、方便的原則，最終選擇乙醇作為提取和定容溶劑。

提取溶劑加入量的選擇：現行國家標準多采用充分加入溶劑提取，濾液蒸干,定量溶解的辦法解決這一問題，而運用于快檢中，顯然過于煩瑣。為此,提出了控制濾出量的思路，根據樣品的實驗情況，給出一定的加液范圍，控制濾出量在2ml左右，從而控制供試品溶液的濃度相對穩定[5]。在實際操作過程中，研磨后靜置一會兒，取上清液部分過濾，較容易濾出。

4.3展開劑的選擇

實驗比較了環己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶5∶8∶0.5)[1]、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)[6]、異辛烷-苯-氯仿-醋酸乙酯-甲酯(6∶3∶1.5∶3∶0.5)[3]、環己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶0.5)等展開劑，展開效果均較好。研究過程充分考慮到環保要求，決定在原標準的展開系統基礎上進行微調，除去氯仿，調節展開劑組分比例，最終確定展開劑為環己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶0.5)，系統展開速度快，而且也符合環保要求，并且Rf值適中，斑點清晰，易于辨別，重現性好。

[1]中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準——中藥成方制劑[S]. 15冊. 1997：164.

[2]肖培根. 新編中藥志[M]. 北京：化學工業出版社，2008：483.

[3]趙霞，尚桂麗. 夏桑菊顆粒薄層鑒別提取方法的改進[J]. 現代醫藥衛生，2009，25(5)：695-696.

[4]肖東華，呂越. 夏桑菊顆粒有效成分測定中薄層色譜鑒別法的改進[J]. 河南中醫學院學報，2003，18(4)：34-35.

[5]薛玉梅，黃麗丹，王鼎. 六味地黃丸系列中成藥快檢方法研究[J]. 藥物分析雜志，2009，29(2)：282-284.

[6]劉莉，張翔. 降糖寧膠囊薄層鑒別方法的研究[J]. 黑龍江醫藥，2007，20(1)：18-19.

[編輯] 一 凡

R282.7

A

1673-1409(2012)04-R069-03

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.04.034

2012-02-26

汪文峰(1977-)，男，湖北天門人，主管中藥師，主要從事醫院中藥學工作。