葛根總黃酮口服自微乳載藥系統的處方優化

陳 倩 陳 晨 管清香 (吉林大學藥學院，吉林 長春 130021)

自微乳化給藥系統(SMEDDS)是由藥物、油相、表面活性劑和助表面活性劑組成的混合物，在溫和攪拌或胃腸道蠕動下，自發形成粒徑小于100 nm的O/W型微乳，能提高脂溶性藥物的生物利用度，是新型、有效的口服給藥系統〔1〕。葛根總黃酮為中藥葛根(Radix Pueraiae)的有效部位，具有抗心絞痛、降血壓、降低心肌耗氧量、改善缺血、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用，尤其在治療心腦血管疾病方面療效確切，安全性較高〔2〕。但其親水性和親油性均較差，口服給藥后，生物利用度很低，在很大程度上限制了其應用。將葛根總黃酮制成自微乳制劑可改善其溶解度，提高生物利用度。本實驗以自乳化時間、粒徑大小為指標，篩選葛根總黃酮自微乳的最佳處方。

1 材料與方法

1.1 儀器 SK-1型快速混勻器，HH-2數顯恒溫水浴鍋，THZ-82水浴恒溫振蕩器(金壇市江南儀器廠);AB204-N電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);Malvern Nano-ZS型激光粒度分析儀(英國馬爾文儀器有限公司);Shmisadezu LC-10A Tvp高效液相色譜儀(日本島津)。

1.2 試劑 中鏈甘油三酯(MCT，德國利寶益公司);油酸乙酯(天津市光復精細化工研究所，分析純);橄欖油(法克拉利司兄弟公司，食品級);Cremophor EL 35(德國BASF公司贈送);Labrasol，Transcutol P(法國Gattefosse公司贈送);吐溫-80(天津市華東試劑廠，化學純);PEG400(北京益利精細化學品有限公司，化學純);1，2-丙二醇(北京化工廠，分析純);葛根總黃酮(純度：61.17%，西安賽邦醫藥科技有限公司);葛根素標準品(中國藥品生物制品檢驗所);甲醇(Fisher Scientific，色譜級);重蒸水。

1.3 方法

1.3.1 不同油相、表面活性劑及助表面活性劑的配伍研究

選擇中鏈甘油三酯、油酸乙酯、橄欖油三種油相;Labrasol、Cremophor EL 35、吐溫-80三種表面活性劑;PEG400、Transcutol P、1，2-丙二醇三種助表面活性劑以 40∶30∶30(W/W/W)于(37±0.5)℃水浴中渦旋混勻后加入100倍蒸餾水，中速磁力攪拌下乳化，目測法觀察自乳化效果〔3〕。篩選出穩定的配伍進行偽三元相圖的研究。

1.3.2 空白偽三元相圖的繪制 采用滴定法繪制偽三元相圖〔4〕。將表面活性劑與助表面活性劑按照一定的質量比混合，作為混合表面活性劑，表面活性劑與助表面活性劑的重量比記為Km。分別精密稱取表面活性劑與助表面活性劑(Km分別為1∶1、3∶1、5∶1)混勻后，與油相按不同比例混合，于(37 ±0.5)℃水浴中在中速磁力攪拌下用37℃的蒸餾水進行滴定，目測法觀察并記錄形成澄清透明、帶有少許淡藍色乳光微乳液臨界點時各成分的質量分數(W/W)。以油相、混合表面活性劑、水相為相圖的三個頂點。采用Origin軟件繪制偽三元相圖，確定最佳Km值。

1.3.3 粒徑和Zeta電位的測定 自微乳樣品用37℃蒸餾水稀釋100倍后，采用馬爾文激光粒度分析儀進行粒徑和Zeta電位測定。結果為樣品三次測定的平均值。

1.3.4 自乳化時間的測定 通過目測法觀察自乳化時間〔5〕。取1 g自乳化液，分散到100 ml的蒸餾水中，于(37±0.5)℃水浴中在中速磁力攪拌下用肉眼觀察完全分散的時間。結果為樣品三次測定的平均值。

1.3.5 最大載藥量的測定 色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);保護柱為 Dikama(4.6 mm ×10 mm);流動相為甲醇-水(40∶60，V/V);柱溫為22 ℃;檢測波長為250 nm;流速為1.0 ml/min;進樣量為20 μl。

將過量的葛根總黃酮加入到1 g空白自微乳化制劑中，密閉狀態下于37℃水浴恒溫振蕩器中振蕩72 h達到平衡，吸取上清液，4 000 r/min離心10 min，精密稱取一定量的樣品，用甲醇溶解定容至10 ml，0.45 μm微孔濾膜過濾后，采用HPLC法測定葛根總黃酮含量，平行操作3次，計算載藥量。

2 結果

2.1 不同油相、表面活性劑及助表面活性劑的配伍研究 見表1。中鏈甘油三酯和油酸乙酯為油相時獲得的處方遇水稀釋后可以發生自微乳化，說明中鏈脂肪酸酯的自微乳化能力強于長鏈的普通油酯。配伍的9個處方中，2號處方澄清度高，藍色乳光強，且組成處方的輔料口服安全性高，因此選擇中鏈甘油三酯為油相，Cremophor EL 35為表面活性劑、Transcutol P為助表面活性劑進行偽三元相圖的研究。

2.2 空白偽三元相圖的繪制 根據2.1結果，確定了所用的油相為中鏈甘油三酯，表面活性劑為Cremophor EL 35、助表面活性劑為 Transcutol P。Km分別為 1∶1、3∶1、5∶1時空白SMEDDS的偽三元相圖見圖1。從圖1可見，Km增大，自微乳區面積增大，即Km越大形成的微乳區范圍越廣。但Km逐漸增大，體系中的表面活性劑比例增加，在一定程度上增加了對胃腸道的刺激性。在表面活性劑用量盡可能小的情況下，Km為1∶1時自微乳區域太小，故將自微乳處方中的Km值定為3∶1。

圖1 空白SMEDDS的偽三元相圖

表1 不同油相、表面活性劑及助表面活性劑的配伍結果

2.3 葛根總黃酮SMEDDS處方的確定 根據2.2結果，當油相與混合表面活性劑之比大于5∶5時遇蒸餾水稀釋后無法發生自微乳化;油相與混合表面活性劑之比小于2∶8時雖然能發生自微乳化，但表面活性劑用量太大，綜合考慮多種因素將中鏈甘油三酯與Cremophor EL 35-Transcutol P混合表面活性劑(Km=3∶1)按2∶8、3∶7、4∶6、5∶5的比例混合，制備一系列自微乳化處方。以粒徑大小和自乳化時間為考察指標確定優化處方。

表2可見，表面活性劑的含量越高，得到的微乳粒徑越小，自乳化時間越長。其中，4號處方乳化后的粒徑明顯大于其他處方，且實驗中外觀略渾濁;1、2、3號處方的粒徑均符合SMEDDS粒徑要求(小于100 nm)且相差不大。根據文獻報道，SMEDDS要在胃腸道內自乳化并維持乳滴狀態，處方內必須有30%～60%的表面活性劑，但大量的表面活性劑可能會刺激胃腸道，且導致體系黏度較大，熔點較高，自微乳化時間延長。故在表面活性劑與助表面活性劑盡可能小的前提下，以乳化速率較大及乳化后粒徑較小的3號處方為空白自微乳處方。

2.4 葛根總黃酮SMEDDS的制備工藝 按“1.3.5”的方法，經HPLC法測定，最大載藥量為2.47%。故確定葛根總黃酮SMEDDS處方中葛根總黃酮的添加量為2.4%。

葛根總黃酮在油相中幾乎不溶，故稱取處方量葛根總黃酮在60℃水浴條件下溶于表面活性劑與助表面活性劑的混合物中，中速磁力攪拌下混勻，再將油相加入渦旋混合，充分溶解混勻后在37℃水浴中平衡1 h，得到葛根總黃酮SMEDDS(其中葛根總黃酮濃度為24 mg/g)。

表2 自乳化效率結果

圖2 葛根總黃酮自微乳的粒徑分布

2.5 葛根總黃酮SMEDDS處方的初步評價 圖2可見，葛根總黃酮SMEDDS處方含2.4%葛根總黃酮，39%油相(中鏈甘油三酯)，44%表面活性劑(Cremophor EL 35)，14.6%助表面活性劑(Transcutol P)。外觀為淡黃色澄清透明溶液，用37℃蒸餾水稀釋100倍后，得到澄清透明、具有藍色乳光的微乳液。葛根總黃酮SMEDDS的平均粒徑為27.31 nm，與載藥前平均粒徑26.82 nm相比，粒徑變化較小，且粒徑分布范圍窄;Zeta電位為－5.34 mv。

3 討論

中鏈甘油三酯對葛根總黃酮的自微乳化能力明顯強于長鏈的普通油酯，所以選其做為油相。實驗中通過空白SMEDDS的偽三元相圖研究以及不同比例SMEDDS的自微乳效率考察，發現表面活性劑與助表面活性劑的比例Km=3∶1時較為理想。綜合考慮自微乳化效果、自微乳化時間以及穩定程度，最終確定處方為：2.4%葛根總黃酮，39%油相(中鏈甘油三酯)，44%表面活性劑(Cremophor EL 35)，14.6%助表面活性劑(Transcutol P)。

1 Gao P，Akrmi A，Alvarez F.Characterization and optimization of AMG 517 supersaturatable self-emulsifying drug delivery system(S-EDDS)for improved oral absorption〔J〕.J Pharm Sci，2009;98(2)：516.

2 周毅生，賈永艷.葛根素固體分散體的制備及其體外研究〔J〕.中國藥學雜志，2003;38(1)：42-4.

3 崔淑霞，聶淑芳，張世忠，等.長春西汀自微乳化給藥系統的制備與體外評價〔J〕. 中國新藥雜志，2009;18(19)：1897-901.

4 魯 瑩，蔣雪濤.卵磷脂微乳的制備與理化性質考察〔J〕.藥學學報，2000;35(1)：52-5.

5 Bachynsky MO，Shah NH，Patel CI.Factors affecting the efficiency of selfemulsifying oral delivery system〔J〕.Drug Dev Ind Pharm，1997;23(8)：809-16.