牡蠣提取液對長期訓練小鼠免疫功能的影響

華 巖 楊影云 葉紹凡 何傳勝 潘家志 (欽州學院體育學院，廣西 欽州 535000)

牡蠣提取液對長期訓練小鼠免疫功能的影響

華 巖 楊影云1葉紹凡 何傳勝 潘家志 (欽州學院體育學院，廣西 欽州 535000)

目的 探討牡蠣提取液對長期訓練小鼠免疫功能的影響。方法 實驗小鼠60只，隨機分為6組：安靜對照組(Ⅰ組)、安靜+給藥組(Ⅱ組)、運動對照組(Ⅲ組)、低劑量給藥+運動組(Ⅳ組)、中劑量給藥+運動組(Ⅴ組)、高劑量給藥+運動組(Ⅵ組)。4個給藥組分別以劑量為5、10、15 g·kg-1·d-1灌服牡蠣提取液，對照組灌服等體積的蒸餾水，共6 w。Ⅰ組不運動，5個運動組小鼠進行6 w遞增負荷游泳訓練，最后進行一次性力竭游泳，測定小鼠血清溶菌酶含量、血清ACP活性、SI、TI、胸腺XO活性、脾臟MPO活性指標。結果 Ⅱ組與Ⅰ組相比，溶菌酶含量略高(P＞0.05)，ACP活性降低(P ＜0.05)，SI、TI差異不顯著(P ＞0.05)，XO、MPO 活性略低(P ＞0.05);Ⅲ組與Ⅰ組相比，溶菌酶含量、ACP 活性、SI、TI均降低(P＜0.01);Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組與Ⅲ組相比，溶菌酶含量、ACP活性、XO活性、MPO活性均降低(P＜0.01);Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組溶菌酶含量、SI、TI隨牡蠣提取液劑量升高而升高，ACP活性、XO活性隨牡蠣提取液劑量升高而降低。結論 牡蠣提取液促進運動免疫抑制小鼠的溶菌酶再生，顯著降低APC活性，提高小鼠SI、TI，抑制小鼠胸腺組織中XO、脾臟組織中MPO活性，提示牡蠣提取液是一種有效的運動免疫增強劑。

牡蠣提取液;小鼠;游泳訓練;脾臟;胸腺

運動員免疫功能受到抑制，尤其是運動員經大強度訓練后機體抗病能力下調，表現為對感染性疾病的易感性增加。如何提高運動員機體的免疫功能，成為運動醫學者共同研究的重要課題，其中中藥免疫與運動能力的關系備受關注。海洋佳品牡蠣，肉嫩味鮮，牡蠣肉富含?；撬?、氨基酸、糖原等多種活性物質〔1〕，具有解熱抗炎，增強機體免疫力等功能，常用的滋補類中藥廣泛的應用于臨床疾病的治療〔1〕。李萌等〔2〕經研究發現，牡蠣糖氨聚糖能顯著降低Ⅰ型單純皰疹病毒感染小鼠的死亡率，延長其存活時間，并明顯提高病毒感染小鼠的胸腺指數和脾臟指數，增強巨噬細胞吞噬能力，具有增強小鼠免疫功能的作用。迄今為止，國內有關牡蠣在運動領域領域的研究相對較少。本研究擬通過建立小鼠遞增負荷游泳模型、一次力竭游泳運動模型，探討牡蠣提取液對長期訓練小鼠血漿溶菌酶含量、酸性磷酸酶(ACP)、脾臟指數(SI)、胸腺指數(TI)、胸腺組織中黃嘌呤氧化酶(XO)的活性與脾臟組織中髓過氧化物酶(MPO)的活性的影響，旨在為牡蠣作為一種新免疫增強劑運用于運動實踐提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試劑與設備

牡蠣提取液由欽州學院運動生理學實驗室制備，本研究定容至濃度為2.00 g/ml的牡蠣提取液 (牡蠣濃度與灌胃劑量均以牡蠣生藥進行計算)。4℃冰箱保存，用時稀釋至所需濃度。昆明小鼠60只，清潔級，8周齡，雄性，體重(22.02±1.43)g，購自廣西醫科大學動物實驗中心。溶菌酶、酸性磷酸酶(ACP)、考馬斯亮蛋白、髓過氧化物酶(MPO)、黃嘌呤氧化酶(XO)試劑盒均購自上海易利生物科技有限公司。FA/FC系列電子分析天平(西安萬科儀器公司)、電動勻漿機(北京瑞麗分析儀器公司)、冷凍離心機(北京沃德生物醫學儀器公司)、UV-1800紫外可見光分光光度計(杭州博日科技有限公)等。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗動物及其處理 小鼠自由進食、進水，室溫28℃ ±2℃。適應喂養1 w后，第5天按體重隨即分為6組：安靜對照組(Ⅰ組)、安靜+給藥組(Ⅱ組)、運動對照組(Ⅲ組)、低劑量給藥+運動組(Ⅳ組)、中劑量給藥+運動組(Ⅴ組)、高劑量給藥+運動組(Ⅵ組)。分組后第6天與第7天進行無負重適應性游泳訓練20 min。動物游泳池的規格為100 cm×60 cm×80 cm透明玻璃缸，其底部裝有小型潛水泵(防止小鼠靜止不動，水流量為100 L/h)，水溫30℃ ±1℃，水深45 cm。第8天各組小鼠測試負重8%體重力竭運動游泳時間，第9天休息。力竭判定標準以小鼠頭部全部入水持續8 s不能浮出水面為判定終點，記錄游泳衰竭時間〔3〕。負重方法為：在小鼠距離尾巴根部2 cm處沾上醫用膠布并開孔，然后用回形針在膠布上掛好負重金屬，游泳結束后將膠布與金屬物取下。

1.2.2 動物訓練及給藥方式 訓練方式參考姚績偉等〔4〕的研究略加該進。小鼠休息1 d后，第3天Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組小鼠進行無負重游泳訓練。每周訓練6 d，每天1次，第1周游泳時間為30 min/d，以后每周增加10 min，持續6 w結束。Ⅰ組、Ⅲ組小鼠每日灌服等體積的蒸餾水，Ⅱ組、Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組小鼠每天下午4點至5點灌服牡蠣提取液一次，劑量分別為5、5、10、15 g·kg-1·d-1，直到實驗結束。6 w 實驗結束后隔1 d，Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組小鼠進行自身負重8%的力竭性游泳(力竭判定標準如上)。

1.2.3 檢測指標與方法 Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組小鼠力竭運動結束后稱重，摘除眼球取血約2 ml，2 000 r/min的轉速速冷凍機，冷凍離心15 min，收集上清液，-70℃保存用于測定溶菌酶與ACP。后小鼠斷頸椎處死，取其胸腺和脾臟用0℃生理鹽水沖洗后，濾紙吸干水分，稱重并計算脾臟指數(SI)與胸腺指數(TI)。將胸腺組織與脾臟組織在0℃制成組織勻漿，2 000 r/min的轉速冷凍離心15 min，收集上清液，-70℃冰箱保存，分別測量胸腺組織中黃嘌呤氧化酶(XO)的活性與脾臟組織中髓過氧化物酶(MPO)的活性，測試按照試劑盒說明書進行。Ⅰ組、Ⅱ組小鼠在運動組小鼠取樣結束后再進行取樣，程序及指標測試同上。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 各組小鼠溶菌酶、ACP水平

Ⅱ組小鼠ACP測定值低于Ⅰ組(P＜0.05);Ⅲ組小鼠溶菌酶測定值低于Ⅰ組(P＜0.01)，ACP測定值高于Ⅰ組(P＜0.01);Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ小鼠溶菌酶測定值均高于Ⅲ組(P＜0.01)，(P＜0.01)，Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ小鼠溶菌酶測定值依次上升;ACP測定值均低于Ⅲ組，(P＜0.01)，Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ小鼠ACP測定值依次下降。見表1。

表1 各組小鼠溶菌酶、ACP水平± s，n=10)

表1 各組小鼠溶菌酶、ACP水平± s，n=10)

與Ⅰ組比較：1)P＜0.05;2)P＜0.01;與Ⅲ組比較：3)P＜0.01

組別 溶菌酶(μg/ml) ACP(U/100 ml)310.56±72.47 40.77±22.13Ⅱ組 316.37±69.25 33.41±19.331)Ⅲ組 147.73±59.172) 51.39±27.082)Ⅳ組 229.63±61.833) 28.16±14.133)Ⅴ組 260.17±63.073) 21.55±12.703)Ⅵ組 297.77±71.453) 18.34±6.423)Ⅰ組

2.2 各組小鼠免疫器官指數、胸腺XO、脾臟MPO的水平

由表2得知，Ⅱ組小鼠與I組相比，SI、TI、胸腺XO、脾臟MPO差異均無統計學意義;Ⅲ組小鼠與 I組相比，SI、TI降低(P＜0.01)，胸腺XO、脾臟MPO升高;Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ小鼠與III組相比，SI、TI依次升高(P＜0.05)，胸腺 XO、脾臟 MPO 降低(P＜0.05)。

表2 各組小鼠胸腺指數、脾臟指數水平(± s，n=10)

表2 各組小鼠胸腺指數、脾臟指數水平(± s，n=10)

與Ⅰ組比較：1)P＜0.01;與Ⅲ組比較：2)P＜0.05

組別 SI TI 胸腺XO(U/g)脾臟MPO(U/g)4.43±0.24 1.36±0.11 111.37±39.13 0.84±0.03Ⅱ組 4.52±0.32 1.38±0.24 106.58±31.29 0.87±0.01Ⅲ組 2.71±0.251) 0.56±0.011) 149.37±23.171) 1.08±0.021)Ⅳ組 3.26±0.712) 0.97±0.032) 76.64±12.532) 0.61±0.002)Ⅴ組 5.52±0.822) 1.46±0.212) 74.49±17.082) 0.73±0.012)Ⅵ組 5.71±0.692) 1.49±0.322) 65.09±9.972) 0.67±0.012)Ⅰ組

3 討論

3.1 牡蠣提取液對長期訓練小鼠溶菌酶、ACP指標的影響

溶菌酶是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶，主要通過破壞細胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之間的β-1，4糖氨鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂內容物溢出而使細菌溶解〔5〕。溶菌酶常參與機體的防衛功能，在機體的炎癥修復、免疫調節中起著重要的作用〔6〕，是反映機體非特性免疫力的重要指標。ACP是一種在酸性條件下水解磷酸單脂的酶，主要存在于巨噬細胞，定位于溶酶體內。ACP在機體免疫功能、細胞損傷與修復具有重要的作用，臨床醫學上主要用于前列腺癌的輔助與診斷〔7〕?，F有的研究〔8，9〕發現，隨著機體運動強度與運動時間的上升，血清中的ACP活性存在下調趨勢。本研究結果提示牡蠣提取液對抗小鼠的免疫抑制作用，增強小鼠溶菌酶含量、降低ACP活性。原因可能為牡蠣提取液中富含多種氨基酸、蛋白質、糖原等活性成分提高了機體的造血功能和循環系統功能，促進了機體溶菌酶的再生與合成，抑制了ACP的活性，從而增強機體的免疫功能。

3.2 牡蠣提取液對長期訓練小鼠免疫器官的影響

機體在病理或者大強度訓練條件下，表現在 SI、TI的顯著降低〔10，11〕，胸腺與脾臟XO、MPO的活性升高，自由基生成過多，造成組織的進一步損傷〔5〕。

現有的研究成果表明，中藥免疫增強劑可以升高 SI、TI〔12〕，降低 XO、MPO 的活性〔13〕。帥學宏等〔13〕的研究表明，山豆根多糖通過改變機體內自由基相關酶的活性影響體內自由基的產生和清除能力，使機體免疫器官免受過氧化損傷，抵抗地米松導致的免疫抑制，增強小鼠的免疫功能。

本研究結果提示牡蠣提取液的多種活性成分可以顯著的增加SI、TI值，抑制小鼠胸腺組織中XO、脾臟組織中MPO活性的升高，及時清除運動過程中產生的過量自由基，對脾臟、胸腺組織有明顯的保護作用。

牡蠣提取液促進運動免疫抑制小鼠的溶菌酶再生，降低APC活性，提高小鼠SI、TI，抑制小鼠胸腺組織中XO、脾臟組織中MPO活性，提示牡蠣是一種有效的運動免疫增強劑。

1 馮 麗，趙文靜，常惟智.牡蠣的藥理作用及臨川應用研究進展〔J〕.中醫藥信息，2011;28(1)：114-5.

2 李 萌，杜國威，劉 賽.牡蠣糖胺聚糖小鼠體內抗病毒作用的實驗研究〔J〕.中國海洋藥物雜志，2008;2(4)：50.

3 吉紅武，苗建銀，邵海燕，等.近江牡蠣水解物的營養成分及抗疲勞作用研究〔J〕. 食品科技，2010;35(2)：70-3.

4 姚績偉，唐 暉，周 亮，等.羅漢果提取液對小鼠運動耐力及肝組織抗氧化損傷的影響〔J〕.中國運動醫學雜志，2008;27(2)：221-3.

5 百科網.溶菌酶〔EB/OL〕.http：//baike.baidu.com/view/39726.htm

6 陳 燕，江明鋒，劉勇濤，等.溶菌酶的研究進展〔J〕.生物學雜志，2009;26(2)：64-6.

7 百科網 .酸性磷酸酶〔EB/OL〕.http：//baike.baidu.com/view/438586.htm

8 彭 莉，王啟榮，畢秋蕓.補充大豆多肽對遞增負荷運動大鼠血清LDH、ALT、AST活性的影響〔J〕.北京體育大學學報，2008;31(2)：199-201.

9 嚴 翊，謝敏豪，李晟瑋.大鼠五周間歇性無氧游泳訓練的血睪酮降低模型〔J〕.北京體育大學學報，2009;32(2)：63-5.

10 Batista ML Jr，Santos RV，Lopes RD，et al.Endurance training modulates lymphocyte function in rats with post-MI〔J〕.CHF Med Sci Sports Exerc，2008;40(3)：549-56.

11 Shimizu K，Kimura F，Akimoto T，et al.Effect of moderate exercise training on T-helper cell subpopulations in elderly people〔J〕.Exerc Immunol Rev，2008;40(14)：24-37.

12 鄧國良，紀麗娟.廣棗提取液對小鼠免疫功能和運動耐力的影響〔J〕. 體育科學，2002;23(5)：53-4.

13 帥學宏，胡庭俊，曾 慧，等.山豆根多糖對免疫抑制模型小鼠免疫器官指數和自由基相關酶活性的影響〔J〕.南京農業大學學報，2009;32(2)：170-2.

Impact of oyster extracts on immunologic function of mice in long-term training

HUA Yan，YANG Ying-Yun，YE Shao-Fan，et al.
Department of Physical Education，Qinzhou University，Qinzhou 535000，Guangxi，China

Objective To explore the impact of oyster extracts on immunologic function of mice in long-term training.Methods 60 mice were randomly divided into six groups as followed：groupⅠ (sedentary control group)，groupⅡ(trained group)，groupⅣ (low dosage plus trained group)，groupⅤ (medium dosage plus trained group)，groupⅥ (high dosage plus trained group).Rats in four dosage groups were given with oyster extracts by the dosage of 5，5，10 and 15 g·kg-1·d-1respectively;meanwhile，rats in control group were treated with normal saline consecutively for 6 weeks.Rats in five trained groups except for the groupⅠ，were carried out progressively the load swimming training and then exhaustive swimming training and then to measure all the indexes of SL content，ACP，SI，TI，thymic XO，splenic MPO.Results The lysozyme concentration of groupⅡwas much higher than that of groupⅠ(P＞0.05)，and the ACP was significantly lower(P＜0.05)，and there was no significantly difference between SI and TI，and XO，MPO were relatively lower(P＞0.05).Compared with groupⅢ and groupⅠ，SL content，ACP，SI，TI was lowering(P＜0.01).Compared with groupⅣ，groupⅤ，groupⅥwith groupⅢ，all the indexes of SL content，ACP，SI，TI，thymic XO，splenic MPO were significantly lower(P＜0.01).In groupⅣ，ⅤandⅥ，SL content and TI were increased gradually with the increasing of dosage of oyster extracts，and ACP，XO decreased.Conclusions

Oyster extracts could contribute to the immune exercise，inhibit the renewal of lysozyme among the mice，lower the APC significantly and enhance SI，TI and control the XO in thymus tissues and MPO in the spleen tissues.All the results indicate that the oyster extraction is an effective method of improving movement immunization fortifier.

Oyster extraction;Mice;Swimming training;Spleen;Thymus

G804.7

A

1005-9202(2012)19-4206-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.19.046

廣西教育廳科學研究項目(201106LX531);欽州學院科研項目(2012XJKY-15B)

1 周口師范學院體育學院

葉紹凡(1966-)，男，副教授，主要從事運動生理學研究。

華 巖(1981-)，男，講師，碩士，主要從事運動生理學，運動生物化學研究。

〔2012-01-09收稿 2012-02-10修回〕

(編輯 曹夢園)