牡蠣提取液對(duì)長(zhǎng)期訓(xùn)練小鼠免疫功能的影響

華 巖 楊影云 葉紹凡 何傳勝 潘家志 (欽州學(xué)院體育學(xué)院，廣西 欽州 535000)

牡蠣提取液對(duì)長(zhǎng)期訓(xùn)練小鼠免疫功能的影響

華 巖 楊影云1葉紹凡 何傳勝 潘家志 (欽州學(xué)院體育學(xué)院，廣西 欽州 535000)

目的 探討牡蠣提取液對(duì)長(zhǎng)期訓(xùn)練小鼠免疫功能的影響。方法 實(shí)驗(yàn)小鼠60只，隨機(jī)分為6組：安靜對(duì)照組(Ⅰ組)、安靜+給藥組(Ⅱ組)、運(yùn)動(dòng)對(duì)照組(Ⅲ組)、低劑量給藥+運(yùn)動(dòng)組(Ⅳ組)、中劑量給藥+運(yùn)動(dòng)組(Ⅴ組)、高劑量給藥+運(yùn)動(dòng)組(Ⅵ組)。4個(gè)給藥組分別以劑量為5、10、15 g·kg-1·d-1灌服牡蠣提取液，對(duì)照組灌服等體積的蒸餾水，共6 w。Ⅰ組不運(yùn)動(dòng)，5個(gè)運(yùn)動(dòng)組小鼠進(jìn)行6 w遞增負(fù)荷游泳訓(xùn)練，最后進(jìn)行一次性力竭游泳，測(cè)定小鼠血清溶菌酶含量、血清ACP活性、SI、TI、胸腺XO活性、脾臟MPO活性指標(biāo)。結(jié)果 Ⅱ組與Ⅰ組相比，溶菌酶含量略高(P＞0.05)，ACP活性降低(P ＜0.05)，SI、TI差異不顯著(P ＞0.05)，XO、MPO 活性略低(P ＞0.05);Ⅲ組與Ⅰ組相比，溶菌酶含量、ACP 活性、SI、TI均降低(P＜0.01);Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組與Ⅲ組相比，溶菌酶含量、ACP活性、XO活性、MPO活性均降低(P＜0.01);Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組溶菌酶含量、SI、TI隨牡蠣提取液劑量升高而升高，ACP活性、XO活性隨牡蠣提取液劑量升高而降低。結(jié)論 牡蠣提取液促進(jìn)運(yùn)動(dòng)免疫抑制小鼠的溶菌酶再生，顯著降低APC活性，提高小鼠SI、TI，抑制小鼠胸腺組織中XO、脾臟組織中MPO活性，提示牡蠣提取液是一種有效的運(yùn)動(dòng)免疫增強(qiáng)劑。

牡蠣提取液;小鼠;游泳訓(xùn)練;脾臟;胸腺

運(yùn)動(dòng)員免疫功能受到抑制，尤其是運(yùn)動(dòng)員經(jīng)大強(qiáng)度訓(xùn)練后機(jī)體抗病能力下調(diào)，表現(xiàn)為對(duì)感染性疾病的易感性增加。如何提高運(yùn)動(dòng)員機(jī)體的免疫功能，成為運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)者共同研究的重要課題，其中中藥免疫與運(yùn)動(dòng)能力的關(guān)系備受關(guān)注。海洋佳品牡蠣，肉嫩味鮮，牡蠣肉富含牛磺酸、氨基酸、糖原等多種活性物質(zhì)〔1〕，具有解熱抗炎，增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能，常用的滋補(bǔ)類中藥廣泛的應(yīng)用于臨床疾病的治療〔1〕。李萌等〔2〕經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，牡蠣糖氨聚糖能顯著降低Ⅰ型單純皰疹病毒感染小鼠的死亡率，延長(zhǎng)其存活時(shí)間，并明顯提高病毒感染小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力，具有增強(qiáng)小鼠免疫功能的作用。迄今為止，國(guó)內(nèi)有關(guān)牡蠣在運(yùn)動(dòng)領(lǐng)域領(lǐng)域的研究相對(duì)較少。本研究擬通過(guò)建立小鼠遞增負(fù)荷游泳模型、一次力竭游泳運(yùn)動(dòng)模型，探討牡蠣提取液對(duì)長(zhǎng)期訓(xùn)練小鼠血漿溶菌酶含量、酸性磷酸酶(ACP)、脾臟指數(shù)(SI)、胸腺指數(shù)(TI)、胸腺組織中黃嘌呤氧化酶(XO)的活性與脾臟組織中髓過(guò)氧化物酶(MPO)的活性的影響，旨在為牡蠣作為一種新免疫增強(qiáng)劑運(yùn)用于運(yùn)動(dòng)實(shí)踐提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與設(shè)備

牡蠣提取液由欽州學(xué)院運(yùn)動(dòng)生理學(xué)實(shí)驗(yàn)室制備，本研究定容至濃度為2.00 g/ml的牡蠣提取液 (牡蠣濃度與灌胃劑量均以牡蠣生藥進(jìn)行計(jì)算)。4℃冰箱保存，用時(shí)稀釋至所需濃度。昆明小鼠60只，清潔級(jí)，8周齡，雄性，體重(22.02±1.43)g，購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。溶菌酶、酸性磷酸酶(ACP)、考馬斯亮蛋白、髓過(guò)氧化物酶(MPO)、黃嘌呤氧化酶(XO)試劑盒均購(gòu)自上海易利生物科技有限公司。FA/FC系列電子分析天平(西安萬(wàn)科儀器公司)、電動(dòng)勻漿機(jī)(北京瑞麗分析儀器公司)、冷凍離心機(jī)(北京沃德生物醫(yī)學(xué)儀器公司)、UV-1800紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)(杭州博日科技有限公)等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其處理 小鼠自由進(jìn)食、進(jìn)水，室溫28℃ ±2℃。適應(yīng)喂養(yǎng)1 w后，第5天按體重隨即分為6組：安靜對(duì)照組(Ⅰ組)、安靜+給藥組(Ⅱ組)、運(yùn)動(dòng)對(duì)照組(Ⅲ組)、低劑量給藥+運(yùn)動(dòng)組(Ⅳ組)、中劑量給藥+運(yùn)動(dòng)組(Ⅴ組)、高劑量給藥+運(yùn)動(dòng)組(Ⅵ組)。分組后第6天與第7天進(jìn)行無(wú)負(fù)重適應(yīng)性游泳訓(xùn)練20 min。動(dòng)物游泳池的規(guī)格為100 cm×60 cm×80 cm透明玻璃缸，其底部裝有小型潛水泵(防止小鼠靜止不動(dòng)，水流量為100 L/h)，水溫30℃ ±1℃，水深45 cm。第8天各組小鼠測(cè)試負(fù)重8%體重力竭運(yùn)動(dòng)游泳時(shí)間，第9天休息。力竭判定標(biāo)準(zhǔn)以小鼠頭部全部入水持續(xù)8 s不能浮出水面為判定終點(diǎn)，記錄游泳衰竭時(shí)間〔3〕。負(fù)重方法為：在小鼠距離尾巴根部2 cm處沾上醫(yī)用膠布并開(kāi)孔，然后用回形針在膠布上掛好負(fù)重金屬，游泳結(jié)束后將膠布與金屬物取下。

1.2.2 動(dòng)物訓(xùn)練及給藥方式 訓(xùn)練方式參考姚績(jī)偉等〔4〕的研究略加該進(jìn)。小鼠休息1 d后，第3天Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組小鼠進(jìn)行無(wú)負(fù)重游泳訓(xùn)練。每周訓(xùn)練6 d，每天1次，第1周游泳時(shí)間為30 min/d，以后每周增加10 min，持續(xù)6 w結(jié)束。Ⅰ組、Ⅲ組小鼠每日灌服等體積的蒸餾水，Ⅱ組、Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組小鼠每天下午4點(diǎn)至5點(diǎn)灌服牡蠣提取液一次，劑量分別為5、5、10、15 g·kg-1·d-1，直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。6 w 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后隔1 d，Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組小鼠進(jìn)行自身負(fù)重8%的力竭性游泳(力竭判定標(biāo)準(zhǔn)如上)。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組小鼠力竭運(yùn)動(dòng)結(jié)束后稱重，摘除眼球取血約2 ml，2 000 r/min的轉(zhuǎn)速速冷凍機(jī)，冷凍離心15 min，收集上清液，-70℃保存用于測(cè)定溶菌酶與ACP。后小鼠斷頸椎處死，取其胸腺和脾臟用0℃生理鹽水沖洗后，濾紙吸干水分，稱重并計(jì)算脾臟指數(shù)(SI)與胸腺指數(shù)(TI)。將胸腺組織與脾臟組織在0℃制成組織勻漿，2 000 r/min的轉(zhuǎn)速冷凍離心15 min，收集上清液，-70℃冰箱保存，分別測(cè)量胸腺組織中黃嘌呤氧化酶(XO)的活性與脾臟組織中髓過(guò)氧化物酶(MPO)的活性，測(cè)試按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。Ⅰ組、Ⅱ組小鼠在運(yùn)動(dòng)組小鼠取樣結(jié)束后再進(jìn)行取樣，程序及指標(biāo)測(cè)試同上。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠溶菌酶、ACP水平

Ⅱ組小鼠ACP測(cè)定值低于Ⅰ組(P＜0.05);Ⅲ組小鼠溶菌酶測(cè)定值低于Ⅰ組(P＜0.01)，ACP測(cè)定值高于Ⅰ組(P＜0.01);Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ小鼠溶菌酶測(cè)定值均高于Ⅲ組(P＜0.01)，(P＜0.01)，Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ小鼠溶菌酶測(cè)定值依次上升;ACP測(cè)定值均低于Ⅲ組，(P＜0.01)，Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ小鼠ACP測(cè)定值依次下降。見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠溶菌酶、ACP水平± s，n=10)

表1 各組小鼠溶菌酶、ACP水平± s，n=10)

與Ⅰ組比較：1)P＜0.05;2)P＜0.01;與Ⅲ組比較：3)P＜0.01

組別 溶菌酶(μg/ml) ACP(U/100 ml)310.56±72.47 40.77±22.13Ⅱ組 316.37±69.25 33.41±19.331)Ⅲ組 147.73±59.172) 51.39±27.082)Ⅳ組 229.63±61.833) 28.16±14.133)Ⅴ組 260.17±63.073) 21.55±12.703)Ⅵ組 297.77±71.453) 18.34±6.423)Ⅰ組

2.2 各組小鼠免疫器官指數(shù)、胸腺XO、脾臟MPO的水平

由表2得知，Ⅱ組小鼠與I組相比，SI、TI、胸腺XO、脾臟MPO差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Ⅲ組小鼠與 I組相比，SI、TI降低(P＜0.01)，胸腺XO、脾臟MPO升高;Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ小鼠與III組相比，SI、TI依次升高(P＜0.05)，胸腺 XO、脾臟 MPO 降低(P＜0.05)。

表2 各組小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)水平(± s，n=10)

表2 各組小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)水平(± s，n=10)

與Ⅰ組比較：1)P＜0.01;與Ⅲ組比較：2)P＜0.05

組別 SI TI 胸腺XO(U/g)脾臟MPO(U/g)4.43±0.24 1.36±0.11 111.37±39.13 0.84±0.03Ⅱ組 4.52±0.32 1.38±0.24 106.58±31.29 0.87±0.01Ⅲ組 2.71±0.251) 0.56±0.011) 149.37±23.171) 1.08±0.021)Ⅳ組 3.26±0.712) 0.97±0.032) 76.64±12.532) 0.61±0.002)Ⅴ組 5.52±0.822) 1.46±0.212) 74.49±17.082) 0.73±0.012)Ⅵ組 5.71±0.692) 1.49±0.322) 65.09±9.972) 0.67±0.012)Ⅰ組

3 討論

3.1 牡蠣提取液對(duì)長(zhǎng)期訓(xùn)練小鼠溶菌酶、ACP指標(biāo)的影響

溶菌酶是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶，主要通過(guò)破壞細(xì)胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之間的β-1，4糖氨鍵，使細(xì)胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂內(nèi)容物溢出而使細(xì)菌溶解〔5〕。溶菌酶常參與機(jī)體的防衛(wèi)功能，在機(jī)體的炎癥修復(fù)、免疫調(diào)節(jié)中起著重要的作用〔6〕，是反映機(jī)體非特性免疫力的重要指標(biāo)。ACP是一種在酸性條件下水解磷酸單脂的酶，主要存在于巨噬細(xì)胞，定位于溶酶體內(nèi)。ACP在機(jī)體免疫功能、細(xì)胞損傷與修復(fù)具有重要的作用，臨床醫(yī)學(xué)上主要用于前列腺癌的輔助與診斷〔7〕。現(xiàn)有的研究〔8，9〕發(fā)現(xiàn)，隨著機(jī)體運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度與運(yùn)動(dòng)時(shí)間的上升，血清中的ACP活性存在下調(diào)趨勢(shì)。本研究結(jié)果提示牡蠣提取液對(duì)抗小鼠的免疫抑制作用，增強(qiáng)小鼠溶菌酶含量、降低ACP活性。原因可能為牡蠣提取液中富含多種氨基酸、蛋白質(zhì)、糖原等活性成分提高了機(jī)體的造血功能和循環(huán)系統(tǒng)功能，促進(jìn)了機(jī)體溶菌酶的再生與合成，抑制了ACP的活性，從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。

3.2 牡蠣提取液對(duì)長(zhǎng)期訓(xùn)練小鼠免疫器官的影響

機(jī)體在病理或者大強(qiáng)度訓(xùn)練條件下，表現(xiàn)在 SI、TI的顯著降低〔10，11〕，胸腺與脾臟XO、MPO的活性升高，自由基生成過(guò)多，造成組織的進(jìn)一步損傷〔5〕。

現(xiàn)有的研究成果表明，中藥免疫增強(qiáng)劑可以升高 SI、TI〔12〕，降低 XO、MPO 的活性〔13〕。帥學(xué)宏等〔13〕的研究表明，山豆根多糖通過(guò)改變機(jī)體內(nèi)自由基相關(guān)酶的活性影響體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除能力，使機(jī)體免疫器官免受過(guò)氧化損傷，抵抗地米松導(dǎo)致的免疫抑制，增強(qiáng)小鼠的免疫功能。

本研究結(jié)果提示牡蠣提取液的多種活性成分可以顯著的增加SI、TI值，抑制小鼠胸腺組織中XO、脾臟組織中MPO活性的升高，及時(shí)清除運(yùn)動(dòng)過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)量自由基，對(duì)脾臟、胸腺組織有明顯的保護(hù)作用。

牡蠣提取液促進(jìn)運(yùn)動(dòng)免疫抑制小鼠的溶菌酶再生，降低APC活性，提高小鼠SI、TI，抑制小鼠胸腺組織中XO、脾臟組織中MPO活性，提示牡蠣是一種有效的運(yùn)動(dòng)免疫增強(qiáng)劑。

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Impact of oyster extracts on immunologic function of mice in long-term training

HUA Yan，YANG Ying-Yun，YE Shao-Fan，et al.
Department of Physical Education，Qinzhou University，Qinzhou 535000，Guangxi，China

Objective To explore the impact of oyster extracts on immunologic function of mice in long-term training.Methods 60 mice were randomly divided into six groups as followed：groupⅠ (sedentary control group)，groupⅡ(trained group)，groupⅣ (low dosage plus trained group)，groupⅤ (medium dosage plus trained group)，groupⅥ (high dosage plus trained group).Rats in four dosage groups were given with oyster extracts by the dosage of 5，5，10 and 15 g·kg-1·d-1respectively;meanwhile，rats in control group were treated with normal saline consecutively for 6 weeks.Rats in five trained groups except for the groupⅠ，were carried out progressively the load swimming training and then exhaustive swimming training and then to measure all the indexes of SL content，ACP，SI，TI，thymic XO，splenic MPO.Results The lysozyme concentration of groupⅡwas much higher than that of groupⅠ(P＞0.05)，and the ACP was significantly lower(P＜0.05)，and there was no significantly difference between SI and TI，and XO，MPO were relatively lower(P＞0.05).Compared with groupⅢ and groupⅠ，SL content，ACP，SI，TI was lowering(P＜0.01).Compared with groupⅣ，groupⅤ，groupⅥwith groupⅢ，all the indexes of SL content，ACP，SI，TI，thymic XO，splenic MPO were significantly lower(P＜0.01).In groupⅣ，ⅤandⅥ，SL content and TI were increased gradually with the increasing of dosage of oyster extracts，and ACP，XO decreased.Conclusions

Oyster extracts could contribute to the immune exercise，inhibit the renewal of lysozyme among the mice，lower the APC significantly and enhance SI，TI and control the XO in thymus tissues and MPO in the spleen tissues.All the results indicate that the oyster extraction is an effective method of improving movement immunization fortifier.

Oyster extraction;Mice;Swimming training;Spleen;Thymus

G804.7

A

1005-9202(2012)19-4206-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.19.046

廣西教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目(201106LX531);欽州學(xué)院科研項(xiàng)目(2012XJKY-15B)

1 周口師范學(xué)院體育學(xué)院

葉紹凡(1966-)，男，副教授，主要從事運(yùn)動(dòng)生理學(xué)研究。

華 巖(1981-)，男，講師，碩士，主要從事運(yùn)動(dòng)生理學(xué)，運(yùn)動(dòng)生物化學(xué)研究。

〔2012-01-09收稿 2012-02-10修回〕

(編輯 曹夢(mèng)園)