三七對(duì)胰島素抵抗大鼠血栓形成相關(guān)因子的影響

于芳芳 陳芝蕓 嚴(yán)茂祥

近年的研究顯示，胰島素抵抗(insulin resistance，IR)是廣泛存在的重要病理生理變化，它是滋生高血壓、冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、脂肪肝、腦血管疾病、肥胖癥等慢性疾病的“共同土壤”，是產(chǎn)生這些疾病共同的發(fā)病基礎(chǔ)。已有研究表明，通過改善胰島素抵抗可使血管內(nèi)膜得到保護(hù)，改善血液高凝狀態(tài)，從而可防止病情的進(jìn)展，改善胰島素抵抗可作為防止心血管事件發(fā)生、發(fā)展的重要措施［1，2］。目前中醫(yī)藥應(yīng)用活血化瘀法治療IR相關(guān)性疾病已有不少報(bào)道，取得一定的療效，提示中醫(yī)藥治療胰島素抵抗有良好的發(fā)展前景［3～5］。本研究旨在觀察活血化瘀中藥三七對(duì)胰島素抵抗大鼠血栓形成相關(guān)因子的影響，進(jìn)一步探討三七防治IR的可能作用機(jī)制，為防治胰島素抵抗提出新的思路，拓寬應(yīng)用中醫(yī)藥防治胰島素抵抗的途徑。

材料與方法

1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:Wistar大鼠32只，雄性，體重190±10g，SPF級(jí)，由中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2．主要藥品及試劑:膽固醇由上海伯奧生物有限公司提供;胰島素(insulin，INS)、血栓素 B2(TXB2)、6－ 酮 － 前列腺素F1α(6－Keto－PGF1α)放免試劑盒由中國人民解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免研究所提供;組織型纖溶酶原激活物(t－PA)、纖溶酶原激活物抑制物(PAI)試劑盒由上海太陽生物工程有限公司提供。三七產(chǎn)地云南，由本院中藥制劑室加工成100目的三七粉，用蒸餾水配制成12%和6%的混懸液。

3．主要儀器:Beckman L×20全自動(dòng)生化檢測儀，美國Beckman公司產(chǎn)品;SN－695智能放免γ測量儀，上海原子核研究所日環(huán)儀器廠產(chǎn)品;Elx800酶標(biāo)儀為美國BIO－TEK公司產(chǎn)品。

4．分組及給藥:大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、三七高劑量組、三七低劑量組，每組8只，正常組以標(biāo)準(zhǔn)飼料(碳水化合物熱量占62%，脂肪熱量占12%)喂養(yǎng)，其余3組以高脂膳食(碳水化合物熱量占20%、脂肪熱量占59%，脂肪的主要成分為熟豬油)喂養(yǎng)，三七高、低劑量組同時(shí)分別以1．2g/kg和0.6g/kg的三七混懸液灌胃，正常組及模型組灌服等容量蒸餾水，連續(xù)4周，末次給藥后次日空腹下麻醉，腹腔靜脈取血待用。

5．觀察指標(biāo)及評(píng)定標(biāo)準(zhǔn):全自動(dòng)生化分析儀測定空腹血糖(FBG)，放免法檢測空腹胰島素(FINS)、TXB2、6－Keto－PGF1α水平，發(fā)色底物法測定血漿t－PA、PAI;計(jì)算胰島素敏感性指標(biāo)(ISI)，即ISI=1/FBG×FINS;因?yàn)榉钦龖B(tài)分布，統(tǒng)計(jì)時(shí)取其自然對(duì)數(shù)。

結(jié) 果

1．三七對(duì)IR大鼠空腹血糖、胰島素及胰島素敏感性的影響:模型組大鼠的血清FINS較正常組明顯增高(p＜0．05)，而胰島素敏感性指標(biāo)ISI明顯低于正常組(p＜0．05)，應(yīng)用三七干預(yù)后，大鼠FINS水平較模型組明顯降低(p＜0．05)，ISI較模型組明顯提高(P ＜0．05)，見表1。

表1 三七對(duì)IR大鼠空腹血糖、胰島素及胰島素敏感性的影響

表1 三七對(duì)IR大鼠空腹血糖、胰島素及胰島素敏感性的影響

與正常組比較，*P ＜0．05;與模型組比較，△P ＜0．05

8 5．33 ±0．64 79．22 ±12．74 －2．61 ±0．11模型組 8 5．83 ±0．41 100．78 ±6．48* －2．77 ±0．04*三七高劑量組 8 5．57 ±0．43 88．10 ±9．68△ －2．69 ±0．05＊△三七低劑量組 8 5．60 ±0．47 90．19 ±8．06＊△ －3．70 ±0．01 ISI正常組分組 n FBG(mmol/L)FINS(μU/L)＊△

2．三七對(duì)大鼠血栓形成相關(guān)因子的影響:IR模型組大鼠血漿 TXB2、PAI－1水平及TXB2/6－KPGF1α、PAI－1/tPA比值較正常組明顯增高(p＜0.01，P ＜ 0．05)，應(yīng)用三七干預(yù)后大鼠血漿 TXB2、PAI－1水平及 TXB2/6 －K －PGF1α、PAI－1/tPA 比值較模型組明顯降低(p＜0．05)(表2、表3)。

表2 三七對(duì)IR大鼠TXB2、6－Keto－PGF1α的影響

表2 三七對(duì)IR大鼠TXB2、6－Keto－PGF1α的影響

與正常組比較，*P ＜0．05，＊＊P ＜0．01;與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0．01

TXB2/6－8 494．50 ±83．24 765．72 ±154．88 0．66 ±0．14模型組 8 908．11 ±290．92* 810．32 ±206．45 1．23 ±0．67＊＊三七高劑量組 8 639．72 ±105．43△ 785．89 ±169．59 0．82 ±0．06△三七低劑量組 8 618．07 ±25．95△△ 775．22 ±169．60 0．79 ±0．19 K－P正常組分組 n TXB2(pg/ml)6－Keto－PGF1α(pg/ml)△

表3 三七對(duì)IR大鼠PAI－1、tPA的影響

表3 三七對(duì)IR大鼠PAI－1、tPA的影響

與正常組比較，*P ＜0．05，＊＊P ＜0．01;與模型組比較，△P ＜0.05

8 0．69 ±0．07 0．90 ±0．10 0．77 ±0．08模型組 8 0．85 ±0．06* 0．86 ±0．18 1．02 ±0．24＊＊三七高劑量組 8 0．76 ±0．10△ 0．93 ±0．07 0．82 ±0．16△三七低劑量組 8 0．74 ±0．11△ 0．90 ±0．06 0．83 ±0．15 PAI/tPA正常組分組 n PAI－1(AU/ml) tPA(U/ml)△

討 論

IR是存在于許多病理生理狀態(tài)中的一種普遍現(xiàn)象，是由于靶組織對(duì)胰島素反應(yīng)不敏感和B細(xì)胞分泌胰島素功能缺陷，導(dǎo)致糖、脂肪、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)素代謝紊亂，形成高代謝綜合征及相關(guān)性疾病，因此被認(rèn)為是多種疾病的共同危險(xiǎn)因素。

本研究發(fā)現(xiàn)采用高脂飲食喂養(yǎng)4周后大鼠血清FINS較正常組明顯增高，而胰島素敏感性指標(biāo)ISI較正常組明顯降低，提示大鼠出現(xiàn)了胰島素抵抗。在胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下，脂肪細(xì)胞及其分泌的脂肪因子發(fā)生變化，包括具有血管保護(hù)作用的脂聯(lián)素水平降低，參與炎癥反應(yīng)和凋亡的腫瘤壞死因子－α升高，游離脂肪酸升高，通過多種途徑導(dǎo)致血管反應(yīng)性改變以及慢性內(nèi)皮損傷，局部炎性反應(yīng)增強(qiáng)，大量細(xì)胞因子及炎性因子釋放，其正常的抗血栓和促纖溶作用被削弱，在炎癥、血管內(nèi)皮損傷等條件下，會(huì)引起二磷酸腺苷(ADP)的大量釋放，ADP能促進(jìn)血小板聚集和血栓形成［6］。血液在血管內(nèi)的正常流動(dòng)依賴于纖溶系統(tǒng)與凝血系統(tǒng)活性的動(dòng)態(tài)平衡。tPA和PA I是調(diào)節(jié)纖溶活性的關(guān)鍵物質(zhì)，tPA血漿水平的降低一方面可使纖溶能力減弱，促使血栓形成;另一方面則可導(dǎo)致纖維蛋白在體內(nèi)沉積，促進(jìn)動(dòng)脈硬化及血栓的形成和發(fā)展。血栓素A2(TXA2)和前列環(huán)素(PGI2)是具有代表性的血管活性物質(zhì)，其代謝產(chǎn)物TXB2與6－酮－PGF1α的平衡對(duì)控制血管壁與血小板相互反應(yīng)和維持循環(huán)通暢起著非常重要的作用，血漿TXB2增高、6－酮－PGF1α減低，是診斷血栓性或亞臨床血栓性病變較理想的指標(biāo)［7］。本研究發(fā)現(xiàn)，IR模型組大鼠血漿TXB2水平、PAI－1水平、TXB2/6－K －PGF1α及 PAI－1/tPA比值較正常組明顯增高，提示高脂飲食誘導(dǎo)的IR大鼠存在著血栓形成相關(guān)因子分泌的的異常，纖溶抑制功能的亢進(jìn)及凝血與纖溶的失衡易導(dǎo)致IR大鼠微循環(huán)障礙和血栓形成。

IR時(shí)血液表現(xiàn)的高凝狀態(tài)和微循環(huán)障礙等表現(xiàn)，被認(rèn)為符合中醫(yī)血瘀證的特征［8］;中醫(yī)認(rèn)為，血瘀是IR的重要病機(jī)之一，從瘀論治是中醫(yī)藥治療IR相關(guān)性疾病的基本治則［9，10］。三七為傳統(tǒng)活血化瘀中藥，具有散瘀止血、補(bǔ)血活血、消腫止痛、滋補(bǔ)強(qiáng)壯等功效;現(xiàn)代藥理研究證實(shí)三七有抗血小板聚集、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、降血脂及血糖、抗炎等作用［11］。本研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用三七干預(yù)后IR大鼠FINS水平下降，胰島素敏感性增強(qiáng)，同時(shí)，大鼠血漿TXB2和PAI－1水平、TXB2/6－K－PGF1α及PAI－1/tPA比值明顯降低，提示活血化瘀中藥三七可有改善大鼠的胰島素抵抗，其機(jī)制可能通過改善血管內(nèi)皮功能，調(diào)節(jié)血栓形成相關(guān)分子的分泌、恢復(fù)凝血與纖溶系統(tǒng)的平衡有關(guān)。

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