維甲類X受體和基質金屬蛋白酶-2在結直腸癌組織中的表達

周艷紅 (唐山職業技術學院基礎醫學部，河北 唐山 063000)

維甲類X受體(RXRs)是核激素受體超家族成員之一〔1〕，也是目前研究最為透徹的核受體亞家族，RXRs在多種腫瘤組織中均有表達改變。基質金屬蛋白酶(MMPs)是含有9種酶蛋白分子的家族，可以導致基質膜和細胞間質成分破壞與降解，在惡性腫瘤的侵襲與轉移中發揮重要作用。MMP-2是其中的一種，目前國內外對MMP-2在惡性腫瘤浸潤和轉移過程中的作用研究較多〔2〕，對于惡性腫瘤的演變過程中MMP-2的表達狀況和所起作用研究尚未深入。本實驗通過檢測正常結直腸黏膜、良性病變、結直腸癌等組織中RXRα和MMP-2的表達狀況，探討它們與結直腸癌發生、發展的關系，為結直腸癌的診斷和治療提供新的實驗依據和參考指標。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取唐山市協和醫院2005～2007年間資料齊全的結直腸癌標本存檔蠟塊53例，良性腺瘤標本31例;正常人黏膜組織37例;年齡41～75歲，平均56歲;以上標本均經病理證實。所有患者術前均未進行放療、化療或激素治療。結直腸癌臨床分期采用TNM方案。Ⅰ期+Ⅱ期22例，Ⅲ期+Ⅳ期31例。淋巴結轉移陽性33例，淋巴結轉移陰性20例。

1.2 試劑 兔抗人RXRα多克隆抗體和兔抗人MMP-2多克隆抗體均購自美國Santa Cruz公司;二步法免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 免疫組織化學檢測 采用二步法免疫組化檢測系統進行染色。一抗選用兔抗人RXRα多克隆抗體(稀釋度1∶100)和兔抗人MMP-2多克隆抗體(稀釋度1∶100)。用已知的結直腸癌陽性組織切片做陽性對照，用PBS代替一抗作空白對照，具體實驗步驟參照北京中杉二步法免疫組化試劑盒說明書進行。

1.4 結果判定 RXRα陽性染色主要集中于細胞核，呈棕黃色顆粒;MMP-2陽性表達部位主要在細胞質中，呈棕黃色。采用陽性細胞百分比法進行半定量分析：計數100個細胞呈現的陽性細胞數，結合顯色強弱分別為：陰性(-)不顯色，弱陽性(+)＜25%，中度陽性(?)26% ～50%，強陽性(?)＞50%。

1.5 統計學方法 采用SPSS13.0軟件處理，樣本均數的比較采用方差分析，計數資料采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 RXRα和MMP-2在不同組織中的表達及相關性 如表1所示，與正常黏膜和良性腺瘤組比較，結直腸癌組RXRα表達率呈下降趨勢，結直腸癌組MMP-2表達率呈上升趨勢，差異均有顯著性(P＜0.05)。

2.2 RXRα和MMP-2表達與臨床病理特征之間的關系 結直腸癌組織RXRα低表達和MMP-2高表達，與淋巴結轉移和臨床病理分期有關(P＜0.05)，與腫瘤分化程度無關，見表2。

表1 RXRα和MMP-2在不同結直腸組織的陽性表達率〔%(n/n)〕

表2 RXRα和MMP-2陽性表達與結直腸癌臨床病理參數的關系〔%(n/n)〕

2.3 RXRα和MMP-2的表達相關性 對RXRα和MMP-2在各組間的蛋白表達量進行相關性分析，結果顯示，在結直腸癌中RXRα和MMP-2蛋白表達量呈負相關(r=-0.586，P＜0.05)。研究資料表明，MMP-2蛋白在結直腸癌癌變中起上調作用，而RXRα蛋白起下調作用，RXRα蛋白在結直腸癌癌變中的調節作用有待于進一步研究。

3 討論

RXRs在多種腫瘤組織中均有表達改變，它在調控細胞分化和誘導細胞凋亡中發揮重要的轉錄調節作用。Brabender等〔3〕檢測食管癌和Barrett食管患者組織中RXRα mRNA情況，發現癌組織中RXRα mRNA的表達顯著下降，在有廣泛淋巴結轉移的患者中表達更低，術后生存時間更短，RXRα mRNA表達下降與食管癌發生、轉移及不良預后有關。RXRs受體表達部位與腫瘤的惡性程度也有一定聯系〔4〕。本實驗結果顯示在結直腸癌中RXRα的陽性表達率低于良性腺瘤組及正常黏膜組，而且RXRα的表達與淋巴結轉移和臨床分期相關，與腫瘤分化程度無相關性，提示RXRα有望作為判定結直腸癌分化程度、病理分期的一種新的參考指標，予以進一步的研究。

MMPs在腫瘤或間質細胞中的過表達和癌癥的演變進展之間存在一定的因果關系。國內研究發現MMP-2在多種腫瘤組織中(如肺癌、胃癌、食管癌、卵巢上皮癌、宮頸癌等)表達水平均顯著高于相應正常黏膜組織，同時發現MMP-2水平與腫瘤分期及遠處轉移密切相關，提示MMPs與腫瘤進展相關，并指出了為腫瘤干預治療而對MMPs進行研究的重要性〔5～9〕。國外學者Roeb等〔10〕在對20例結腸癌、10例直腸癌患者進行研究時發現，結腸組織中MMP-2及MMP-9在腫瘤組織中水平均顯著高于相應正常黏膜組織，以MMP-9升高明顯;而在直腸腫瘤中，僅MMP-2水平顯著增高。

本研究的結果表明，MMP-2的表達從正常黏膜組織到結直腸癌有逐漸增加的趨勢，而且MMP-2與腫瘤大小和淋巴結轉移等病理參數之間有相關性，這一結果表明，MMP-2在結直腸癌前病變向癌轉變的過程中具有重要意義，在癌變發生之后，它與腫瘤分化程度無相關性。

RXRα與MMP-2在各種結直腸癌組織中明顯負相關性，提示RXRα和MMP-2與結直腸癌的發生、發展密切相關。

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3 Brabender J，Lord RV，Metzger R，et al.Role of retinoid X receptor mRNA expression in Barrett's esophagus〔J〕.J Gastrointest Surg，2004;8(4)：413-22.

4 Buentig N，Stoerkel S，Richter E，et al.Predictive impact of retinoid X receptor alpha expression in renal cell carcinoma〔J〕.Cancer Biother Radiopharm，2004;19(3)：331-42.

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9 羅曉華，龐 霞，張占薪，等.VEGF-C、VEGFR-3和MMP-2在宮頸癌組織中的表達及其與侵襲、轉移的關系〔J〕.中國婦幼保健，2010;25：5384-6.

10 Roeb E，Dietrich CG，Winograd R，et al.Activity and cellular origin of gelatinases in patients with colon and rectal carcinoma〔J〕.Cancer，2001;92：2680-91.