香菇多糖氯化鈉注射液中香菇多糖含量測定的研究

[摘要] 目的 建立一種香菇多糖氯化鈉注射液中香菇多糖含量的測定方法。 方法 以香菇多糖精制品為對照品，使用蒽酮-硫酸比色法測定。 結果 香菇多糖氯化鈉注射液在（10.15～30.45） μg/mL范圍內呈良好線性關系（r = 0.999 9），精密度RSD = 0.87%（n = 6），平均回收率為99.66%，RSD = 1.04%（n = 9）。 結論 本法簡便、可行、準確，適用于香菇多糖氯化鈉注射液中香菇多糖含量的測定。

[關鍵詞] 香菇多糖氯化鈉注射液；蒽酮-硫酸比色法；含量測定

[中圖分類號] R927 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2012）30-0108-02

Determination of the lentinan content in lentinan and sodium chloride injection

LI Yulong

School of Pharmaceutical Sciences，Hainan Medical University，Haikou 571199，China

[Abstract] Objective To establish a method of determining the lentinan content in lentinan and sodium chloride injection. Methods To determine by anthrone-sulfuric acid colorimetry，taking lentinan product as the reference control. Results When the concentration of the lentinan and sodium chloride injection is between 10.15 μg/mL and 30.45 μg/mL，it shows positive linear relations（r = 0.999 9），with the precision RSD = 0.87%（n = 6） and average recovery rate of 99.66%，RSD = 1.04%（n = 9）. Conclusion This method is simple，feasible and accurate，so it can be applied to the determination of the lentinan content in lentinan and sodium chloride injection.

[Key words] Lentinan and sodium chloride injection；Anthrone-Sulfuric acid colorimetry；Content determination

香菇多糖氯化鈉注射液有效成分為香菇多糖，其結構以β2（1→3）吡喃葡糖苷的結合為主鏈，又含有以β2（1→3）及β2（1→6）吡喃葡糖苷為分枝的β2（1→3）葡聚糖[1]。目前，國內外對香菇多糖的研究比較深入，測定方法也不斷改進，主要有比色法、滴定法、高效液相色譜法等[2，3]。本文著重探討蒽酮-硫酸法測定香菇多糖氯化鈉注射液中香菇多糖含量的條件，并進行了方法學研究，證明該方法簡便、可行、準確，可為產業化生產香菇多糖氯化鈉注射液的質量控制提供依據。

1 材料與方法

1.1儀器

UV1700-型紫外可見分光光度計（日本島津公司）RE-52A型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠），HH-S2S型恒溫水浴鍋（金壇市大地自動化儀器廠）。

1.2試藥

香菇多糖對照品（含量為99.95%），香菇多糖氯化鈉注射液（海南聯合制藥工業有限公司生產，規格：100 mL∶香菇多糖1 mg與氯化鈉0.9 g，批號：050101、050102、050103）。

1.3試劑

氫氧化鈉、硫酸、蒽酮、硝酸銀、糊精、熒光黃、硫酸銅、無水碳酸鈉、酒石酸鉀鈉、碳酸氫鈉、酚酞、草酸鉀、碘化鉀、硫代硫酸鈉、碘酸鉀、淀粉均為市售分析純。

2結果

2.1 測定波長的確定

取供試品2瓶，濃縮至約30 mL，加水分次轉移至100 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻。取新配制的蒽酮硫酸溶液（取0.2 g蒽酮溶于100 mL硫酸中）4 mL置于試管中，置冰浴中，沿管壁緩緩加入供試品溶液2 mL，分層后立即劇烈振搖，搖勻，置沸水浴中加熱6 min，取出，立即置冰浴中冷卻2 min，取出，搖勻，室溫放置10 min；另取本品空白輔料（氯化鈉）1.812 g，置于100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，與供試品同操作。以水為空白，在波長為400～800 nm的波長范圍內掃描，測定紫外吸收光譜圖。結果顯示，香菇多糖氯化鈉注射液在625 nm處有最大吸收，空白輔料在此處無吸收。

2.2 測定方法的選擇

參照香菇多糖注射液國家藥品標準[WS-1071（X-806）-2002]，擬定試驗方法為：取經五氧化二磷減壓干燥至恒重的香菇多糖對照品約10 mg，精密稱定，加0.5 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL，研磨，使溶解，加水分次轉移至500 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻。另取供試品2瓶，濃縮至約30 mL，加水分次轉移至100 mL量瓶中，定容并搖勻。取新配制的蒽酮硫酸溶液（取0.2 g蒽酮溶于100 mL硫酸中）4 mL分別置于兩試管中，冰浴中分別沿管壁緩緩加入供試品溶液和對照品溶液各2 mL，分層后立即劇烈振搖，搖勻，置沸水浴中加熱6 min，取出，立即置冰浴中冷卻2 min，取出，搖勻，室溫放置10 min，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2005年附錄Ⅳ A），以水為空白，在625 nm的波長處測定吸光度，計算。

2.3精密度試驗

取新配制的蒽酮硫酸溶液4 mL于試管中，置冰浴中，沿管壁緩緩加入供試品溶液2 mL，使分層，立即劇烈振搖，搖勻，置沸水浴中加熱6 min，取出，立即置冰浴中冷卻2 min，取出，搖勻，室溫放置10 min，照紫外-可見分光光度法在625 nm波長處測定吸收度，重復測定6次，見表1。試驗結果表明，RSD = 0.87% < 2.0%，可以滿足含量測定的要求。

表1 精密度試驗結果

2.4 重復性試驗

取本品6瓶，分別濃縮至約20 mL，分別加水分次轉移至50 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻；照上述測定方法測定，見表2。試驗結果表明，RSD = 1.29% < 2.0%，能滿足本品含量測定的要求。

表2 重復性試驗結果

2.5線性關系試驗

精密稱取干燥至恒重的香菇多糖對照品20.3 mg，加0.5 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL，研磨，使溶解，加水分次轉移至500 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻（相對于含量測定濃度的200%）；分別精密量取上述溶液加水稀釋制成含量測定濃度的50%、80%、100%、120%、150%，在冰浴條件下，分別精密量取上述溶液各2 mL，沿管壁緩緩加至已精密加入蒽酮硫酸溶液4 mL的試管中，使分層，立即劇烈振搖，搖勻，置沸水浴中加熱6 min，取出，立即置冰浴中冷卻2 min，取出，搖勻，室溫放置10 min，照紫外-可見分光光度法以水為空白，在625 nm的波長處測定吸光度分別為0.181 6、0.294 2、0.371 5、0.440 6、0.552 7。

試驗結果表明，香菇多糖在含量測定濃度的50%～150%范圍內，吸光度與濃度呈現良好的線性關系（r = 0.999 9），可滿足含量測定的要求。

2.6回收率試驗

取干燥至恒重的香菇多糖對照品約8 mg、10 mg、12 mg（注：每個稱三份），加0.5 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL，研磨，使溶解，分別加水分次轉移至已加入工藝比例混合的空白輔料的500 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。按（2.1.2）方法測定本品的回收率，見表3。實驗結果表明：選定的含量測定法平均回收率為99.66%，回收率均在98.0%～102.0%范圍，RSD = 1.04% < 2.0%，結果良好，可以滿足含量測定的要求。

表3 回收率試驗結果

3討論

實驗結果表明，實驗方法的重現性非常理想，蒽酮-硫酸法測定香菇多糖氯化鈉注射液在（10.15～30.45） μg/mL范圍內呈良好線性關系（r = 0.999 9），精密度RSD = 0.87%（n = 6），平均回收率為99.66%，RSD = 1.04%（n = 9）。經以上方法學考察認為，蒽酮-硫酸法測定香菇多糖氯化鈉注射液中香菇多糖的含量較穩定、可靠。

3.1 香菇多糖含量測定方法的選擇

本實驗主要成果是成功地運用蒽酮-硫酸法測定出香菇多糖氯化鈉注射液中香菇多糖的含量。

3.2 減少誤差的方法

為了減少含量測定中存在的誤差，在樣品濃縮過程中應注意溶液暴沸及樣品的析出，由于濃硫酸遇水放熱，可能導致水解等一系列的反應迅速進行，因此選擇較大的反應容器（25 mL納氏比色管），并于冰水浴中加入后緩緩搖勻的操作，使置沸水浴中之前反應的發生盡可能小；同時要嚴格控制實驗過程中加熱時間是6 min，因為實驗發現6 min是其反應的最高點，時間過短或太長都會影響測定結果。

3.3 反應靈敏度的影響

因樣品中含有其他可能消耗堿性硫酸銅試劑的物質，而蒽酮-硫酸法所用的顯色劑有特異性，僅與樣品中特定的物質反應， 具有較高的靈敏度[4]。

3.4 供試品溶液濃度高低的選擇

紫外-可見分光光度法測定供試品溶液的吸光度讀數以0.3～0.7之間的誤差較小，因此我們配制供試品溶液時要確保其吸光度在這個范圍內。

通過實驗的研究和總結，成功制訂出了一種科學、合理、可行的測定香菇多糖氯化鈉注射液含量的方法，為保證藥物含量的可控性提供了有力依據。

[參考文獻]

[1] 王國佳，曹紅. 香菇多糖的研究進展[J]. 解放軍藥學學報，2011，27（05）：451-455.

[2] 韋丁，陳健. 香菇多糖含量測定過程中加樣回收率的比較[J]. 食品研究與開發，2010，31（10）：155-157.

[3] 范曉良，顏繼忠，阮偉峰. 香菇多糖的提取、分離純化及結構分析研究進展[J]. 海峽藥學，2012，24（5）：1-4.

[4] 王國佳，曹紅. 香菇多糖中藥注射液含量測定方法的改進[J]. 解放軍藥學學報，2012，28（2）：139-140.

（收稿日期：2012-09-18）