XAGE—1b mRNA在肝癌患者血液中的表達

[摘要] 目的 探討原發性肝癌外周血液中XAGE-1b mRNA的表達意義。 方法 采集86例原發性肝癌患者靜脈血，實時熒光定量PCR檢測其中XAGE-1b mRNA的表達。 結果 原發性肝癌患者血液中XAGE-1b mRNA檢出率為80.8%。 結論 XAGE-1b mRNA可作為一種腫瘤標志物診斷原發性肝癌。

[關鍵詞] 肝癌；XAGE-1bmRNA

[中圖分類號] R735.7 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2012）36-0038-02

CT抗原是一類在除睪丸、胎盤等以外的正常組織中幾乎不表達的抗原，但可在多種腫瘤組織中表達。XAGE-1是通過生物信息學技術發現的一種新的CT抗原，且具有類似CT抗原的特性[1]。研究發現在肺癌、黑色素瘤、前列前癌等癌組織中均有較高的XAGE-1檢出率，并且揭示了XAGE-1的表達與腫瘤亞型間的關聯[2]。本研究采用實時熒光定量PCR（ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ）檢測了原發肝癌患者靜脈血中ＸＡＧＥ－１ｂ mRNA的表達，并對其表達的意義進行探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2006年8月～2011年5月接受原發性肝癌切除術的患者86例，其中男 71例。女 15例，年齡30～69歲。所有患者均經病理組織學證實，其中肝細胞癌79例，膽管細胞癌7例，大肝癌49例，小肝癌37例，甲胎蛋白（AFP）陽性62例，陰性24例。

1.2 實驗方法

術前采集患者周圍靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，4℃保存。6h內抽提血液總RNA。使用QLAamp RNA Blood Mini試劑盒（德國QLAGEN公司生產）處理血液樣本并提取樣本中的RNA，以12%瓊脂糖凝膠電泳抽樣檢驗其質量。提取出RNA后使用反轉錄試劑盒（立陶宛Fermentas公司）制備ｃＤＮＡ，以ｃＤＮＡ為模板進行ＰＣＲ反應，反應在Ftc2000熒光定量PCR儀（上海楓嶺生物科技有限公司）上進行?？偡磻w系20 μL，其中探針（20 mmol/L）0.5 μL，引物（20 mmol/L）0.9 μL，Mix10 μL（ＰＣＲ試劑盒，日本Ｔｏｙｏｂｏ公司），血液樣品cDNA2 μL，H20補至20 μL，每個樣品的目的基因與內參基因各設3個重復實驗。反應條件為94℃預變性60 s，94℃變性30 s，60℃退火，延伸及讀板60 s，共進行40個循環。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）作為內參基因。XAGE-1b上游引物5’-GCTGAAAGTCGGGATCCTACA-3’，下游引物5’-CTTCCATGTCGCGCACTG-3’，探針5’（ＴＥＴ）-CTGGGCAGC-AGACAG-3’（MGB）；GAPDH上游引物5’-GGGCTGCTTT-TAACTCTGGTAAAG-3’，下游引物5’-CCATGGGTGGAATCATATTGG-3’，探針5’（FAM）-CCTＣＡＡＣＴＡＣＡＴＧＧＴＴＡＣ－３’（ＭＧＢ）。每次反應均設置空白對照組及用于繪制標準曲線的6個梯度的標準樣品反應混合物，標準樣品反應混合物由復旦大學病毒與分子免疫學實驗室制備提供。PCR反應結束后，儀器電腦軟件自動生成以標準樣品基因拷貝數的對數值為縱坐標，以各拷貝數對應的ct值為橫坐標的標準坐標曲線，XAGE-1b及GAPDH的拷貝數均有各自的標準曲線，ct值取3次重復實驗的算術平均值，以各自樣本的XAGE-1b拷貝數與GAPDH拷貝數的比值來表示XAGE-1b的表達水平。甲胎蛋白檢查方法采用實驗室電化學發光方法。

1.3 統計學方法

應用SAS 6.12統計學軟件，采用χ2檢驗或秩和檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 XAGE-1b的表達與患者性別、年齡的關系

男性患者的標準表達率為80.8%，女性患者的標準表達率為78.4%，兩者之間差異無統計學意義（χ2=0.222，P > 0.05），30～39歲組（29例，陽性26例）、40～59歲組（27例，陽性21例）和60歲以上組（30例，陽性25例）表達率分別為90.0℅、77.8%和83.3%，差異無統計學意義（χ2=1.535，P > 0.05）。

2.2 XAGE-1b mRNA的表達量與臨床病理因素之間的關系

XAGE-1b mRNA的表達量在大肝癌與小肝癌之間、肝細胞癌與膽管細胞癌之間的差異無相關性，其表達與腫瘤大小、病理類型、疾病進展無相關性（P > 0.05）。

2.3 XAGE-1b mRNA的表達水平與AFP的關系

檢測結果提示，XAGE-1b mRNA的檢出率明顯高于AFP的檢出率（80.8% vs 72.1%），且一致性檢測顯示二者不具有相關性。

3 討論

隨著手術及放化療等輔助治療措施的開展，肝癌患者的預后已有所改善，但仍有很多患者死于肝癌的復發和轉移。如何在病程早期發現和診斷轉移，尤其是早期診斷微轉移對于調整治療方案、改善患者預后具有十分重要的意義。目前，腫瘤標志物甲胎蛋白（AFP）作為診斷肝細胞癌的首選指標，雖然可使原發肝癌獲得早期診斷[3]，但仍有30%～40%的肝細胞癌患者血清AFP呈陰性[4]。為此，眾多研究者都在尋找對原發性肝癌敏感而特異的診斷指標，試圖通過血中標志物和切除標本進行檢測，實現原發性肝癌的早期診斷和預后判斷。國外學者對XAGE-1b在原發性肝癌的表達進行研究，采用逆轉錄聚合酶鏈反應在體外培養的肝細胞癌系中發現了XAGE-1b mRNA的表達。國內學者通過對肝癌患者腫瘤組織中的ＸＡＧＥ－１基因進行了檢測，其結果顯示，XAGE-1b mRNA在肝癌組織中大量表達，且XAGE-1b mRNA的表達與患者的性別、年齡、是否合并有HBV感染、肝硬化、術前甲胎蛋白水平、腫瘤直徑、病理組織學分型以及是否有淋巴結轉移無關（P ＞ 0.05），但與腫瘤的TNM分期有明顯關聯（P < 0.05）[5]。

另有研究揭示，XAGE-1b mRNA是一種良好的腫瘤標志物，它敏感性高，尤其對AFP陰性的肝癌更具有診斷價值，并能良好地區分原發性肝癌、肝硬化、良性肝病，一定程度上彌補了AFP診斷原發性肝癌的不足[6]。本文研究結果顯示，原發性肝癌患者外周血XAGE-1b mRNA的檢出率高達80.8%，其表達與年齡、性別無關，表達量與腫瘤大小、病理類型、臨床分期無關，說明它是一個良好的腫瘤分子標志物，不僅可以預測血液中腫瘤細胞的微轉移，且在肝癌的診斷上也顯示出陽性率高的優勢。同時研究發現，AFP陰性肝細胞癌XAGE-1b mRNA表達率為82.4%，而且AFP與XAGE-1b mRNA的表達不具有相關性，這在很大程度上彌補了AFP陽性率方面的缺陷。因此，我們認為AFP與XAGE-1b mRNA聯合檢測或許是提高肝癌診斷水平的較好方法。

[參考文獻]

[1] Liu XF，Helman LJ，Yeun GC，et al. XAGE-1，a new gene that is frequently expressed in Ewing’S Sareoma[J]. Can Ceｒ Ｒｅｓ，２０００，６０（１７）：４７５２－４７５５．

[2] KoizumiF，ＮｏｇｕＣｈｉＹ，ＳａｉＫａＴ，ｅｔ al. XAGE-1bmRNA expression in prostate Cancer and antibody response in patient[J]. Microbiol Immunoｌ，２００５，４９（４）：４７１－４７６．

[3] 梁鋒，施寶明. 當今肝癌診斷中經典標志物AFP研究新進展[J]. 中華肝膽外科雜志，2009，15（4）：316-320.

[4] 吳孟超，肝臟外科學[M]. 第2版. 上海：上?？茖W技術文獻出版社，2000：186.

[5] 郭成，劉清光，紀玉強，等. 不同XAGE-1異構體在肝細胞癌中的表達[J]. 華中科技大學學報（醫學版），2009，38（5）：632-635.

[6] 侯振宇，潘澤亞，張經中，等. XAGE-1bmRNA在肝癌、肝硬化、良性肝病患者和健康人血液中的表達[J]. 中華肝膽外科雜志，2011，17（8）：645-647.

（收稿日期：2012-11-15）