免疫組化切片質量控制的幾點體會

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.07.267

免疫組織化學技術是常規病理診斷中不可缺少的重要手段，盡管試劑盒及自動免疫組化儀的使用使免疫組化結果陽性率大幅提高但由于免疫組化染色步驟繁多，不同的實驗室操作程序不同，結果都有所差異。影響免疫組化切片質量控制的幾個主要因素有：組織的固定、切片的制作、適宜的溫度，抗原的修復。

組織固定

組織的正確固定可以防止細胞在自身溶酶體的作用下溶解破壞。用于免疫組化染色固定的重要意義是保存組織細胞的抗原性，使抗原不發生彌散和抗原性喪失。若固定不良在以后的過程中將無法糾正。通常使用4%的中性緩沖福爾馬林作為固定劑，固定液量要充足，一般為組織塊總體積的4～5倍。盡快固定，時間8～48小時，穿刺活檢標本應盡量固定6小時以上，條件不允許的情況也不能少于1小時。

切片的制作

免疫組化切片必須用防脫片，切片厚度以3～4um為宜，薄而平整。切片攤片時組織裱在載玻片的位置非常重要，如果試劑覆蓋不到組織就會出現假陽性和陰陽“臉”的現象。組織盡量裱在載玻片中位。采用60℃恒溫烤片機烤片1小時以上。時間過短會造成脫片。用于脫蠟的二甲苯要經常更換，保證脫蠟徹底。滴抗體前用免疫組化筆在組織上方下方化橫線，劃線時不要緊靠組織，以免染色時產生邊緣效應。抗體滴量設置一般80μl，組織過大或附陽性對照是抗體滴量設置比平時量多20μl即可。

保持適宜的溫度和實驗室溫

蠟塊制備時石蠟應不超過62℃，最好用熔點低的石蠟。實驗室溫度以25℃為基準，空氣溫度在40%以上。室溫過低會影響抗原、抗體的結合，導致假陰性；溫度太高，室內空氣干燥會導致抗體孵育過程中干片，實驗失敗。如果實驗室溫度過低，可以適當延長孵育時間，溫度過高，可適當縮短時間，同時增加空氣溫度。為防止以上現象的發生，將整個過程把切片放在濕盒中再置于37℃恒溫水浴箱中進行可以防止切片干燥而導致失敗，又能解決對實驗室溫度難以達到要求的問題。

抗原的修復

組織經福爾馬林固定經常會引起蛋白質結構的改變而導致抗原決定簇被封閉，阻礙了抗原、抗體的結合。采用適合的抗原修復技術使抗原決定簇充分暴露，可以提高抗原的敏感性，染色結果要強于不修復。常用的抗原修復技術方法有微波加熱修復法、高溫高壓修復法、酶消化法。推薦方法：微波抗原修復法，抗原修復液以檸檬酸緩沖液(PH6.0)為佳。即微波高溫加熱3分鐘后(加熱至沸騰，92℃～95℃)，勿拿出切片待20分鐘后溫度降至室溫，用PBS液沖洗3次后進行下一步驟。

制片質量的好壞直接影響著診斷的準確性，正確的操作是病理技術質量控制的基礎。因此每位病理技術工作者都應認真對待制片的每個環節。

參考文獻

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