ELISA法測(cè)梅毒抗體假陽(yáng)性原因分析及對(duì)策

【摘要】 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）具有高特異性、高敏感性以及低檢測(cè)費(fèi)用等特點(diǎn)，其操作簡(jiǎn)單，無需特殊設(shè)備，適宜大批量檢測(cè)，已在國(guó)內(nèi)廣泛應(yīng)用。但因?yàn)橛绊懸蛩刂T多，難免會(huì)造成假陽(yáng)性，因此了解假陽(yáng)性出現(xiàn)的原因，避免假陽(yáng)性結(jié)果的產(chǎn)生是極其必要的。

【關(guān)鍵詞】 梅毒抗體；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）；假陽(yáng)性原因分析及對(duì)策

梅毒血清學(xué)試驗(yàn)對(duì)梅毒的診斷有很大的價(jià)值，但它存在著一定的假陽(yáng)性和假陰性情況，其結(jié)果一定要結(jié)合病史和臨床、體格檢查綜合分析考慮。

近年來梅毒在我國(guó)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的一種性傳播性疾病之一，可侵犯全身各臟器，幾乎可以引起全身所有組織器官的損害和病變，導(dǎo)致功能障礙。梅毒螺旋體抗體檢測(cè)在輸血前及手術(shù)前安全篩查中的意義已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出其自身病原體篩查的范疇[1]。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），因其價(jià)格低廉、操作方便、靈敏度高、特異性強(qiáng)而被廣泛使用。但在臨床工作中遇到的最大問題是出現(xiàn)假陽(yáng)性的問題，而假陽(yáng)性容易引起醫(yī)療糾紛，為了減少假陽(yáng)性的產(chǎn)生，現(xiàn)將假陽(yáng)性的原因進(jìn)行分析，總結(jié)如下。

1 假陽(yáng)性原因分析

1.1 機(jī)體因素

1.1.1 老年人隨著年齡的增長(zhǎng)，出現(xiàn)免疫功能下降或免疫功能的異常，而產(chǎn)生白蛋白抗體或異常蛋白質(zhì)，從而干擾檢測(cè)結(jié)果，出現(xiàn)假陽(yáng)性。

1.1.2 某些疾病中由于感染或免疫紊亂等會(huì)使機(jī)體產(chǎn)生與梅毒相交叉的抗體反應(yīng)，造成生物性假陽(yáng)性，如瘧疾、麻風(fēng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、肝硬化。傳染性單核細(xì)胞增多癥，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，非典型性肺炎、甚至妊娠都可出現(xiàn)陽(yáng)性。可能發(fā)生急性BFP反應(yīng)的感染性疾病有風(fēng)疹、上呼吸道感染、病毒性肺炎等等。而二酯嗎啡（海洛因）成癮者，抗體滴度可達(dá)1：64-1：128。對(duì)于陽(yáng)性結(jié)果不能以此認(rèn)定梅毒。而需進(jìn)一步分析，除病史和臨床之外，應(yīng)分析如為非特異性試驗(yàn)陽(yáng)性，必須明確其非特異性試驗(yàn)的滴度（定量試驗(yàn)結(jié)果）高低，在RPR滴度在1：8以下，應(yīng)作確認(rèn)試驗(yàn)，即特異性梅毒檢測(cè)，如熒光梅毒螺旋體抗體或TPDA試驗(yàn)。這些特殊成分在反應(yīng)過程中具有一定的吸附作用，使顯色反應(yīng)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性。

1.2 標(biāo)本因素

1.2.1 標(biāo)本處理不當(dāng) 抽血后標(biāo)本凝集不完全即離心分離，纖維蛋白未完全析出，容易在板孔中形成纖維蛋白薄膜或絮狀物，粘附在板孔堵塞洗板機(jī)針頭，造成洗板時(shí)清洗不徹底，測(cè)量時(shí)吸光度（OD）偏高，造成假陽(yáng)性結(jié)果。

1.2.2 標(biāo)本溶血 標(biāo)本溶血造成的假陽(yáng)性結(jié)果是臨床最常見情況之一，Hb具有類過氧化物酶的活性，其效應(yīng)與辣根過氧化物酶類似，溶血后反應(yīng)孔非特異性吸附Hb，洗滌時(shí)不易洗去，催化底物產(chǎn)生一定程度的顯色，使本底吸光度值升高而造成假陽(yáng)性[2]。解決的辦法是防止標(biāo)本溶血，一旦溶血發(fā)生，并且梅毒實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，必須重新采血進(jìn)行測(cè)定。

1.2.3 標(biāo)本污染 某些細(xì)菌菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶會(huì)產(chǎn)生非特異性干擾，造成假陽(yáng)性結(jié)果。

1.2.4 標(biāo)本保存不當(dāng) 采取即采血即做實(shí)驗(yàn)的方法，因?yàn)榇娣胚^久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體，AFP可形成二聚體，造成假陽(yáng)性[3]。

1.3 技術(shù)性因素 如實(shí)驗(yàn)室操作錯(cuò)誤，洗滌過程中有孔內(nèi)的洗液溢出現(xiàn)象，尤其是洗滌的前幾次，陽(yáng)性標(biāo)本孔的洗液污染臨近的陰性孔而出現(xiàn)假陽(yáng)性；這就要求在工作中嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，避免不必要的交叉感染。

1.4 儀器因素 全自動(dòng)加樣儀加樣時(shí)不是一份標(biāo)本一個(gè)加樣頭，遇到高濃度抗體標(biāo)本時(shí)，由于加樣針清洗程度不夠，同一加樣針拖帶污染導(dǎo)致其后一孔甚至多孔出現(xiàn)假陽(yáng)性的現(xiàn)象。酶標(biāo)儀使用過程中當(dāng)反應(yīng)板底部有氣泡或污染時(shí)，酶標(biāo)儀對(duì)反應(yīng)孔進(jìn)行垂直比色，易出現(xiàn)A值升高，導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果的產(chǎn)生[4]。

2 對(duì) 策

2.1 嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床操作規(guī)程》及試劑使用說明書操作。

2.2 血液處理 首先要做好采血環(huán)節(jié)的工作，方法要正確，操作要規(guī)范；盡量使用抗凝血標(biāo)本，血液抽取后，應(yīng)及時(shí)、完全的分離血清；血液不要存放過久，避免溶血及細(xì)菌污染，加強(qiáng)離心和防止標(biāo)本溶血能減少假陽(yáng)性發(fā)生。在運(yùn)送標(biāo)本的過程中，要避免標(biāo)本管的振動(dòng)，采集后的血液標(biāo)本最好應(yīng)先在37℃水浴箱中放置30分鐘后再離心。

2.3 吸頭滅菌 最好盡量使用一次性吸頭，使用前應(yīng)先徹底清洗，后使用高壓蒸汽滅菌。實(shí)驗(yàn)證明：經(jīng)高壓滅活處理后，其檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性率顯著降低[5]。

2.4 洗滌液配制及洗滌時(shí)間 洗滌液需現(xiàn)用現(xiàn)配，洗板機(jī)的洗液瓶及管道應(yīng)定時(shí)用次氯酸鈉消毒液浸泡，防止細(xì)菌生長(zhǎng)。洗滌時(shí)間不易過短，洗滌次數(shù)不能低于5次，洗滌要充分。洗滌過程中尤其是洗滌的前幾次盡量避免出現(xiàn)溢出現(xiàn)象，避免污染，拍板須盡量扣干。

3 小 結(jié)

梅毒血清學(xué)試驗(yàn)是診斷梅毒的重要依據(jù)，但不能成為唯一依據(jù)。對(duì)于TPPA陽(yáng)性的標(biāo)本，不能簡(jiǎn)單的用正在或曾經(jīng)感染梅毒進(jìn)行解釋。陽(yáng)性結(jié)果只提示所測(cè)標(biāo)本中有抗類脂抗體和（或）抗T.pallidum抗體存在，不能作為患者感染梅毒螺旋體的絕對(duì)依據(jù)；檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床及病史進(jìn)行綜合分析。從事梅毒血清學(xué)檢驗(yàn)的專業(yè)人員及相關(guān)醫(yī)務(wù)工作者應(yīng)注意學(xué)習(xí)相關(guān)知識(shí)，在對(duì)檢測(cè)結(jié)果有爭(zhēng)議時(shí)，能給患者及其親屬作出合理解釋。

目前我國(guó)梅毒的發(fā)病有增加趨勢(shì)，梅毒檢查、篩查也日漸增多。由于梅毒血清反應(yīng)本身存在假陽(yáng)性，而患者的自我保護(hù)意識(shí)也逐步增強(qiáng)，一旦出現(xiàn)假陽(yáng)性極易引發(fā)醫(yī)療糾紛。在梅毒抗體檢測(cè)過程中，了解出現(xiàn)假陽(yáng)性的影響因素，對(duì)于減少工作中差錯(cuò)事故的發(fā)生有著極其重要的意義。

參考文獻(xiàn)

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