HPLC法測定蜜煉甘草良咽含片中總皂苷的含量

【摘要】 目的 建立HPLC法測定蜜煉甘草良咽含片中總皂苷的含量。方法 采用HPLC法。以AgilentZORBAXSB-C18（250mm×4.6mm，5μm）為色譜柱；流動相：0.02%磷酸溶液：乙腈（80：20）；流速：1.0ml/min；檢測波長：205nm。結果 總皂苷（以人參皂苷Re計）在800-6400ug之間呈良好，線性關系回歸方程：Y=82476.250X-318.56，r=0.9993（n=5）；平均回收率為97.1%，RSD=1.15%（n=6）。結論 本法分離度好，專屬性強，準確度高，可用于測定蜜煉甘草良咽含片中總皂苷的含量。

【關鍵詞】 HPLC法；蜜煉甘草良咽含片；總皂苷；含量

蜜煉甘草良咽含片是以烏梅、羅漢果、青果、金銀花等為主要原料制成的保健食品，而羅漢果中的總皂苷具有清咽潤喉的功效，目前《保健食品檢驗與評價技術規范》（2003年版）紫外分光光度法測定中總皂苷的含量，試劑氣味刺激，操作復雜，結果不夠準確。本文采用HPLC法測定蜜煉甘草良咽含片中總皂苷的含量，操作簡單，準確。

1 儀器與試藥

島津LC-20AT型高效液相色譜儀，島津SPD-20A紫外檢測器，島津SIL-20A自動進樣器，CTO-10AS色譜工作站。METTLER AE 240電子天平，JAC-300超聲波清洗機。

蜜煉甘草良咽含片（批號2011 09 06，2011 12 02，2012 01 04）人參皂苷Re對照品（中國藥品生物制品檢定所），乙腈為色譜純，其他為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：0.02%磷酸溶液：乙腈（80：20）；流速：1.0ml/min；檢測波長：205nm；進樣量：20ul；柱溫：30℃。理論板數按人參皂苷Re計算不低于2000。

2.2 溶液的制備 精密稱取人參皂苷Re對照品400.03mg，置10ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成40mg/ml對照品貯備液。精密稱取供試品（相當于人參皂苷Re0.2g），置25ml的量瓶中，加水適量，超聲30分鐘，加水稀釋至刻度，濾過，精密量取續濾液5ml，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用甲醇溶解并移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察 線性關系的考察：精密量取人參皂苷Re（40mg/ml）對照品貯備液0.2，0.4，0.8，1.2，1.6.ml，分別置10ml的量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件，分別進樣20ul，以進樣量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），得回歸方程：Y=82476.250X-318.56，r=0.9993（n=5）。結果表明，在800-6400μg范圍內，人參皂苷Re峰面積值與進樣量有良好的線性關系。

精密度實驗：精密量取對照品貯備溶液1ml，置10ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，重復進樣5次，測定其峰面積，結果RSD分別為0.59%，表明儀器精密度良好。

穩定性實驗：取供試品溶液（批號2012 01 04）別于0，2，4，6及8h，分別進樣20 μl，測得供試品中人參皂苷Re峰面積值并計算。結果RSD為1.62%（n=5），實驗表明，供試品溶液在8h內穩定。

重復性實驗：取同一批供試品溶液5份，依法測定峰面積。結果RSD為0.85%，表明本方法重復性良好。

空白干擾試驗：按溶液制備方法制備不含羅漢果的陰性對照溶液，按上述色譜條件測定，結果在陰性對照溶液中，與人參皂苷Re保留時間處無色譜峰出現。

加樣回收率實驗：精密量取6份已知含量的供試品（批號2012 01 04）2ml，分別加入人參皂苷Re（4mg/ml）對照品溶液0.5ml，1.0ml，1.5ml各2份，按上述供試品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，回收率平均值為97.1%，RSD為1.15%（n=6）。結果加樣回收良好。

供試品含量測定：取3批供試品，按供試品溶液制備方法制備供試液，用0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液20ul，記錄色譜峰峰面積，以外標法計算，測定人參皂苷Re的含量。結果批號2011 09 06，2011 12 02，2012 01 043批供試品人參皂苷Re含量分別為3.95，4.32，3.80mg/g。

3 討 論

用HPLC法測定蜜煉甘草良咽含片中總皂苷的含量，同紫外分光光度法比較，快速，準確，重現性好。

本法在樣品提取方法中曾試用過正丁醇，75%乙醇，以及通過Amberlite-XAD-2大孔樹脂等幾種方法，實驗結果表明用正丁醇提取的樣品回收率高。

提取次數考察：按照溶液制備的測定方法，分別用水飽和正丁醇提取1，2，3，4，5次，依次測定。結果表明提取3次以后，人參皂苷Re總皂苷基本提盡。

參考文獻

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