建立黃芪藥材中黃酮類成分HPLC指紋圖譜的方法

【摘要】 目的 就建立黃芪藥材中黃酮類成分HPLC指紋圖譜的方法進行探討。方法 采用HPLC法建立黃芪中黃酮類成分指紋圖譜。結果 對照品在0.0834-1.5012μg范圍內與峰面積值呈良好的線性關系?；厥章省⑵骄厥章省SD都較高。除了樣品2（山西大同）和樣品10（陜西旬邑）外，其它各批的相似度均大于O.94。結論 本文所選用的方法回收率好、操作簡便，同時專屬性較強，可以對黃芪藥材中黃酮類成分的質量更好地控制。

【關鍵詞】 黃芪藥材；黃酮類成分；HPLC指紋圖譜

黃芪為補氣中藥，有補氣升陽、益衛固表，托毒排膿和益氣利水作用。產于內蒙古、山西、甘肅、黑龍江等地。春秋采挖，除去須根、根頭，曬干。切片，生用或蜜炙用。黃芪性微溫、味甘，含多種微量元素（銅、鋅、硒等）、多種葉酸、氨基酸、多糖、蔗糖、皂甙，可以利尿消腫、補肺固表、補脾益氣，可以有效地調節血糖含量、增強心肌收縮力、抗應激、抗衰老、抗菌、降壓、利尿，主治肢體麻木、貧血萎黃、氣血不足、臟器下垂、中氣下陷、咳喘短氣、肺氣虛弱、氣虛自汗、脾胃氣虛等[1]。為了控制其質量，通過研究，并參照有關文獻[2]，用HPLC指紋圖譜法測定黃芪藥材中黃酮類成分，方法簡便可行，準確可靠[3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilengt1260高效液相色譜儀（LC2000）、AUW-220D電子分析天平（日本島津）、A4DL型自動純水蒸餾器（廣州恒廣科學儀器有限公司）、DSQ10260超聲儀（上海亞榮生化儀器廠）、自動進樣器、UV2401-PC紫外分光光度計（日本島津）、RE-52AA旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 試藥 黃芪藥材均采集于全國各地，按照產地不同分為十批次；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純[4]。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液及陰性對照溶液的制備 取6.0g黃芪將其研細，然后進行精密稱定，稱定之后將其置于瓶中，加入40ml含量為70%的乙醇。然后加熱回流3小時，放冷，濾過放于量瓶中（容量為100ml）。再分別對殘渣和容器進行洗滌，洗液并入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取缺黃芩的其他味藥按處方工藝制成陰性制劑，按上述方法制備陰性對照溶液[5]。

2.2 線性關系考察 取在60℃減壓干燥4小時的對照品約10mg，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，加甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻。分別進樣1、2、4、6、8、10、12、14、16、18μl，記錄峰面積，以峰面積積分值（Y）對對照品濃度（X）進行線性回歸，得回歸方程：Y=5827.96835X-42.05934，r=0.9999。結果表明，對照品在0.0834-1.5012μg范圍內與峰面積值呈良好的線性關系[6]。

2.3 色譜條件 流動相選用比例為53：47：0.2的甲醇-水-磷酸，流速0.6ml/min；填充劑選用十八烷基硅烷鍵合硅膠，檢測波長為276nm，柱溫控制在35℃[6]。

2.4 精密度實驗 取黃芪藥材樣品粉末（50目）約1.5g，進行供試品的制備，采用上述色譜條件，進樣20μL，連續進樣6針，并以5號峰作為參照峰，結果各峰相對保留時間和相對峰面積的RSD（n=6）均小于2%。

2.5 穩定性試驗 在室溫條件下，取供試品溶液分別在0，2，4，6，8，10，12h各進樣10μl，（放置0小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時，然后各進樣10μl），得出試驗結果：n=7，RSD為：0.9%，平均峰面積為：2714238，這些數據充分表明在12h內，樣品的穩定性良好。

2.6 重復性實驗 取同一批黃芪藥材樣品粉末（50目）約1.5g，平行稱定5份進行供試品的制備，采用上述的色譜條件，進樣20μL，結果各色譜峰相對保留時間和相對保留峰面積的平均值的RSD均小于3%。

2.7 回收率試驗 回收率試驗采用加樣回收法，取100g黃芪藥材，然后對其進行認真地研細，研細之后稱取樣品18g，分為6份，每份3g。然后加入5ml含量為0.2055mg.ml-1的對照品儲備液，按照（3）的方法進行提取，制成供試品溶液。然后計算回收率、平均回收率等，見表1，可見回收率、平均回收率、RSD都較高。

2.8 指紋圖譜中峰面積相似度計算 實驗結果表明，10批不同產地黃芪藥材的相似度在0.826-0.990之間，除了樣品2（山西大同）和樣品10（陜西旬邑）外，其它各批的相似度均大于0.94，見表2。3 討 論

3.1 本實驗建立黃芪中活性成分黃酮類成分HPLC指紋圖譜，為了提高黃酮類成分的溶解度和純度，實驗對其提取工藝進行了反復的摸索與優化[7]。

3.2 本文所選用的方法回收率好、操作簡便，同時專屬性較強，可以對黃芪藥材中黃酮類成分的質量更好地控制。

參考文獻

[1] 中華人民共和國藥典（一部）2005.

[2] 白焱晶，王智穎，杜新剛等.黃芪藥材的HPLC-UV指紋圖譜研究[J].中草藥，2008，3（7）：1089-1092.

[3] 朱恩圓，竇玉玲，魏東芝，王崢濤，盧艷花.蜂膠HPLC指紋圖譜及質量控制[J].中國中藥雜志，2005（18）：123-126.

[4] 劉芳，胡坪，Annika Küster，任德權.絞股藍藥材黃酮類化合物的HPLC指紋圖譜研究[J].中成藥，2009（04）：122-125.

[5] 武彥舒，周丹蕾，鄢丹，任永申，方藝霖，肖小河，杜曉曦，王建.天然蟲草與蟲草菌絲體的HPLC指紋圖譜研究[J].中國中藥雜志，2008（19）：120-123.

[6] 李海燕，李宏博，郝寧，許永男，樸鐘云.白頭翁屬藥用植物的HPLC指紋特征與化學分類研究[J].中國中藥雜志，2011（11）：133-136.

[7] 王巍，鞠成國，朱旭，趙煥君.急性子中黃酮類成分HPLC指紋圖譜的初步研究[J].中成藥，2011（02）：145-147.