根除幽門螺桿菌感染失敗與CYP2C19基因變異關系的研究

[摘要] 目的探討根除幽門螺桿菌（Hp）感染失敗與CYP2C19基因變異關系。 方法收集本院診斷為慢性胃炎、胃潰瘍和反流性食管炎經標準奧美拉唑三聯治療失敗60例，以CYP2C19 基因型分組，再以埃索美拉唑三聯治療1周后復查14C，并判斷Hp根除情況。結果60例Hp根除失敗患者可分為CYP2C19 基因強代謝型和弱代謝型兩組，組間年齡、病種、性別比較差異無統計學意義，民族分布差異有統計學意義。經埃索美拉唑三聯治療后，CYP2C19強代謝型組Hp根除率為93.9%，弱代謝型組Hp根除率為100%，兩組患者Hp根除無統計學意義。結論根除Hp感染失敗與CYP2C19基因變異關系緊密。

[關鍵詞] 根除幽門螺桿菌；CYP2C19；變異

[中圖分類號] R573.3[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）10-0145-02

Study the relationship between eradication of Helicobacter Pylori infection and CYP2C19 genetic mutation

MIUYangde

Department of Gastroenterology，Taizhou Municipal Hospital in Zhejiang Province， Taizhou 318000，China

[Abstract] Objective To analyze the relationship between eradicate of Helicobacter pylori infection and CYP2C19 genetic mutation. Methods All of 60 patients diagnosed chronic gastritis，gastric ulcer or reflux esophagitis who underwent standard omeprazole triple therapy and failed to eradicate Hp in our hospital were enrolled in our study.CYP2C19 genotypes separated 60 cases into two groups.Then esomeprazole triple therapy was applied for 1 week.After treatment，14C-urea breath test was done to determine the Hp eradication situation. Results All of 60 patients with failure Hp eradication with CYP2C19 gene were divided into strong and weak metabolic type groups.Age，disease type had no significant differences，while ethnic distribution has differences.After esomeprazole triple therapy，CYP2C19 strong metabolizers’Hp eradication rate was 93.9%，weak metabolizers’100%.There was no difference for two group’s Hp eradication rates. Conclusion Failure eradication of Helicobacter pylori infection and CYP2C19 genetic mutation are closely related.

[Key words] Eradication of Helicobacter Pylori; CYP2C19; Mutation

CYP2C19是1993年Wrighton等從人類肝臟中分離出的一種酶，后來Goldstein等發現其對代謝存在遺傳多態性。質子泵抑制劑（PPI）在藥動學、藥效學等方面高度依賴CYP2C19進行代謝，并受CYP2C19基因變異的影響，但不同的質子泵抑制劑對CYP2C19的依賴程度不同，可能與CYP2C19基因變異有關[1-3]。本研究旨在探討對CYP2C19依賴程度有差異的PPI藥物對幽門螺桿菌（Hp）根除的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

獲得院內倫理委員會許可，收集本院2010年1月～2011年5月在我院消化內科診斷為慢性胃炎、胃潰瘍、反流性食管炎經標準奧美拉唑三聯治療（奧美拉唑20 mg，bid，阿莫西林膠囊500 mg，bid，克拉霉素500 mg，bid）1周后14C呼氣檢測陽性患者60例，獲得患者的簽名同意書。其中慢性胃炎26例，胃潰瘍18例，反流性食管炎16例。排除標準：有Hp 根除史，胃癌或胃手術史患者及中途退出者。

1.2 給藥方法

60例患者予以埃索美拉唑（埃索美拉唑腸溶片，阿斯利康制藥有限公司，規格：20 mg/片，批號20101103）、阿莫西林膠囊（廣州白云山制藥總廠提供，規格：500 mg/粒，批號2010106）、克拉霉素500 mg，bid，1周。

1.3檢測指標

治療前測定60例病患的CYP2C19基因分型，治療后復查14C轉陰率并記錄。

1.4. 基因分型鑒定

采用聚合酶鏈式反應結合限制性內切酶技術進行CYP2C19 基因型檢測。抽取外周靜脈血2 mL（EDTA抗凝），采用QIAamp DNA MiniKit提取基因組DNA。擴增外顯子5的引物序列：上游序列5'-AATTACAACCAGAGCTTGGC-3'，下游序列5'-TATCACTTTCCATAAAAGCAAG-3'（mL型突變）。擴增外顯子4 的引物序列：上游序列5'-TATTATTATCTGTTAACT AATATGA-3'，下游序列5'-ACTTCAGGGCTTGGT CAATA-3'，（m2 型突變）。PCR反應體系：總體積50μL，含有基因組DNA 5 μL，10 mmol/ L dNTP 1.0 μL，Taq DNA 聚合酶0. 4 μL，10 × Buffer 5 μL，mL：上下游引物各4.5 μL，m2：上游引物2.5 μL，下游引物3.1 μL。采用Gene Amp PCR System 9700 PCR 儀。反應條件：95℃預變性15 min后，進入94℃變性60 s、55℃ （m2：53 ℃） 退火60 s、72℃延伸60 s，循環35個周期72 ℃ 延伸7 min。PCR 產物經2% 瓊脂糖凝膠電泳檢驗，并經限制性內切酶SmaI（ mL） 25 ℃或BamHI（m2）37 ℃酶切4 h。酶切產物經2% 瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察電泳帶。CYP2C19 mL突變基因時，經PCR 反應擴增出CYP2C19 外顯子5的特異片段169 bp，經SmaI 酶消化后，強代謝型含有限制性內切酶SmaI酶切位點而產生兩個片段，長度分別為120 bp 和49 bp；弱代謝型含有長度為169 bp 的片段。

1.5統計學處理

采用SPSS 15.0統計軟件分析處理，其中計量資料以均數±標準差表示，方差齊者采用t檢驗，方差不齊時采用Wilcoxon秩和檢驗。計數資料采用卡方檢驗。

2 結果

2.1 60例Hp根除失敗患者的分組情況

根據PCR反應結果，60例Hp根除失敗患者均可歸類為CYP2C19 基因強代謝型和弱代謝型，兩組間年齡、病種、性別比較差異無統計學意義，民族分布有差異有統計學意義。

2.2埃索美拉唑三聯治療后的Hp根除情況

經埃索美拉唑三聯治療后，CYP2C19強代謝型組Hp根除率為93.9%，弱代謝型組Hp根除率為100%，兩組Hp根除率比較，差異無統計學意義，民族分布差異有統計學意義。

3 討論

奧美拉唑是最先被證實為CYP2C19代謝底物并具有羥化代謝多態性的抗消化性潰瘍藥物，血藥濃度存在個體差異，抑酸效果也因人而異。研究表明，人類表達的CYP2C19分為兩種表型，即強代謝型和弱代謝型。CYP2C19基因強代謝者使得PPI代謝速度快，弱代謝者代謝速度慢。CYP2C19基因強代謝者多次給予PPI后才能發揮最大抑酸作用，而弱代謝者服用PPI的療效高于前者[4]。

新研制的PPI，如埃索美拉唑則更少依賴于CYP2C19代謝，從而療效提高。有研究顯示，應用奧美拉唑組的CYP2C19弱代謝者的AUC平均值是強代謝者的4～6倍，反之，應用雷貝拉唑組的弱代謝者的AUC平均值僅是強代謝者的2倍[5-6]。

本研究顯示，經PCR將奧美拉唑三聯治療后Hp根除失敗的患者60例分為 CYP2C19強代謝型和弱代謝型。埃索美拉唑三聯治療后，僅2例Hp根除失敗，而且CYP2C19強代謝型組和弱代謝型組的Hp根除率無統計學意義，可見埃索美拉唑對Hp根除失敗患者或CYP2C19強代謝型或弱代謝型都有治療效果，但治療后仍出現Hp根除失敗體現了埃索美拉唑的代謝雖然較少依賴CYP2C19，但依賴的絕對性是肯定的。

另外，兩次治療均顯示民族與CYP2C19表達存在相關性，與Kesavan R[7]等的研究結果相似。但因研究人數較少，并未對各個民族間的差異性進行分析，本課題的未來方向可就我國多個民族間的CYP2C19表達變異進行系統研究。

[參考文獻]

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[3] Yang JC，Wang HL，Chern HD. Role of omeprazole dosage and cytochrome P450 2C19 genotype in patients receiving omeprazole-amoxicillin dual therapy for Helicobacter pylori eradication[J]. Pharmacotherapy，2011，31（3）：227-238.

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[6]Lee VW，Chau TS，Chan AK. Pharmacogenetics of esomeprazole or rabeprazole-based triple therapy in Helicobacter pylori eradication in Hong Kong non-ulcer dyspepsia Chinese subjects[J]. J Clin Pharm Ther，2010，35（3）：343-350.

[7]Kesavan R，Narayan SK，Adithan C. Influence of CYP2C9 and CYP2C19 genetic polymorphisms on phenytoin-induced neurological toxicity in Indian epileptic patients[J].Eur J Clin Pharmacol，2010，66（7）：689-696.

（收稿日期：2011-10-24）