不同提取方法對苦參生物總堿的影響

摘要：目的：考察不同方法對苦參中苦參生物總堿提取效率的影響。方法：采用酸性染料比色法，對苦參酸水回流、乙醇回流、酸水超聲提取三種方法的提取液中的生物總堿進行含量測定。結果：水回流、乙醇回流、酸水超聲提取液中苦參總堿含量分別為0.573%、0.652%、0.634%。結論：以苦參總堿作為評價指標，乙醇回流結果較好，酸水超聲提取次之，酸水回流最低。

關鍵詞：不同提取方法 苦參生物總堿 影響

【中圖分類號】R-3 【文獻標識碼】B 【文章編號】1008-1879（2012）12-0393-01

苦參又名地槐、野槐、牛參等，為豆科槐屬植物（Sophora flavescens Ait）的干燥根，分布于我國南北各地^[1]。近年來醫學界對苦參有效成分提取、分析及其藥理等方面進行大量的研究并取得很大進展。苦參中苦參總堿的提取方法較為常用的有溶劑提取法，包括水提和醇提，加熱回流和超聲提取。目前，其總生物堿的含量測定方法有重量法、酸堿滴定法、酸性染料分光光度法^[2]。為了充分研究不同方法的生物總堿提取效率，我們分別采用酸水回流、乙醇回流、酸水超聲三種方法，并采取酸性染料比色法，測定不同提取方法中苦參總生物堿的含量。該研究為工業化生產苦參總堿提供了科學的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器試劑。UV2100紫外分光光度計（美國惠普公司），PH精密數顯酸度計（上海天達儀器有限公司），微量進樣器（上海玻璃儀器廠）。苦參堿由廣東梅州嘉應制藥有限公司提供，苦參（廣東康美股份有限公司），其它試劑均為分析純。

1.2 試液配制。①溴麝香草酚藍緩沖溶液的配制：量取0.1M的磷酸二氫鉀50ml轉移至于100ml容量瓶中，加入0.1M氫氧化鈉42.2ml，再加蒸餾水7.6ml，用酸度計校正為7.6。并精密稱取溴麝香草酚藍0.0125g，加入上述配制溶液使溶解，搖勻即得。②苦參堿標準品溶液配制：精密稱取苦參堿標準品15.00mg用甲醇定容到5ml，即為3.0mg/ml。

1.3 比色法最大吸收波長。苦參堿酸性染料比色法的最大吸收波長在400～420nm之間，以2nm為單位左右移動波長，確定最大吸收度的波長所在位置，結果顯示410nm處為其最大吸收波長。

1.4 標準曲線的繪制。取已配制好的上述苦參堿標準品溶液20、30、40、50、60ul分別置于25ml的帶塞磨口錐形瓶中，置于水浴80℃蒸干溶劑，加入溴麝香草酚藍pH=7.6閉塞劇烈振搖3min，分別轉入25ml分液漏斗中，靜置2h，使水層與氯仿層完全分層后，分取氯仿層，在410nm波長處測定吸收度，以未加生物堿的氯仿萃取液為空白對照^[3]。

建立苦參堿含量X與吸光度A間的線性關系，采用SPSS作回歸分析，得到方程為：

A=0.0226X+0.0122，r=0.991

說明苦參堿在60ug～180ug之間線性關系良好。

1.5 穩定性實驗。取苦參堿標準溶液40ul，按2.3標準曲線下方法每隔1h測定其吸收度，結果表明，苦參堿和溴麝香草酚藍在pH=7.6緩沖溶液中形成的離子對，在氯仿中8h內是穩定的。

2 結果與分析

2.1 苦參總堿的提取。

2.1.1 酸水回流法提取苦參總堿。將苦參藥材粉碎成80目粉末，取10g，加0.3%的HCl溶液回流提取3次，提取時間分別為1.5h、1h、1h，加入HCl溶液量依次為40ml、30ml、30ml，總料液比為1∶10。合并提取液于真空旋轉濃縮至10ml，過濾，冷卻，加蒸餾水定容到50ml。

2.1.2 乙醇回流法提取苦參總堿。將苦參藥材粉碎成80目粉末，取10g用95%的工業酒精回流提取3次，提取時間分別為1.5h、1h、1h，加入工業酒精的量依次為40ml、30ml、30ml，總料液比為1∶10。合并提取液于真空旋轉濃縮至10ml，過濾，冷卻，加蒸餾水定容到50ml。

2.1.3 酸水超聲法提取苦參總堿。將苦參藥材粉碎成80目粉末，取10g，用0.3%的HCl溶液超聲提取3次，提取時間分別為1.5h、1h、1h，加入HCl溶液量依次為40ml、30ml、30ml，總料液比為1∶10。合并提取液于真空旋轉濃縮至10ml，過濾，冷卻，加蒸餾水定容到50ml。

2.2 樣品液總生物堿的含量測定。分別用微量進樣器吸取酸水回流、乙醇回流、酸水超聲樣品液各20ul，置于25ml帶塞磨口錐形瓶中，于水浴80℃蒸干溶劑，分別加入溴麝香草酚藍pH=7.6緩沖溶液6ml，氯仿6ml，閉塞劇烈振搖5min，分別轉入25ml分液漏斗中，靜置2h，使水層與氯仿層完全分層后，分取氯仿層，在410nm波長處測定吸收度，以未加樣品液的氯仿萃取液為空白對照。用工作曲線法進行定量。結果見表1。

3 討論

本實驗采用工作曲線法進行定量，方法簡單，可靠，重現性好。用待測組分的純品作對照物質，以對照物質和樣品中待測組分的響應信號相比較進行定量的方法稱為外標法。此法可分為工作曲線法及外標一點法等。工作曲線法是用對照物質配制一系列濃度的對照品溶液確定工作曲線，求出斜率、截距。在完全相同的條件下，準確進樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液，根據待測組分的信號，從標準曲線上查出其濃度，或用回歸方程計算。

酸性染料比色法測定樣品生物總堿含量時，為了防止氯仿層中的水分測定結果的影響，應通過加吸水劑無水硫酸鈉方法除去氯仿萃取液中的水分。酸性比色法的pH值要求較高，本實驗所用的溴麝香草酚藍緩沖液，配制好必須用pH酸度計進行校正，否則會對測定結果帶來影響。

參考文獻

[1]辛海量，趙玉海，林峰，等.苦豆草中總生物堿含量測定[J].解放軍藥學學報，2002，18（2）：113-115

[2]鄭虎占，董澤宏，佘靖.中藥現代研究與應用[M].第3版.北京：學苑出版社，1998.270