依達(dá)拉奉對(duì)大鼠延髓缺血后超氧化物歧化酶、丙二醛的影響

朱 江， 郭 森， 趙 亮， 高燕軍， 張曉璇， 孫艷軍

依達(dá)拉奉對(duì)大鼠延髓缺血后超氧化物歧化酶、丙二醛的影響

朱 江1， 郭 森2， 趙 亮1， 高燕軍1， 張曉璇1， 孫艷軍1

目的 探討依達(dá)拉奉對(duì)大鼠延髓缺血中的影響。方法 將Wistar大鼠分為假手術(shù)組、依達(dá)拉奉干預(yù)組(干預(yù)組)、延髓缺血模型組(模型組)，采用多點(diǎn)阻斷腦動(dòng)脈方法制造延髓缺血模型。依達(dá)拉奉干預(yù)組腹腔注射依達(dá)拉奉;延髓缺血模型組腹腔注射生理鹽水。分別在實(shí)驗(yàn)7d、14d時(shí)取延髓，檢測(cè)腦組織的含水量、SOD、MDA水平。結(jié)果 延髓缺血模型組腦組織SOD水平下降，腦組織MDA濃度先升高后降低;與延髓缺血模型組相比，干預(yù)組SOD下降的幅度小(P＜0.01)，MDA濃度降低;干預(yù)組腦組織含水量明顯低于延髓缺血模型組(P＜0.01)。結(jié)論 依達(dá)拉奉有效清除自由基，對(duì)延髓缺血具有明顯保護(hù)作用。

依達(dá)拉奉;延髓缺血;超氧化物歧化酶;丙二醛;大鼠

目前認(rèn)為腦組織缺血后自由基增多是腦損傷加重的主要原因［1］，而超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等是反映氧自由基水平的主要指標(biāo)。依達(dá)拉奉是新型自由基清除劑，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察依達(dá)拉奉對(duì)大鼠延髓缺血后SOD、MDA水平的影響，探討依達(dá)拉奉清除自由基的有關(guān)機(jī)制及對(duì)延髓缺血后的保護(hù)作用。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物與分組 SPF級(jí)Wistar成年健康雄性大鼠，220～260g，購(gòu)于河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。36只大鼠隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組、干預(yù)組、模型組，按時(shí)間點(diǎn)分為7d、14d兩個(gè)亞組，每個(gè)亞組12只大鼠。

1.2 方法

1.2.1 延髓缺血模型制備 結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈:10%水合氯醛腹腔注射麻醉(350mg/kg)，仰臥固定，頸部正中切口，鈍性分離胸鎖乳突肌，暴露分離出右側(cè)頸總動(dòng)脈并結(jié)扎切斷，檢查無(wú)活動(dòng)性出血后，用生理鹽水和青霉素(1×105U/L)沖洗后縫合傷口。電凝椎動(dòng)脈:大鼠俯臥固定，于后正中線第1頸椎水平處作縱形切口，沿中線分開(kāi)肌層，暴露第1頸椎橫突孔，將高頻電刀的電凝刀頭插入橫突孔內(nèi)凝閉椎動(dòng)脈3～4s，檢查無(wú)活動(dòng)性出血后，用生理鹽水和青霉素(1×105U/L)沖洗后縫合傷口。待清醒后，單籠保溫喂養(yǎng)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的干預(yù)方法 假手術(shù)組只暴露雙側(cè)椎動(dòng)脈及右側(cè)頸總動(dòng)脈，不做血管阻斷處理。干預(yù)組、模型組均在阻斷雙側(cè)椎動(dòng)脈及右側(cè)頸總動(dòng)脈后立即開(kāi)始治療。干預(yù)組每天腹腔注射依達(dá)拉奉二次，時(shí)間間隔12h，每次注射計(jì)量按3mg/kg計(jì)算，到術(shù)后7d和14d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別處死，取延髓。模型組每天腹腔注射生理鹽水二次，時(shí)間間隔12h，注射劑量為0.5ml/次。到術(shù)后7d和14d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別處死，取延髓。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本制作 將大鼠以10%水合氯醛腹腔注射麻醉(350mg/kg)，麻醉后快速斷頭法處死。在冰盤上快速取延髓，置于0～4℃生理鹽水中漂洗，清除血液，濾紙拭干。每個(gè)亞組中6只腦組織用于測(cè)含水量，另外6只腦組織放入9倍量的0～4℃生理鹽水中，在冰水浴中用玻璃勻漿器制成10%腦勻漿，用離心機(jī)3500r/min，離心15min，取上清液分3份置于－20℃冰箱中保存，用于測(cè)定SOD、MDA含量。

1.2.4 腦組織含水量、腦組織中SOD、MDA含量測(cè)定 (1)腦組織含水量測(cè)定:用濾紙拭干延髓表面的水分，準(zhǔn)確稱取延髓濕重，然后置于90℃烘箱中熱烘48h。再次準(zhǔn)確稱取延髓干重。延髓含水量(%)=(延髓濕重－延髓干重)/延髓濕重× 100%。(2)延髓中SOD、MDA含量:SOD含量采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定。MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法測(cè)定。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所得數(shù)據(jù)，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS14.0進(jìn)行分析，采用t檢驗(yàn)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腦組織大體變化 延髓缺血后水腫于7d明顯，14d時(shí)有所減輕。干預(yù)組各時(shí)間段腦組織腫脹程度與模型組相比均減輕。

2.2 各組延髓含水量 延髓含水量7d顯著增高，與假手術(shù)組比較差異顯著(P＜0.01);干預(yù)組與模型組比較，于缺血后7d含水量減少，差異有顯著性(P＜0.01)(見(jiàn)表1)。

2.3 各組腦組織中SOD、MDA含量 與假手術(shù)組相比，各組延髓SOD含量減少;干預(yù)組與模型組相比較，干預(yù)組SOD含量升高。模型組MDA含量較高，干預(yù)組的MDA含量較模型組減低(見(jiàn)表2、表3)。

表1 各組大鼠腦組織含水量的比較(±s，%，n=6)

表1 各組大鼠腦組織含水量的比較(±s，%，n=6)

與假手術(shù)組相比#P＜0.01;延髓缺血模型組相比*P＜0.01

組別 假手術(shù)組 延髓缺血7d 延髓缺血14d模型組干預(yù)組假手術(shù)組 70.99±0.78 77.45±2.14# 75.26±1.05* 74.29±0.81 72.61±1.36

表2 各組大鼠腦組織中SOD含量的比較(±s，n=6)

表2 各組大鼠腦組織中SOD含量的比較(±s，n=6)

與假手術(shù)組相比#P＜0.01;延髓缺血模型組相比*P＜0.01

組別 假手術(shù)組 延髓缺血7d 延髓缺血14d模型組干預(yù)組假手術(shù)組 74.04±1.05 68.30±0.09# 69.90±0.55#* 64.33±1.55 66.57±1.39

表3 各組大鼠腦組織中MDA含量的比較(±s，n=6)

表3 各組大鼠腦組織中MDA含量的比較(±s，n=6)

假手術(shù)組相比#P＜0.01;延髓缺血模型組相比*P＜0.01

組別 假手術(shù)組 延髓缺血7d 延髓缺血14d模型組干預(yù)組假手術(shù)組 4.64±0.17 5.76±0.12# 4.01±0.17#* 3.75±0.85 3.54±0.45

3 討論

腦組織缺血后，缺血缺氧使細(xì)胞通透性改變，出現(xiàn)細(xì)胞水腫、興奮性氨基酸產(chǎn)生增加、Ca2+內(nèi)流增加。線粒體破壞，影響有氧代謝產(chǎn)生ATP，激發(fā)自由基級(jí)聯(lián)反應(yīng)［2］，產(chǎn)生大量活性氧，活性氧與各種細(xì)胞成分發(fā)生反應(yīng)從而使膜脂質(zhì)過(guò)氧化、染色體、核酸、蛋白質(zhì)破壞，細(xì)胞膜降解，導(dǎo)致缺血核心區(qū)神經(jīng)細(xì)胞死亡并觸發(fā)周圍半暗帶神經(jīng)元發(fā)生遲發(fā)性死亡［3～5］。在正常情況下機(jī)體內(nèi)氧自由基含量很少，其中內(nèi)源性自由基清除劑發(fā)揮重要作用［6］。SOD作為內(nèi)源性氧自由基清除劑，是一種金屬蛋白酶，可保護(hù)生物體免受自由基的影響［7］。SOD含量在一定程度上間接反映內(nèi)源性氧自由基清除能力。MDA是膜脂質(zhì)降解產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，用來(lái)反映脂質(zhì)過(guò)氧化的指標(biāo)，其含量的變化間接反應(yīng)組織中氧自由基含量的變化［8］。因此，監(jiān)測(cè)SOD、MDA含量的變化對(duì)研究延髓缺血損傷有十分重要的意義。依達(dá)拉奉是一種新型自由基清除劑，因其攜帶親脂性基團(tuán)可通過(guò)血腦屏障［9］。依達(dá)拉奉能顯著抑制黃嘌呤氧化酶和次黃嘌呤氧化酶的活性，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，減輕腦組織中花生四烯酸引導(dǎo)的腦水腫，也能防止氧化性細(xì)胞損傷，減少缺血半暗帶面積，可減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞損害［10］，從而抑制遲發(fā)性神經(jīng)元凋亡［11］。在臨床應(yīng)用中，已經(jīng)證實(shí)依達(dá)拉奉對(duì)腦梗死治療有效［12］。

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，缺血7d延髓含水量顯著升高。依達(dá)拉奉干預(yù)組延髓組織的含水量較模型組明顯減少(P＜0.01)。依達(dá)拉奉可能通過(guò)抑制氧自由基生成，減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，有效控制細(xì)胞通透性變化，減輕缺血造成的延髓組織水腫。干預(yù)組SOD水平7d明顯高于模型組，各時(shí)間點(diǎn)MDA水平均明顯低于模型組。說(shuō)明依達(dá)拉奉在延髓缺血過(guò)程中通過(guò)清除自由基，減輕了腦組織損傷。SOD水平在延髓缺血7d時(shí)明顯高于模型組，而在延髓缺血14d時(shí)出現(xiàn)下降，提示依達(dá)拉奉對(duì)自由基的清除效果于缺血7d時(shí)明顯，之后藥物作用減弱。因依達(dá)拉奉減輕自由基對(duì)內(nèi)源性SOD的消耗，但隨著延髓缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，自由基產(chǎn)生的增加，SOD在數(shù)量上會(huì)減少，提示在治療上應(yīng)盡早用藥干預(yù)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，延髓缺血后由于自由基產(chǎn)生，使缺血腦組織損傷加重，依達(dá)拉奉通過(guò)清除自由基，減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞損害，發(fā)揮了對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。

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Effects of Edaravone on content of SOD，MDA after medullary ischemia in rats

ZHU Jiang，GUO Sen，ZHAO Liang，et al.(Department of Neurology，Affiliated Hospital of Chengde Medical College，Chengde067000，China)

ObjectiveTo investigate the effect of Edaravone on medullary ischemia.MethodThe male Wistar rats were divided randomly into three groups，sham－operated group，Edaravon－creating and medullary ischemia group.The the right common carotid artery in model of medullary ischemia rats were ligated and the bilateral vertebral artery were blocked by electrocoagulation.All groups were further divided into two parts(7d and 14d)to test the concentration of super oxide dismutase(MOD)and malondiadehyde(MDA)in brain tissue and serum.Result For medullary ischemia group，concentration of SOD in brain tissue decreased.For Edaravone－treating group，the decrease of SOD was lower than medullary ischemia group.MDA concentration was lower than those of in control group.In the medullary ischemia group，moisture content of medullary was also significant lower than those of in control group.ConclusionEdaravone may reduce free radical to protect medullary ischemia

Medullary ischemia;Super oxide dismutase;Malondiadehyde;Rat

R743.3

A

1003－2754(2013)06－0545－03

2013－04－16;

2013－05－28

(1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河北承德067000;2.承德醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室，河北承德067000)

朱 江，E－mail:zhujianghbcd@126.com

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