中藥逆轉胃癌細胞多藥耐藥機制研究

楊 薔，舒 鵬

（南京中醫藥大學，江蘇南京210029）

中藥逆轉胃癌細胞多藥耐藥機制研究

楊 薔，舒 鵬*

（南京中醫藥大學，江蘇南京210029）

胃癌多藥耐藥（MDR）是臨床化療失敗的重要原因，其機制主要為激活相關信號通路誘導細胞內藥物濃度降低或引起凋亡。中藥有效成分單體如貝母毒乙、蟾蜍靈、粉防乙堿、芍藥苷等及復方如參芪健胃湯、圣和散、二藤散對胃癌多藥耐藥細胞有逆轉作用。

中藥；胃癌；多藥耐藥；逆轉機制；貝母毒乙；參芪健胃湯

胃癌多藥耐藥（MDR）現象的存在表明，一旦腫瘤細胞對某一藥物抗藥時，對其他一些結構不同、作用機制也不同的藥物也產生交叉耐藥。西藥逆轉劑雖然在體外實驗中有明確效果，因不良反應較大不適用于臨床。中藥因其毒副作用小、效果好已成為近年來研究的熱點。

1 胃癌多藥耐藥的機制

1.1 膜轉運蛋白異常

1.1.1 ABC（ATP－binding cassette）跨膜轉運蛋白超家族 主要包括P－糖蛋白（ABCB1）、多藥耐藥相關蛋白（MRP/ABCC）和乳腺癌相關蛋白（BCRP/ABCG2）［1］。研究表明，胃癌患者中P－gp、MRP、BCRP均有不同程度的高表達，證明為原發耐藥相關基因。臨床觀察［2］發現，腫瘤組織中PGP等蛋白的表達明顯高于正常組織，且與臨床分期有關，分期越晚，PGP的表達越高。

1.1.2 肺耐藥相關蛋白（LRP） LRP是細胞核與細胞質運輸通道，可阻止并排除作用于細胞核的藥物，并將細胞質中的藥物轉運到囊泡，再經胞吐機制排出胞外。

1.2 酶表達異常

1.2.1 谷胱甘肽－S－轉移酶（GST－π） GST－π是GST超基因家族中的一員，是同工酶中表達最高的一種，可催化親電物質（如抗癌藥物）與谷胱甘肽（GST）結合，促進藥物排出細胞；本身還能增加藥物的水溶性，促進細胞代謝。

1.2.2 拓撲異構酶Ⅱ（ToPoⅡ） TopoⅡ活性降低，表達下降或基因突變，減少抗癌藥物的作用靶點而產生耐藥性。其特點是藥物在細胞內積聚與保留沒有變化，其耐藥性不能經膜活性藥物逆轉，因此又稱為不典型耐藥。

1.3 細胞凋亡

1.3.1 P53 P53是腫瘤中最易發生突變的抑癌基因，當其發生缺失、突變等導致表達異常時，對凋亡過程調控異常，可抑制化療藥物誘導的凋亡，導致耐藥，同時也可特異性激活MRP－1/P－gp，產生MDR。

1.3.2 Bcl－2家族 Bcl－2基因家族成員分為2類：Bcl－2類，是凋亡抑制因子，包括Bcl－2、Bcl－xl和Bcl－w等；Bax類，為凋亡促進因子，包括Bax、Bak、Box等。Bcl－2與Bax基因表達的強弱決定了細胞接受凋亡信號后細胞存活與否。

2 MDR相關的信號通路

2.1 NF－κB通路 研究［3］表明，NF－κB在正常胃黏膜、不典型增生及胃癌組織中的表達呈遞增趨勢。將突變型IκBα真核表達重組體（pCMV4－m IκBα）經脂質體介導轉染至SGC7901/VCR細胞中，可顯著抑制NF－κB的表達達64％，抑制MDR1的表達達75％［4］，提示NF－κB通路與MDR1的表達相關。采用RNA干擾技術下調SGC7901中NF－κB p65基因的表達，表明其對腫瘤細胞的增殖活性有下調作用［5］。

2.2 PI3K/Akt通路 與乳腺癌、卵巢癌、小細胞肺癌等多種腫瘤的發生有關。免疫組化法檢測p－Akt的表達，發現Akt在胃癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，差異有統計學意義［6］。PI3K抑制劑LY294002處理胃癌細胞SGC7901/VCR和SGC7901后能明顯增加對VCR的敏感性，說明提高耐藥和非耐藥細胞對化療藥物的敏感性的過程與抑制PI3K/AKT通路密切相關［7］。

2.3 Nrf2通路 轉錄因子NF－E2相關因子2（Nrf2），其作為轉錄因子廣泛存在于全身多器官，參與機體的抗氧化、解毒、抗凋亡等功能。MTS檢測法發現的Nrf2低表達H460細胞株較對照組細胞對奧沙利鉑的敏感性明顯增強［8］。

2.4 JNK通路 免疫組化法研究168例胃癌和27例正常胃組織中JNK的表達與P－gp、MRP1、LRP的表達正相關（P＜0.01）［9］。SP600125抑制p－JNK表達后，敏感株SCG7901和耐藥株SGC7901/DDP的藥物敏感性和細胞凋亡率增加，同時耐藥蛋白P－gp表達水平明顯減低，提示p－JNK和P－gp的表達呈正相關［10］。

2.5 Wnt/β－連環蛋白［11］肺癌A549/DDP細胞系與A549相比，Akt磷酸化水平升高，抑制了下游GSK－3的活性，從而上調β－catenin通路的激活而導致耐藥［12］。

3 胃癌多藥耐藥的中藥逆轉劑

3.1 中藥有效成分

3.1.1 貝母素乙 張裴等［13］發現貝母素乙可抑制SGC7901和SGC7901/VCR的細胞增殖，提高細胞敏感性和胞內ADR濃度，與5－Fu聯用后能誘導細胞凋亡，其機制與caspase－3通路、產生caspase－3剪切體cleaved caspase－3有關［14］。

3.1.2 蟾蜍靈 蟾蜍靈（bufalin）為中藥蟾酥中的有效成分，實驗［15］證實bufalin以時間和劑量依賴方式抑制SGC7901/CDDP的增殖，且通過下調Bcl－2、上調Bax的表達而誘導細胞凋亡。

3.1.3 粉防己堿 粉防己堿又名漢防己甲素，是粉防己的塊根中提取的生物堿。粉防己堿在明顯無毒劑量（1.0μg/mL）有明顯逆轉SGC7901/VCR細胞多藥耐藥的作用，其作用機制與其抑制P－gp、Survivin的表達有關，且無明顯細胞毒作用，是安全有效的逆轉劑［16］。粉防己堿亦對卵巢癌、人口腔上皮癌、白血病耐藥細胞株有逆轉作用。

3.1.4 芍藥苷 體外實驗［17］證實，芍藥苷呈劑量依賴性的抑制SGC7901/VCR的增殖，誘導細胞凋亡，并部分逆轉多藥耐藥，其機制可能通過抑制NF－κB的活化，進而下調Bcl－xl、Bcl－2和P－gp的表達。吳昊［18］證實芍藥苷可通過抑制NF－κB信號轉導通路增強5－Fu誘導的細胞增殖抑制和凋亡效應。

3.1.5 齊墩果酸（OA） OA對SCG7901/CDDP有抑制作用，并激活凋亡相關蛋白酶caspase－3［19］、上調促凋亡基因Bax和下調抗凋亡基因Bcl－2的表達［20］，說明OA抑制耐藥細胞增殖的方式為誘導凋亡。

3.1.6 β－欖香烯 張曄等［21］通過對PARP和P－gp蛋白表達的實驗研究，認為β－欖香烯逆轉SGC7901/Adr的機制可能與增加胞內藥物蓄積，誘導PARP裂解及降低P－gp的表達有關。β－欖香烯在體內、外均具有抑制SCA3－7901和SGC－7901/5－FU細胞生長的作用，該作用可能與其誘導細胞凋亡有關［22］。

3.1.7 雷公藤甲素 實驗［23］證明，無毒濃度的雷公藤甲素通過降低microRNA－21的表達，抑制Bcl－2表達，從而提高胃癌SCG7901/CDDP和白血病K562/A02化療敏感性。

3.2 中藥提取物 康萊特注射液是從薏苡仁中提取天然有效抗癌活性物質薏苡仁油制備的脂肪乳劑。王惠芝等［24］通過對160例病理證實的胃癌術后患者的臨床觀察發現，康萊特注射液可降低P－gp的表達而逆轉耐藥。

3.3 中藥復方

3.3.1 參芪健胃湯 通過對60例Ⅱ～Ⅲ期胃癌術后患者的臨床觀察，舒鵬等［25］發現參芪健胃湯具有降低MRP的表達、抑制MDR1表達的作用，從多個途徑起到逆轉耐藥的效果。

3.3.2 斑貞1號 付桂珍等［26］對SCG7901/ADR的實驗表明，斑貞1號（斑蝥0.06g，露蜂房12g，女貞子、山茱萸各15g）聯合5－Fu加川芎嗪（TMP）對MRP基因表達的抑制作用較單獨使用時明顯。

3.3.3 圣和散 Wang Jian－hua等［27］發現，圣和散有提高SGC7901/VCR胞內藥物濃度，其機制與下調P糖蛋白和Bcl－2的表達有關。

3.3.4 二藤散結方 實驗［28］證實，無毒濃度的二藤散結方通過抑制P－gp的表達從而增加胞內藥物濃度，對SGC7901/VCR有逆轉作用。

4 存在的問題

多藥耐藥為西醫概念，目前僅運用西醫藥理的方法尋找中藥逆轉劑，且以西藥逆轉劑的類似物為主，傳統中醫對多藥耐藥及其逆轉的機理及作用機制缺少理論支持。中藥逆轉MDR的機制尚未完全明確，很多靶點、信號通路途徑僅處于假想及推測階段，沒有針對ABC轉運蛋白途徑進行系統的相關基因及信號通路的研究。而中藥復方針對腫瘤細胞逆轉的研究更為少見。

［1］Zuben E．Sauna，Suresh V．Ambudkar．Abouta switch：how P－gly－coprotein（ABCB1）harnesses the energy of ATP binding and hydrolysis to do mechanical work［J］．Mol Cancer Ther，2007，6（1）：13－23．

［2］ShiHongcan，LUDan，Shu Yusheng，etal．Expression ofmultidrug resistance－related proteins p－glycoprotein，glutathione－s－transferases，topoisomerase－IIand lung resistance protein in primarygastric cardiac adenocarcinoma［J］．Hepato－gastroenterology，2008，55（86－87）：1530－1536．

［3］李曉麗，林銳．核轉錄因子－κBp65蛋白在胃癌組織中的表達及臨床意義［J］．西安交通大學學報（醫學版），2011，32（3）：332－334．

［4］陳慶，陳虎，鄭海，等．抑制核轉錄因子κB活性對SGC7901/VCR細胞mdr1表達及凋亡的影響［J］．中華實驗外科雜志，2010，27（8）：1066－1068．

［5］王紅軍，廖新華，崔飛博，等．siRNA阻斷NF－κB信號通路抑制胃癌SGC－7901細胞的增殖及侵襲［J］．西安交通大學學報（醫學版），2012，33（4）：466－469．

［6］晏淼，朱正秋，卞保祥，等．Akt/mTOR信號通路蛋白在胃癌組織中的表達及其臨床意義［J］．中國全科醫學，2011，14（30）：3442－3444．

［7］謝霞，高青，王艷麗，等．抑制PI3K/PKB信號通路提高胃癌細胞化療敏感性的研究［J］．中國藥理學通報，2008，24（12）：1666－1670．

［8］辛愛，任環宇，唐修文，等．低表達Nrf2增敏奧沙利鉑抗H460細胞增殖作用［J］．浙江大學學報（醫學版），2010，39（1）：11－16．

［9］李大衛，彭志海，黃偉翼，等．c－jun氨基末端激酶與多藥耐藥蛋白在胃癌組織中的表達及其意義［J］．中華普通外科雜志，2008，23（5）：376－379．

［10］李大衛，彭志海，李真真，等．氨基末端激酶參與胃癌順鉑耐藥機制的研究［J］．中華胃腸外科雜志，2008，11（2）：159－162．

［11］劉博文，李紅霞．卵巢癌組織中MDR－1、Wnt－1、FZD－1基因的表達變化及其與化療耐藥的關系［J］．山東醫藥，2010，50（26）：1－3．

［12］陶黎陽，龍捷．β－Catenin信號轉導通路在肺癌A549細胞順鉑耐藥中的作用［J］．遼寧醫學院學報，2011，32（1）：6－8．

［13］張裴，顧政一，孫玉華，等．貝母素乙逆轉SGC7901/VCR細胞株多藥耐藥的初步研究［J］．新疆醫科大學學報，2012，35（4）：452－456．

［14］顧政一，張裴，聶勇戰，等．5種生物堿胃癌多藥耐藥逆轉劑的篩選及機制研究［J］．中草藥，2012（6）：1151－1156．

［15］張曄，田昕，劉云鵬，等．蟾蜍靈對順鉑耐藥胃癌SGC7901細胞增殖與凋亡的影響及其作用機制［J］．西安交通大學學報（醫學版），2012，33（4）：498－500．

［16］杜志永．粉防已堿對胃癌耐藥細胞株SGC7901/VCR多藥耐藥性逆轉機制研究［D］．石家莊：河北醫科大學，2010．

［17］方申存．芍藥苷對人胃癌耐藥細胞SGC7901/VCR耐藥性的影響及機制研究［D］．南京：南京醫科大學第一臨床醫學院，2010．

［18］吳昊．芍藥苷抑制NF－κB活性對人胃癌細胞增殖、凋亡的影響及其機制研究［D］．南京：南京醫科大學，2008．

［19］李鴻梅，王敬春，齊占朋，等．齊墩果酸對順鉑耐藥胃癌SGC－7901細胞增殖及細胞凋亡的影響［J］．中國老年學雜志，2010，30（5）：667－669．

［20］李鴻梅，李雪巖，蔡德富，等．齊墩果酸對順鉑耐藥胃癌SGC－7901細胞增殖的影響及其機制研究［J］．中國藥理學通報，2009，25（10）：1334－1337．

［21］張曄，宋娜，劉云鵬，等．β－欖香烯逆轉胃癌細胞株阿霉素耐藥性的作用及機制研究，中國醫科大學學報，2011，40（11）：968－970，993．

［22］王曉瑾，趙曉瑩，諸琦，等．β－欖香烯對胃癌及胃癌耐藥細胞殺傷作用的實驗研究［J］．中華消化雜志，2010，30（3）：189－192．

［23］龍璐璐，許文林，沈慧玲，等．雷公藤甲素通過抑制microRNA－21的表達提高SGC7901/CDDP細胞順鉑敏感性［J］．江蘇大學學報（醫學版），2012，22（3）：213－217．

［24］王惠芝，吳風清，郝俊新，等．康萊特注射液對胃癌多藥耐藥性基因表達的抑制［J］．河北醫藥，2012，34（2）：201－202．

［25］舒鵬，劉沈林．參芪健胃湯對胃癌多藥耐藥基因及肺耐藥蛋白逆轉作用的臨床觀察［J］．湖南中醫雜志，2008，24（5）：1－3．

［26］付桂珍，張愛民．斑貞1號、川芎嗪和氟尿嘧啶聯合對人胃癌細胞多藥耐藥基因1表達的影響［J］．中國當代醫藥，2012，19（7）：61－62．

［27］JianhuaWang，Yuesheng Xia，Huan Wang，et al．Chinese Herbs of Shenghe Powder Reverse Multidrug Resistance of Gastric Carcinoma SGC－7901［J］．Integr Cancer Ther，2007，6（4）：400－404．

［28］郝淑蘭，劉麗坤，李宜放，等．二藤散結方對SGC7901/VCR的多藥耐藥影響及與P－gp表達的關系［J］．腫瘤基礎與臨床，2010，23（6）：480－482．

R273

B

1007－4813（2013）02－0266－03

2012－11－16）

楊 薔（1988－），女，碩士研究生。研究方向：中西醫結合腫瘤學。

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舒 鵬，E－mail：shupen8sp＠163．com