正交試驗(yàn)法優(yōu)化苦蕎總黃酮的提取工藝

扶慶權(quán)

摘要：以乙醇溶液為提取劑，采用加熱回流法提取苦蕎（Fagopyrum tatricum）中總黃酮，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝。結(jié)果表明，各因素對苦蕎總黃酮提取率的影響由大到小依次為提取溫度、料液比、乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)、提取時間。優(yōu)化得到苦蕎總黃酮的最佳提取工藝條件為乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)70%、料液比m苦蕎粉末∶V乙醇=1∶35（g/mL）、提取溫度80 ℃、提取時間60 min，此條件下苦蕎總黃酮提取率為7.85%。

關(guān)鍵詞：苦蕎（Fagopyrum tatricum）；總黃酮；提取；正交試驗(yàn)

中圖分類號：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）09-2138-03

苦蕎（Fagopyrum tatricum）又稱韃靼蕎麥，屬于蓼科蕎麥屬一年生或多年生宿根性植物[1]，性喜冷涼[2]。主要分布在中國西南地區(qū)的四川、云南、貴州等地[3]。苦蕎含有豐富的氨基酸、多糖、淀粉、礦物質(zhì)、維生素、不飽和脂肪酸和黃酮類化合物等營養(yǎng)成分，其黃酮類化合物含量是甜蕎的10～100倍，具有抗腫瘤、延緩衰老、降血糖、降血脂、抗氧化、消除體內(nèi)自由基、增強(qiáng)免疫力、抗菌、抗病毒及保護(hù)心腦血管等多種保健作用[4-12]。作為藥食同源的苦蕎長期以來深受消費(fèi)者的歡迎，具有重要的研究和應(yīng)用價(jià)值。本研究在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用正交試驗(yàn)優(yōu)化加熱回流法提取苦蕎中總黃酮的工藝條件，為苦蕎工業(yè)化生產(chǎn)黃酮類物質(zhì)提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

苦蕎購自南京市江寧區(qū)歐尚超市，用高速粉碎機(jī)打成粉末過60目篩備用。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物制品檢定所；無水乙醇購自上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，亞硝酸鈉購自南京化學(xué)試劑有限公司，硝酸鋁購自上海振欣試劑廠，氫氧化鈉購自西隴化工股份有限公司，均為分析純。

主要儀器包括AUY120分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）、HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）、TDL-4離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）、數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）、7230可見分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.2 單因素試驗(yàn) 以乙醇溶液為提取溶劑，采用加熱回流法提取苦蕎粉末中的總黃酮，設(shè)置單因素試驗(yàn)分別考察乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、提取時間和料液比對苦蕎提取率的影響。①乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)。準(zhǔn)確稱取7份2 g苦蕎粉末，分別加入50 mL體積分?jǐn)?shù)30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液，在60 ℃水浴中回流提取60 min。趁熱過濾，濾液于3 000 r/min離心10 min，記下濾液體積，按“1.2.1”的方法測定溶液中總黃酮的濃度，計(jì)算提取率。②提取溫度。準(zhǔn)確稱取6份2 g苦蕎粉末于圓底燒瓶，加入50 mL體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液，分別放入30、40、50、60、70、80 ℃的水浴中回流提取60 min，其余操作方法同①。③提取時間。準(zhǔn)確稱取6份2 g苦蕎粉末于圓底燒瓶，加入70 mL體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液，70 ℃水浴中分別回流提取30、60、90、120、150、180 min，其余操作方法同①。④料液比。準(zhǔn)確稱取8份2 g苦蕎粉末于圓底燒瓶，分別按1∶5、1∶15、1∶25、1∶35、1∶45、1∶55、1∶65、1∶75的料液比（m苦蕎粉末∶V乙醇，g/mL，下同）加入體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液，70 ℃水浴中回流提取60 min，其余操作方法同①。

苦蕎總黃酮提取率=濾液中總黃酮濃度×濾液體積/苦蕎粉末質(zhì)量×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)對苦蕎總黃酮提取率的影響 不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液作提取溶劑，苦蕎總黃酮提取率結(jié)果見圖2。由圖2可以看出，苦蕎總黃酮提取率先隨乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)的增加而升高，乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)為60%時總黃酮提取率達(dá)到最高，此后再增加乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)，總黃酮提取率下降，可能是由于乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)過高，一些醇溶性物質(zhì)競爭性地和乙醇結(jié)合，從而導(dǎo)致總黃酮提取率下降。

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

精確移取2 mL在最優(yōu)提取條件下得到的苦蕎總黃酮提取液3份，再分別加入不同量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測定總黃酮含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。平均加樣回收率為100.8%，可見總黃酮含量測定方法穩(wěn)定可靠。

3 小結(jié)與討論

以乙醇溶液為提取溶劑，采用加熱回流法提取苦蕎總黃酮，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝，各因素對苦蕎總黃酮提取率的影響由大到小依次為提取溫度、料液比、乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)、提取時間。優(yōu)化的苦蕎總黃酮的提取工藝條件為體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶液作提取溶劑、料液比m苦蕎粉末∶V乙醇=1∶35（g/mL）、在80 ℃下回流提取60 min，此條件下總黃酮提取率為7.85%。

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