高效液相色譜法測定化癥止痛巴布劑中馬錢子堿、丹皮酚的含量

2013-04-29 00:00:00江國榮等

中國醫藥科學 2013年19期

[摘要] 目的探討化癥止痛巴布劑中主要有效成分馬錢子堿、丹皮酚的高效液相色譜測定法（HPLC）。方法采用HPLC法，Xterra RP18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為氯仿：甲醇：0.1%氨水進行梯度洗脫，檢測波長為240nm，流速為1.0mL/min，柱溫為25℃。結果馬錢子堿的線性范圍為0.95～11.4μg/mL（r=0.9993），平均回收率為98.98%（RSD=1.36%），丹皮酚的線性范圍為2.623～31.28μg/mL（r=0.9997），平均回收率為97.92%（RSD=3.15%）。結論 HPLC法測定化癥止痛巴布劑中有效成分馬錢子堿、丹皮酚的方法簡便、可靠，可以有效的控制制劑的質量。

[關鍵詞]化癥止痛巴布劑；HPLC；馬錢子堿；丹皮酚

[中圖分類號] R284 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）19-61-02

巴布劑又稱為巴布貼、巴布膏，指的是藥材提取物、藥材與適宜的親水性的基質混勻后涂布于背襯材料上所制成的貼膏劑。巴布劑最早是起源于日本[1]。其臨床特點是刺激性、過敏性小，用藥方便、療效明顯，已經成為極具市場潛力的新型制劑[2]。化癥止痛巴布劑中主要藥材包括三七、細辛、紅花、延胡索、制馬錢子、徐長卿等，本實驗采用高效液相色譜法測定化癥止痛巴布劑中制馬錢子、徐長卿的有效成分馬錢子堿、丹皮酚的含量，以為其質量標準提供依據。

1 儀器與試藥

采用美國Waters公司生產的高效液相色譜儀器，美國美特勒電子分析天平，馬錢子堿對照品（購于中國生物制品檢定所，批號：120514）、丹皮酚對照品（購于中國生物制品檢定所，批號：20120625）；化癥止痛巴布劑由我試驗科室提供；甲醇為色譜純，水為三蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件的選擇

色譜柱為Xterra RP18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為氯仿︰甲醇︰0.1%氨水（90︰10︰0.25、75︰25︰0.25、65︰35︰0.25、55︰45︰0.25）進行梯度洗脫，每間隔40min變換一次流動相的比例，檢測波長為240nm，進樣量為20μL，流速為1.0mL/min，柱溫為25℃。理論塔板數計算不低于3000。在上述色譜條件下馬錢子堿和丹皮酚的分離度良好。色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的配制

分別精密稱取馬錢子堿、丹皮酚對照品各2.0、4.0mg，甲醇定溶至20mL的容量瓶中，搖勻后即得馬錢子堿和丹皮酚儲備溶液，分別得到1.0、2.0mg/mL的溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取化癥止痛巴布劑，搗碎后用研缽將貼劑研細，后過5號篩。精密稱定0.5mg，放置錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，超聲處理45min，取出后自然放置，室溫后稱定重量，用甲醇補足減少的重量，搖勻后過濾，濾液采用0.22μm的微孔濾膜過濾，即得供試品溶液，放置于4℃的冰箱中，備用。

2.4 線性關系的考察

分別精密吸取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，分別置于15mL容量瓶中，分別用甲醇稀釋至刻度，按照2.1項下的色譜條件分別進樣20μL，以峰面積為縱坐標（Y）、對照品含量作為橫坐標（X），分別得到馬錢子堿的回歸方程為：Y=7.864X+22.91，r=0.9993，線性范圍為0.95～11.4μg/mL。丹皮酚的回歸方程為：Y=47.268X+4.817，r=0.9997，線性范圍為2.623～31.28μg/mL。

2.5 精密度試驗

按照2.2項下對照品配制的方法制備樣品溶液，按照2.1項下的色譜條件連續進樣5次，測得馬錢子堿的RSD值為0.57%，丹皮酚的RSD值為2.36%。

2.6 穩定性試驗

供試品溶液分別在0、2、4、6、10、14、18、24h進樣，按照2.1項下的色譜條件，測得峰面積。結果表明在24h范圍內供試品溶液的含量基本穩定。

2.7 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品約1.0g，共5份，分別加入一定量的馬錢子堿、丹皮酚對照品溶液，按照線性關系方程進行含量的測定，計算回收率，結果見表1。

2.8 樣品的測定

分別取不同廠家的化癥止痛巴布劑，批號分別為20090526、20091205、20100605，按照2.3項下所示的方法制備供試品溶液，進行測定，每批樣品重復測定3次，以外標法計算馬錢子堿和丹皮酚的含量，平均含量分別為0.495、0.982mg/g。

3 討論

巴布劑是一種外用貼膏劑，在日本有較久的應用歷史。系藥材提取物、藥材和（或）化學藥物與適宜的親水性基質混合后，被涂布在背襯材料上制成的貼膏劑，由背襯（常用無紡布、彈力布）、膏體、防黏膜（膏體表面的隔離膜）組成[3]。化癥止痛巴布劑中主要藥材包括三七、細辛、紅花、延胡索、制馬錢子、徐長卿等，其中有效成分包括馬錢子堿以及丹皮酚，文獻中多報道采用薄層色譜法測定丹皮酚的含量[4]，本實驗采用高效液相色譜法測定化癥止痛巴布劑中制馬錢子、徐長卿的有效成分馬錢子堿、丹皮酚的含量。

3.1 流動相的選擇

試驗過程中嘗試了采用甲醇︰水、甲醇︰水︰氯仿、氯仿︰甲醇︰水、氯仿︰甲醇︰氨水（0.25%）作為流動相體系進行色譜的分離考察[5]，結果表明在采用氯仿：甲醇：水進行梯度洗脫，馬錢子堿與丹皮酚的色譜分離度較好。因此，本文采用氯仿：甲醇：水作為實驗過程中的流動相。

3.2 波長的選擇

配制一定濃度的馬錢子堿和丹皮酚對照品溶液，在波長為250～550nm內進行紫外光的掃描，結果表明，馬錢子堿在254nm處有最大吸收[6]，丹皮酚在274nm處有最大吸收[7]，因在274nm處馬錢子堿吸收較低，因此試驗過程中選擇兩種成分的共同最大吸收波長240nm。

3.3 提取方法的選擇

本試驗對化癥止痛巴布劑溶液采用了加熱回流，超聲提取兩種方式，以50%、60%、70%、80%四種不同濃度的甲醇作為溶劑，分別采用30、45、60min進行正交試驗[8]。結果表明，提取條件為80%甲醇溶液，超聲提取45min的效果最好。

總之，采用高效液相色譜法測定化癥止痛巴布劑中馬錢子堿、丹皮酚的含量，該方法操作簡單、穩定性好、精密度高，無過多的干擾因素，因此可以作為實驗中的檢測手段。

[參考文獻]

[1] 高文勇，楊文婷，楊一丁，等.活血通經消淤巴布劑治療乳腺增生病112例的臨床觀察[J].中國社區醫師，2012，14（6）：221-223.

[2] 葉天申，謝文霞.巴布劑穴位帖敷治療活動期類風濕性關節炎33例臨床研究[J].江西中醫學院學報，2008，17（6）：23.

[3] 高文勇，楊文婷，楊一丁，等.活血通經消瘀巴布劑治療乳腺增生病112例的臨床觀察[J].中國社區醫師，2012，14（6）：220-222.

[4] 周靜，李威，趙越，等.丹皮酚巴布劑的制備及質量控制[J].中國醫藥指南，2013，11（2）：407-409.