乳腺癌17號染色體多體在HER—2基因狀態及臨床病理特征中的意義

[摘要] 目的 分析乳腺癌17號染色體多體在HER-2基因狀態及臨床病理特征中的意義。 方法 應用熒光原位雜交 （FISH）技術檢測186例浸潤性乳腺癌患者石蠟切片中HER-2基因擴增與17號染色體多體情況，并分析17號染色體多體與HER-2基因擴增及各臨床病理特征的關系。 結果 186例樣本中，17號染色體多體比例為43.0%（80/186），其中HER-2基因擴增組66.3% （53/80），HER-2基因未擴增組25.5% （27/106），前者顯著高于后者 （x2=30.929，P=0.000）；17號染色體多體與腫瘤大小及腫瘤分級顯示相關（r=-0.188，P=0.001；r=0.159，P=0.03），而與年齡、Ki67、淋巴結轉移﹑ER、PR表達及ER/PR狀態無關。 結論 17號染色體多體與HER-2基因擴增者相關；并且可能提示乳腺癌患者預后不良。

[關鍵詞] 乳腺腫瘤；HER-2基因；17號染色體；熒光原位雜交

[中圖分類號] R737.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）19-33-03

乳腺癌原癌基因HER-2（人表皮生長因子受體2）的狀態與乳腺癌患者預后及應用靶向治療藥物密切相關[1-2]。應用熒光原位雜交（FISH）技術能很好的反應HER-2基因擴增狀態，但在檢測的過程中常會出現17號染色體（CSP17）多體性，而17號染色體多體是否可以判定患者預后、指導術后放化療、及其和HER-2基因狀態的關系是近年學者研究的熱點。本研究主要應用FISH技術檢測186例浸潤性乳腺癌患者的HER-2基因及17號染色體多體性，旨在探討17號染色體多體與HER-2基因擴增及乳腺癌患者臨床病理特征關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2010年11月～2013年5月在我科進行FISH 檢測的浸潤性乳腺癌患者186例，年齡26～69歲。石蠟切片3μm，分別用于FISH檢測與IHC 檢測。

1.2 試劑與探針

IHC檢測用基因科技 （上海） 有限公司抗體，ER 克隆號：SP1；PR 克隆號：SP2； Ki-67 克隆號：MIB-I。FISH檢測使用北京金普嘉公司HER-2基因擴增試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 IHC技術及結果判定 采用免疫組化evision法進行檢測。ER、PR棕色陽性定位于細胞核內：（-）<10%表達陽性；（+） 10%～30%表達陽性；（++）：30%～50%表達陽性；（+++）>50%表達陽性。Ki67以<50%為低表達，以≥50%為高表達[3]。

1.3.2 FISH技術及結果判定 按照北京金普嘉公司HER-2基因擴增試劑盒說明書操作。FISH結果判定： （1） 紅信號明顯成簇成團：判定為簇狀擴增；（2） 若不是 （1） 的情況，計數30個細胞計算Ratio值：Ratio<1.8為陰性；Ratio>2.2為陽性；Ratio介于1.8～2.2之間時，增加計數細胞。以綠色信號≥3判定為17號染色體多體[4]。

1.4 統計學方法

用SPSS11.5統計學分析軟件分析，組間比較用x2檢驗，秩和檢驗及Spearman等級相關分析，P<0.05為差異有統計學意 義。

2 結果

2.1 17號染色體多體與HER-2基因擴增的相關性

186例浸潤性乳腺癌患者標本中，17號染色體多體的比例為 43.0%（80/186），其中HER-2基因擴增組66.3% （53/80），HER-2基因未擴增組25.5%（27/106），前者顯著高于后者（x2=30.929，P=0.000）。見表1。

2.2 17號染色體多體與各臨床病理特征聯系

不同腫瘤分級及腫瘤大小的17號染色體倍體性分布不同，差異具有統計學意義 （x2=16.221，P=0.000；x2=6.549，P=0.038）。17號染色體多體與腫瘤分級呈正相關（r=0.159 P=0.03），與腫瘤大小呈負相關 （r=-0.188，P=0.001），而與年齡、Ki67、淋巴結轉移﹑ER、PR表達及ER/PR狀態無關（P>0.05）。見表2。

3 討論

人類大多數腫瘤都有基因組不穩定性的遺傳學特征[5]，其中的染色體不穩定（chromosomal instability，CIN）主要是由于保持細胞基因組完整性的染色體不穩定基因突變引起[6]。乳腺癌作為女性腫瘤死亡原因的第二位[7]，其17號染色體變異是近年研究的熱點，其不僅可能與HER-2基因擴增相關，還可能是評價乳腺癌預后，指導治療的獨立因素。

本研究結果中，17號染色體多體比例43%，與王富文等[8]（38%）及呂亞莉等[9] （45.9%）報道的存在不同差異，但結果基本一致，這與各個統計資料差異有關。17號染色體多體在HER-2基因擴增組的分布 （66.3%） 顯著高于HER-2基因未擴增組 （25.5%）（P=0.000），同大多數學者報道一致[9-11]，提示HER-2基因擴增的患者17號染色體變異更顯著，這可能是很多學者認為17號染色體多體與乳腺癌患者預后不良有關的原因，分析其機制可能是（1）：CSP17多體者HER-2基因拷貝數改變繼而使HER-2蛋白增多，致患者預后不良。（2）[12]：CIN基因突變，其中Raf基因突變后導致一種腫瘤轉移抑制蛋白過度消耗而與乳腺癌患者預后相關。

有研究[13]報道，HER-2基因無擴增但17號染色體多體者與既無HER-2基因擴增也無17號染色體多體者比較，其組織學分級更高、腫瘤分級更高及雌孕激素陰性陰性率更高，而這些臨床病理特征往往提示該患者預后不良，也有研究者報道[14]乳腺癌中染色體倍體性與腫瘤細胞分化程度﹑存活率及復發率無關。

本研究進一步分析了17號染色體多體與臨床病理特征的相關性，結果顯示17號染色體多體在腫瘤分級中分布具有顯著差異且兩者呈正相關 （P<0.05），腫瘤分級越高，17號染色體多體分布越多，陳紅等[15]報道17號染色體多體與乳腺癌淋巴結轉移、ER和PR的陰性狀態顯著相關，Tsukamoto等[16]報道17號染色體多體與乳腺癌淋巴結轉移相關。盡管各個學者分析結果情況存在不同差異，但都提示17號染色體多體可以在一定程度上預測乳腺癌轉歸。另外本研究中17號染色體多體與乳腺癌腫瘤大小呈負相關，可能與當前國內醫療技術提高、醫保覆蓋廣，患者診治早相關，需要擴大統計資料進一步確定。2007年ASCO/CAP推薦檢測乳腺癌HER-2狀態應用IHC和FISH，指南規定FISH報告為HER-2/CSP17比例來判定HER-2狀態，但是由于17號染色體變異率大，且可能與乳腺癌患者不良預后因素相關，建議分別報告HER-2基因擴增情況以及CEP17的信號數目。并且在2009年有學者建議[17]：HER-2基因狀態陰性、17號染色體多倍體的患者仍可適用靶向藥物治療，也提示了17號染色體多體的重要性。

綜上所述，筆者認為17號染色體多體性在乳腺癌的發生發展中起著重要作用。一方面HER-2基因擴增者的17號染色體多體分布顯著高于未擴增組，另一方面可以一定程度上判斷乳腺癌患者預后。因此建議FISH檢測結果報告應同時報告HER-2基因擴增情況及CEP17信號數目。

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（收稿日期：2013-08-19）