痔寧栓的制備及質(zhì)量控制

[摘要] 目的 探討痔寧栓制備工藝，并制定其質(zhì)量控制方法。 方法 采用水提醇沉和單味水提相結(jié)合的提取方法制備痔寧栓，應(yīng)用薄層色譜法分別對痔寧栓中主要成分進行鑒別，采用HPLC法對其沒食子酸進行了含量測定。 結(jié)果 在薄層色譜中能檢出五倍子和黃柏，沒食子酸在0.051～0.256μg/mL線性關(guān)系良好（r=0.9996），平均回收率為98.92%，RSD為1.87%。 結(jié)論 該栓劑制備方法簡便易行，質(zhì)量控制方法可靠。

[關(guān)鍵詞]痔寧栓；制備工藝；質(zhì)量控制

[中圖分類號] R283 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）19-63-03

痔瘡是肛腸科最為常見的疾病之一，發(fā)作時有出血、疼痛、墜脹、瘙癢等臨床癥狀。我院傳統(tǒng)治療痔瘡大多采用將藥物粉碎后用開水浸泡熏洗、或煎取藥汁坐浴的治療方法[1～2]，不易控制其質(zhì)量及療效。且患者使用極為不便。將劑型改進制成栓劑，不僅有利于快速消除或緩解痔瘡發(fā)作期的癥狀，縮短患者術(shù)后愈合時間，更方便了患者給藥，藥物作用持續(xù)時間長，且制劑質(zhì)量得到有效控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津高效液相色譜儀（包括LC-20AD泵，SPD-M20A二極管陳列檢測器，CBM-20A控制器，LC solution工作站，日本島津公司）；微量進樣器（上海醫(yī)用激光儀器廠）；十萬分之一電子天平（AUW220D，島津）；層析用硅膠G板（批號：20120712，青島海洋化工廠分廠）。

1.2 試藥

藥材：五倍子為漆樹科植物鹽膚木（Rbus chinese Mill.）葉上的蟲癭、黃柏黃柏為蕓香科植物黃皮樹（Phellodendron chinese Schneid.）除去栓皮的干燥樹皮、蒲公英為菊科植物蒲公英（Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz）的干燥全草、紫花地丁為堇菜科植物紫花地丁（Viola yedoensis Makino）的干燥全草、芒硝（Mirabilite）為硫酸鹽類礦物芒硝族芒硝經(jīng)加工精制而成的結(jié)晶體，上述藥材均由本院藥劑科提供，經(jīng)常州市藥品檢驗所鑒定均符合《中國藥典》2010版一部規(guī)定；沒食子酸對照品（批號：110831-200302）、鹽酸小薜堿對照品（批號：110713-200208）均購自中國藥品生物制品檢定所；36型半合成脂肪酸（海鹽成成日化廠），其余輔料均為藥用級；水為重蒸水；甲醇（色譜純，天津市標準科技有限公司），其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 痔寧栓的制備

2.1.1 處方 五倍子40g，黃柏50g，蒲公英40g，紫花地丁50g，芒硝 20g，半合成脂肪酸（36型）168g，蜂蠟適量， 共制成100粒。

2.1.2 藥材提取 取處方量五倍子、黃柏、蒲公英、紫花地丁加12倍量水煎煮3次，每次1.5h，煎液合并，濃縮至浸膏狀，加入95%乙醇使含醇量達60%，邊加邊攪拌，靜置48h，使沉淀完全，濾過，棄去殘渣，濾液回收乙醇并濃縮至浸膏狀，得浸膏（Ⅰ）；另取黃柏單味藥材加15倍量水煎煮3次，每次1h，煎液合并，濃縮至浸膏狀，得浸膏（Ⅱ）；取浸膏（Ⅰ）、（Ⅱ）分別置真空干燥箱中干燥，即得藥材提取物。

2.1.3 栓劑的制備 取處方量芒硝與藥材提取物混合、粉碎，過6號篩，加入到熔化的栓劑基質(zhì)中充分攪拌，在50℃左右時注入涂有石蠟油的栓模中，冷卻后脫模，除去毛邊，即得痔寧栓。以同法制備不含五倍子和不含黃柏的栓劑作陰性對照，備用。

2.2 痔寧栓的質(zhì)量控制

2.2.1 性狀及pH[3] 將制備的栓劑置自然光下，在白紙上觀察其顏色，本品為表明光滑的棕褐色長圓錐形栓，切面色澤均勻。取栓劑3粒，分別加入5倍量純化水水浴加熱攪拌融化后，放冷，測定其pH為6.35。

2.2.2 硬度測定 取痔寧栓10粒，按《中國藥典》規(guī)定的硬度測定方法進行[4]，其硬度平均值為12.65N，硬度適中，符合用藥要求。

2.2.3 融變時限的測定 按《中國藥典》附錄XIIB項下融變時限檢檢查法[4]，取5粒栓劑測定其融變時限，均值為12.06min。

2.2.4 薄層鑒別 （1）五倍子的薄層鑒別[5] ：取挫碎的痔寧栓5.0g，用柱層析硅膠拌勻，晾干，用50mL乙醇用索氏提取器回流提取至無色，提取液濾過，濾液置分液漏斗中，加氯仿10mL×3次萃取，棄氯仿萃取液；醇液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解至10mL容量瓶中，作為供試品溶液；另取不含五倍子的陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液；另取沒食子酸對照品適量，加甲醇制成1mg/mL溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各5μL，點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲酸（6︰4︰1.5）為展開劑展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置處，顯相同藍黑色的斑點，陰性對照液色譜中無相應(yīng)的斑點。（2）黃柏的薄層鑒別[6]：取挫碎的痔寧栓5.0g，用柱層析硅膠拌勻，晾干，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1︰100）50mL，加熱回流提取至無色，提取液濾過，濾液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解，濾過，濾液定容至10mL容量瓶中，作為供試品溶液；另取不含黃柏的陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液；取鹽酸小薜堿對照品適量，加甲醇制成1mg/mL溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各5μL，點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（6.5︰1.5︰2）為展開劑展開，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢測，在供試品與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置處，顯相同的黃綠色熒光斑點，而陰性對照液色譜中無相應(yīng)的斑點。

2.2.5 含量測定 （1）色譜條件[7]：用DiamonsilC18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為甲醇：0.1%磷酸溶液（13︰87）；流速為1.0mL/min；檢測波長為273nm；柱溫為室溫；理論塔板數(shù)按沒食子酸峰計算應(yīng)不低于3000；進樣量10μL。在此色譜條件下，沒食子酸分離良好，樣品液與沒食子酸對照品液色譜峰基本一致，陰性對照液色譜峰中在相同位置無干擾峰。（2）沒食子酸對照品溶液的制備：精密稱取在干燥器干燥24h的沒食子酸對照品5.120mg，置100mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，搖勻備用。（3）檢測波長的選擇：取沒食子酸對照品溶液，按分光光度法（《中國藥典》2010版一部附錄VA），于200～500nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果沒食子酸在273nm處有最大吸收，可作為痔寧栓中沒食子酸含量測定的檢測波長。（4）標準曲線繪制：精密吸取上述對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL分別置10mL容量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，搖勻，取10μL進樣，記錄色譜圖。按上述色譜條件測定吸收峰面積，以峰面積為縱坐標，進樣微克數(shù)為橫坐標，作標準曲線，經(jīng)回歸分析得回歸方程：Y=69425X-3945.6，r=0.9996。結(jié)果表明沒食子酸在0.051～0.256μg線性關(guān)系良好。（5）樣品供試液的制備：將痔寧栓挫碎，精密稱取5.0g，水浴加熱融化，加入硅膠（100～120目）30g，趁熱攪拌均勻，放冷后繼續(xù)研磨成細粉，加100mL乙醇用索氏提取器回流提取至無色，提取液濾過，濾液置分液漏斗中，加氯仿20mL×3次萃取，棄氯仿萃取液；醇液水浴蒸干，殘渣用50%甲醇溶解至10mL容量瓶中，用0.45μm微孔濾膜濾過，濾液作為樣品供試液；另按同法制成陰性對照品溶液。（6）精密度試驗：精密吸取對照品溶液10μL，重復(fù)進樣5次，測定峰面積，結(jié)果RSD=1.63%（n=5），表示儀器精密度良好。（7）重現(xiàn)性試驗：精密稱取同一批樣品5份，按樣品供試液的制備方法平行操作，取10μL進樣，記錄色譜圖，峰面積RSD=2.18%（n=5），表明該方法的重復(fù)性良好。（8）穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一樣品供試品溶液10μL，分別于0、1、2、3、4、5h進樣，按上述色譜條件進行測定其峰面積，結(jié)果表明在5h內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定，RSD=1.37%（n=6）。 （9） 回收率試驗：取已知含量樣品5份，精密稱重，準確加入一定量的沒食子酸對照品溶液，按供試品溶液制備方法操作并按上述色譜條件進行含量測定，計算回收率。沒食子酸的平均回收率為98.92%，RSD為1.87%。（10）樣品含量測定：按上述方法測定3個批次樣品的沒食子酸含量，結(jié)果見表1。

3 討論

本方為我院肛腸科經(jīng)驗方，方中五倍子性酸澀，歸大腸

經(jīng)，具有解毒、消腫、收濕、斂瘡、止血之功，芒硝清熱瀉火、散結(jié)消腫，兩藥合用，一收一散，配合黃柏、蒲公英、紫花地丁共奏清熱解毒、利濕消腫、抑菌消炎的之功效。藥理研究表明，五倍子含有大量鞣酸及沒食子酸，鞣酸對蛋白質(zhì)具有沉淀作用，從而具有收斂性，能凝固皮膚創(chuàng)面黏膜的組織蛋白，起到分泌抑制作用，使皮膚黏膜干燥，形成保護膜促進創(chuàng)面愈合，有止血、護膜、減少分泌滲出和防止細菌侵蝕作用[8]；黃柏、蒲公英、紫花地丁都具有廣泛的抗菌消炎作用；芒硝能滲透消腫，對肛門炎癥水腫有直接的治療作用[9]。

根據(jù)方中主藥的有效成分的性質(zhì)，采用水煎醇沉和單獨煎提的提取工藝，使得藥材的有效成分保留較為完全，避免了藥物在提取過程中相互作用[10]；在五倍子沒食子酸薄層色譜檢測中，用乙醇索氏回流至無色，因提取物雜質(zhì)含量較高，斑點分離不夠理想，故先用乙醇索氏回流提取，再用氯仿萃取除去雜質(zhì)，薄層斑點達到較好的分離效果。

采用HPLC法測定痔寧栓中沒食子酸含量方法簡便，結(jié)果穩(wěn)定可靠，重現(xiàn)性好，能有效控制該栓劑的質(zhì)量。

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（收稿日期：2013-07-25）