XELOX方案化療后外周血淋巴細胞對腫瘤殺傷能力的影響

于永洋 王思力* 黃 耘 蔣 平

（1 廈門大學附屬第一醫院普外科，福建 廈門 361003；2 廈門大學附屬第一醫院血液科，福建 廈門 361003；3 廈門大學附屬第一醫院血液科，福建 廈門 361003；4 溫州醫學院附屬第二醫院普外科，浙江 溫州 325000）

XELOX方案化療后外周血淋巴細胞對腫瘤殺傷能力的影響

于永洋 王思力* 黃 耘 蔣 平

（1 廈門大學附屬第一醫院普外科，福建 廈門 361003；2 廈門大學附屬第一醫院血液科，福建 廈門 361003；3 廈門大學附屬第一醫院血液科，福建 廈門 361003；4 溫州醫學院附屬第二醫院普外科，浙江 溫州 325000）

目的 研究胃癌手術后患者在接受卡培他濱聯合奧沙利鉑化療前、后外周血淋巴細胞對人胃癌細胞株NCI-N87殺傷能力的改變，并探討其臨床意義。方法 對22例次（13人）接受卡培他濱聯合奧沙利鉑化療方案的胃癌患者，分離化療前及化療后10d左右的外周血淋巴細胞，PHA-L培養48h，檢測對人胃癌NCI-N87細胞的殺傷效應。結果 XELOX方案化療后的T淋巴細胞對NCI-N87細胞殺傷活性為（12.61 ±1.36）（化療前為14.36±1.68），t檢驗P=0.236，無統計學意義。化療后外周血淋巴細胞對NCI-N87細胞平均殺傷率為6.55%，與化療前（平均為6.96%）相比，P=0.370，無統計學意義。結論 不能認為XELOX方案化療后的T淋巴細胞免疫殺傷功能較化療前下降。

卡培他濱；奧沙利鉑；淋巴細胞；胃癌；免疫重建

胃癌是全世界最常見的惡性腫瘤，化療在胃癌的綜合治療中占有重要地位，有研究顯示胃癌患者應用奧沙利鉑聯合卡培他濱化療治療近期有效率達46.1%[1]，與FOLFOX方案療效相似，但此方案毒副作用較輕，且患者大部分時間可以在家中口服治療，減少了住院時間，提高了生活質量，有廣闊的應用前景。

由于化療不僅對腫瘤細胞具有殺傷作用，對正常淋巴細胞亦有殺傷，所以往往認為放、化療后容易產生免疫負應答，造成對腫瘤的免疫耐受。然而，近年來的臨床試驗發現，腫瘤患者放、化療后進行免疫生物治療不僅沒有誘導產生免疫耐受，反而獲得了很好的抗腫瘤免疫效果[2-3]。因此，本文XELOX方案化療后外周血淋巴細胞對腫瘤殺傷能力的影響進行探討。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

病例選自2009年1月至2011年12月間在我院普外科住院的確診胃癌患者，共22例次（13人），包括乳頭狀腺癌5例，低分化管狀腺癌2例，印戒細胞癌1例，中分化腺癌5例；其中男9例，女4例，年齡41～72歲，平均年齡58.7歲。全部患者均為行胃癌根治術術后，排除高血壓、糖尿病、免疫系統疾病及肝腎疾病患者。其中17例次（化療組）以“奧沙利鉑+卡培他濱”方案進行化療，具體方案：第1天奧沙利鉑130mg/m2靜脈注射，第1～14天卡培他濱1000 mg/m2·d口服，每3周為1個周期。化療組的患者中，部分患者進行1次化療；部分患者在1次化療結束后再次進行化療，最多化療4次。另5人（5例次）未行化療，作為對照組。

1.2 標本采集

所有研究對象在化療前、后定期抽取空腹靜脈血標本做血常規檢查。部分血樣經肝素抗凝后留作他用。化療后早期血樣在患者化療開始后4～7d內采集，化療后晚期血液樣本在患者一次化療開始后9～11d內采集，所有血液樣本均在未使用升白細胞藥物或其他免疫藥物前采集，化療期間均無急性感染發生。另外采集未化療患者的血樣為對照組，時間間距與化療組相同，并服用安慰劑。

1.3 細胞株

人胃癌NCI-N87細胞株購于中國生命科學院上海細胞庫，10%胎牛血清RPMI 1640培養，在體外殺傷實驗中作為靶細胞。

1.4 藥物

奧沙利鉑（OXA），商品名艾恒，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司制造。卡培他濱（Capecitabine）， 商品名希羅達（Xeloda），瑞士巴塞爾豪夫邁·羅氏有限公司制造。

1.5 實驗方法

1.5.1 離心法分離胃癌術后患者外周血單核淋巴細胞。

1.5.2 細胞培養

NCI-N87細胞株在含10%胎牛血清的RPMI1640培養基中培養，使活細胞數＞95%。

1.5.3 淋巴細胞殺傷實驗

將化療前、化療后10d左右胃癌術后患者外周血單核淋巴細胞按20∶1的比例與NCI-N87靶細胞混合，流式細胞儀檢測靶細胞存活情況。

1.5.4 CCK-8法檢測化療前、后患者外周血淋巴細胞對腫瘤細胞的殺傷活性

細胞殺傷率（%）=[1-（實驗組A-本底值）/（空白組A-本底值）]×100%。

1.5.5 統計學處理

本實驗數據采用SPSS 11.5統計軟件進行分析，實驗數據均以（）表示，兩兩組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異顯著。

2 結 果

2.1 用CCK-8法檢測胃癌術后患者化療后外周血淋巴細胞對人胃癌NCI-N87細胞的殺傷活性，結果顯示，對照組（同時間點）、化療組化療前后外周血淋巴細胞對人胃癌NCI-N87細胞株的殺傷活性變化無統計學意義。以上試驗表明，并不能認為化療后增生的T淋巴細胞對腫瘤細胞的抑制作用有所減弱。見表1。

2.2 流式細胞儀檢測胃癌術后患者化療后淋巴細胞殺傷能力的變化

結果顯示，對照組（同時間點）、化療組化療前后外周血淋巴細胞對人胃癌NCI-N87細胞株的殺傷活性的變化無統計學意義；所以，還不能認為化療前、后患者外周血淋巴細胞對人胃癌NCI-N87細胞株的殺傷活性有變化。另外我們發現有1例樣本化療后淋巴細胞殺傷率有明顯上調（化療前為6.25%，化療后為11.21%），此現象是否由于化療增強了部分患者的淋巴細胞的殺傷能力。見表2。

表1 化療前后外周血淋巴細胞對NCI-N87細胞殺傷活性的影響

表2 化療前后外周血淋巴細胞對NCI-N87細胞殺傷率的影響

3 討 論

為了明確胃癌術后患者化療后外周血淋巴細胞對腫瘤殺傷能力與化療前相比較有無變化，我們分別用CCK-8法和流式細胞術檢測了不同胃癌術后患者化療前、后外周血中淋巴細胞對腫瘤的殺傷效應。我們研究結果顯示，患者化療后體外培養的淋巴細胞對人胃癌NCI-N87細胞殺傷作用較化療前并沒有下降，部分病例還有一定程度的上調。以上結果可能與化療后期增生的記憶樣T細胞對抗原刺激敏感，活化閾值降低有關，表明胃癌術后患者化療后的淋巴細胞仍然具有一定的免疫殺傷功能。

上述結果表明，胃癌患者化療后免疫功能受到明顯抑制的同時，化療后新生的淋巴細胞對抗原刺激敏感，此時若給予腫瘤疫苗進行主動免疫或被動免疫，有可能誘導出增強的抗腫瘤免疫應答。另外，有研究證實[4]，化療可以選擇性地下調調節性T細胞的比例，解除調節性T細胞（Treg）對T效應細胞的免疫抑制作用，使得效應細胞更為有效地發揮免疫應答，即下調的Treg比例在化療誘生的優化的免疫微環境中發揮了重要作用，這一方面的研究工作還有待于深入探討。

本實驗采用胃癌術后患者化療前、后外周血為研究對象，證明了患者的淋巴細胞從淋巴細胞減少狀態逐漸恢復后淋巴細胞對腫瘤的殺傷功能并未下降，本實驗結果與國內采用其他化療方案的相關實驗結果基本一致[4]。但是，化療聯合腫瘤免疫治療的效用還需要更多高質量的臨床實驗來進一步驗證[5]，設計更完善、安全、重復性高的治療方案。

[1] 李瑞君,楊鐵健.奧沙利鉑聯合希羅達行進展期胃癌新輔助化療療效觀察[J].中國實用醫藥,2007,2(25):22-23.

[2] Soiffer R,Hodi FS,Haluska F,et al.Vaccination with irradiated, autologous melanoma cells engineered to secrete granulocytemacrophage colony-stimulating factor by adenoviral-mediated gene transfer augments antitumor immunity in patients with metastatic melanoma[J].J Clin Oncol 2003,21(17):3343-3350.

[3] Dudley ME,Wunderlich JR,Robbins PF,et al.Cancer regression and autoimmunity in patients after clonal repopulation with antitumor lymphocytes[J].Science,2002,298(5594):850-854.

[4] 儲以微,劉榮軍,張鐳,等.肺癌患者化療前后免疫細胞格局的改變及其臨床意義[J].中國腫瘤生物治療雜志,2006,13(4):253-256.

[5] Nowak AK,Lake RA,Robinson BWS.Combined chemoimmunotherapy of solid tumours: Improving vaccines[J].Adv Drug Deliv Rev,2006,58(8):975-991.

R730.53

B

1671-8194（2013）27-0144-02