流行性出血熱發熱期外周血T淋巴細胞亞群與血小板的檢測

溫麗麗，李金明

(南昌市第九醫院檢驗科，江西 南昌330002)

流行性出血熱 (epidemic hemorrhagic fever，EHF)亦稱腎綜合征出血熱。是由漢坦病毒引起的急性、地方性、自然疫源性傳染病，病情危急，并發癥多，病死率高。其主要病理變化表現為全身廣泛性的小血管和毛細血管的損害[1]。漢坦病毒是本病發病的始動因子。一方面病毒感染能導致細胞功能和結構的損害;另一方面病毒感染誘發人體的免疫應答和各種細胞因子的釋放，既能清除病毒，保護機體，但又能引起機體組織的損傷[2]。EHF臨床的主要癥狀是發熱、出血、腎臟損害，典型病例的病期表現為五期，即發熱期、低血壓休克期、少尿期、多尿期和恢復期。發熱是EHF早期診斷的參考指標[3],所以本文針對發熱期EHF患者，通過流式細胞儀和全自動血球計數儀來檢測樣本T淋巴細胞亞群和PLT，觀察其變化并分析其臨床參考價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象 實驗組：60例EHF發熱期患者，均來自江西省南昌市第九醫院住院患者，依據EHF診斷標準WS 278-2008[4]，診斷為EHF。進行抽血檢測T淋巴細胞亞群和血小板計數，年齡5～77歲，男44例，女16例，平均年齡40.45歲。對照組60例健康體檢者，年齡 5～65歲，男46例，女 14例，平均年齡34.3歲。

1.2 儀器與試劑 血小板計數使用Sysmex公司全自動血球計數儀XT-2000i和其稀釋液，多項目溶血素。T淋巴細胞亞群測定使用的是美國BD公司FACSCalibur流式細胞儀和BD公司的三色熒光單克隆抗體試劑CD3FITC/CD4PE/CD8PERCP。

1.3 檢測方法 血小板計數的檢測從實驗組和對照組各采靜脈血2ml，放于含有EDTA-K2的抗凝管中混勻，直接在全自動血球計數儀上上樣。T淋巴細胞亞群的檢測從實驗組和對照組各采靜脈血2ml，放于含有EDTA-K2的抗凝管中混勻，取相應的三色熒光標記抗體10μl，放于流式細胞儀專用試管中，加入100μl抗凝血，混勻，室溫避光15min。加入免洗溶血素450μl，混勻，室溫避光15 min，用流式細胞儀上樣，MULTISET軟件自動分析CD3+T淋巴細胞百分比，CD3+CD4+T淋巴細胞百分比，CD3+CD8+T淋巴細胞百分比和CD3+CD4+/CD3+CD8+比值。

1.4 統計學方法 處理所有數據以均數±標準差(x±s)表示，使用SPSSl2.0統計軟件進行分析。組間差異比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

PLT與T淋巴細胞亞群的檢測結果見表1，發熱期的EHF患者實驗組血小板在外周血計數明顯低于對照組，實驗組 PLT計數(58.7±24.6)×109/L與對照組PLT計數(208.9±44.3)×109/L差異有統計學意義(P<0.01)。EHF患者實驗組CD3+CD8+T淋巴細胞明顯高于對照組 (P<0.01)，CD3+T實驗組低于對照組 (P<0.01)，CD3+CD4+T實驗組低于對照組 (P<0.01)，實驗組CD4+T/CD8+T比值比例低于對照組(P<0.01),60例EHF患者實驗組中100%的病人低于正常。

表1 EHF患者實驗組與健康對照組外周血PLT、T淋巴細胞亞群的檢測結果

3 討論

EHF病原體為漢坦病毒，作為始動因素導致感染器官的損害例如血管內皮細胞的損傷、免疫應答的誘發和各種細胞因子的釋放，既清除病毒，又引起機體組織損傷。EHF患者的發病機制與人體免疫應答及細胞免疫調節功能密切相關。已有的研究結果表明：在發熱期間EHF患者PLT計數明顯低于健康的正常人，反映了EHF患者在發熱期間外周血中PLT破壞或消耗增加嚴重。由于病毒侵入機體，體液免疫亢進，循環免疫復合物迅速形成，且沉積于血小板表面，導致血小板聚集和破壞，引起血小板銳減，病毒損害骨髓功能導致巨核細胞生成抑制[5]。所以PLT計數越低，有可能反映了體液免疫的亢進程度和骨髓抑制的程度。在發熱期間EHF患者CD3+T淋巴細胞百分比，CD3+CD4+T淋巴細胞百分比和CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均明顯低于健康的正常人，CD3+CD8+T淋巴細胞的百分比明顯高于健康的正常人，反映了在發熱期間EHF患者機體細胞免疫呈應激狀態，存在嚴重的細胞免疫功能低下。CD3+T淋巴細胞，即總T淋巴細胞是介導機體的細胞免疫，它的降低說明EHF患者機體細胞免疫功能方面的異常。CD3+CD4+T淋巴細胞，即輔助/誘導性T淋巴細胞亞群，其主要功能是輔助和誘導其它免疫細胞，通過分泌的淋巴因子，增強和擴大免疫應答的功效。CD3+CD4+T淋巴細胞的明顯減少，即增強和擴大免疫應答的功效減弱，必然導致免疫功能低下，CD3+CD4+/CD3+CD8+比值變化與疾病的嚴重程度密切相關[6],比值越低，機體免疫功能越低。CD3+CD8+T淋巴細胞，即抑制/細胞毒性T淋巴細胞亞群，可特異性殺傷靶細胞，具有抗病毒、抗腫瘤和重要的調節作用.而CD3+CD8+T淋巴細胞的百分比的顯著升高，雖具有清除病毒的作用。但其過度亢進反而加劇了針對黏附有流行性出血熱病毒的細胞及組織的損傷，反而造成機體功能的紊亂。結果顯示EHF患者在發熱期間存在嚴重的免疫功能紊亂，其程度與CD3+CD4+/CD3+CD8+比值有關。EHF患者在早期的臨床診斷中，發熱是診斷的指標之一，發熱病程均在3天以上，長者達10天，且發生率達100%[7]。所以通過對EHF患者發熱期間所做的PLT和T淋巴細胞亞群的檢測分析有助于EHF患者能在早期確診并有助于臨床診療。綜上所述，血小板和T淋巴細胞亞群檢測在EHF患者發熱期的診療過程中有一定的參考價值，提示在診療過程中對體液和細胞免疫進行觀察和調節有助于改善病情和縮短病程。

[1]楊紹基,任紅.傳染病學[M].第 7版.北京:人民衛生出版社,2008:83-91.

[2]鄒默,鄧璐,張赫男,等.腎綜合征出血熱發病機制研究現狀[J].醫學綜述,2011,17(17)：2666-2667.

[3]李繼岱.流行性出血熱的早期診斷參考指標[J].工企醫刊，2004,17(3)：29-30.

[4]中華人民共和國衛生部WS 278-2008流行性出血熱診斷標準[S].2008.

[5]張東鋒,王曉萍.對腎綜合征出血熱患者檢測的臨床意義[J].國際檢驗醫學雜志,2010,31(2):180-181.

[6]田一玲,蔣任舉,李華平.鼻咽癌和腎綜合征出血熱患者外周血T淋巴細胞亞群的研究[J].中國中醫藥咨訊，2010，2(7)：105-106.

[7]于永華.周伯慧.182例流行性出血熱早期臨床診斷分析[J].寧夏醫學雜志,2003,25(7)：436.