北京地區人群血清抗交叉反應性糖類決定簇IgE檢測與分布特征分析

閆津津，馮珍如，王美玲，閆存玲，鄭新芝，李志艷，史曉敏

目前國內外檢測變態反應病的變應原(allergen)較常用的檢查方法是變應原皮膚點刺試驗 (skin picked test，SPT)和血清變應原特異性IgE(specific IgE，sIgE)檢測，前者由于會產生較大的痛苦，不太被患者接受;后者只需抽取少量靜脈血即可，因而應用廣泛。準確判斷變應原sIgE的結果對明確診斷，接受后續治療具有重要意義。但是由于有交叉反應性糖類決定簇(cross－reactive carbohydrate determinants，CCD)可能會產生假陽性，干擾sIgE的結果判定。CCD的主要結構包括β1，2－xylose(木糖)和 core α1，3－fucose(海巖藻糖)［1］?，F國外有很多關于CCD生物學功能的報道。研究表明，在變應原和非變應原中均有糖基化結構，該糖基化結構引起的IgE為抗交叉反應性糖類決定簇IgE(IgE to cross－reactive carbohydrate determinants，anti－ CCDIgE)，是引起交叉反應的一類糖基抗體［1］。這類糖基可表現在花粉、植物類食物、昆蟲的毒液等中，引起機體產生 anti－CCDIgE，anti－CCDIgE是否引起過敏癥狀還未有定論［2］，臨床相關性研究提示一般不引起機體的臨床過敏癥狀［3］。anti－CCDIgE 由于與其他變應原的IgE有共同的抗原表位，存在交叉反應，這說明一些sIgE陽性的患者并沒有出現相應的臨床表現，則是 由 于 anti－CCDIgE 引 起 的［2］。anti－CCDIgE是否會引起臨床過敏癥狀，是否需要治療，對sIgE診斷有無干擾，國外雖有報道，但并未明確，國內尚無相關報道。本研究首次在中國對北京地區人群血清anti－CCDIgE與性別、年齡、職業暴露、臨床過敏癥狀等的相關性進行研究，旨在為臨床預防和診治變態反應病提供準確的實驗數據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 參加2010年度北京大學第一醫院體檢的本院工作人員共1 377例，其中男349例，女1 028例;年齡22～91歲，平均(42.3±3.8)歲，其中20～40歲650例 (青年組，男98例，女552例)，41～60歲587例 (中年組，男202例，女385例)，＞60歲140例 (老年組，男49例，女91例);行政人員412例，醫護人員965例;無過敏史者1 200例，有過敏史者177例。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑及儀器 試劑:(1)特應性變應原 (中國組合)檢測試劑盒(歐蒙醫學實驗診斷股份公司)，批號為A100719AA、A1000927AH;保存條件為2～8℃。試劑盒包括:變應原膜條、酶結合物、10倍濃縮通用緩沖液、底物等。變應原膜條項目:蟹，蝦，海水魚組合(龍蝦、扇貝、鱈魚)，淡水魚組合 (鮭魚、鱸魚、鯉魚)，黃豆，花生，牛奶，雞蛋白，葎草，霉菌組合 (點青霉菌、分枝胞霉、煙曲霉、交鏈孢霉)，蟑螂，狗上皮，貓毛，屋塵，塵螨組合 (屋塵螨、粉塵滿)，艾蒿，普通豚草，樹組合(榆樹、柳樹、楊樹)。

儀器:EUROBlotMaster免疫印跡自動分析儀 (德國歐蒙醫學實驗診斷股份公司)，canoscanline 100掃描判讀系統(日本佳能有限公司)，掃描結果判讀軟件 (EUROLine Scan，德國歐蒙醫學實驗診斷股份公司)。

1.2.2 血清anti－CCDIgE檢測方法 采集受檢者靜脈血5 ml，置于含分離膠的真空黃蓋管，分離血清于－80℃保存，待測anti－CCDIgE。嚴格按照儀器和試劑說明書進行操作:加樣，清洗，加入酶結合物，清洗，加底物，清洗等。由EUROblot Master免疫印跡分析儀自動進行檢測，檢測完成后取出膜條自然風干。

1.2.3 結果判讀 將檢測膜條室溫自然風干后，采用掃描結果判讀軟件進行掃描，根據條帶著色強度自動判讀結果。條帶著色強度＜10為陰性，著色強度≥10為陽性。結果分為0～6級，0級為陰性，1級及以上為陽性，級別越高著色越深，表示sIgE(包括anti－CCDIgE和各項變應原sIgE)濃度越高。

1.3 統計學方法 用SPSS 13.0統計軟件進行數據的處理，組間率的比較采用χ2檢驗;同組內構成比比較采用組內構成比比較的χ2檢驗;anti－CCDIgE陰性和陽性人群血清sIgE陽性平均項目數比較采用Wilcoxon W檢驗;anti－CCDIgE陽性率與血清sIgE變應原陽性項目數的關系采用線性相關分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清anti－CCDIgE檢出情況 1 377例體檢者中 anti－CCDIgE陽性327例，陽性率為23.7%，其中1級185例 (占56.6%)，2級85例 (占26.0%)，3級46例 (占 14.1%)，4級 6例 (占1.8%)，5級5例 (1.5%)，各陽性級別所占比例間差異有統計學意義 (χ2=340.08，P＜0.05)。

2.2 血清anti－CCDIgE與血清變應原sIgE陽性項目數的關系 anti－CCDIgE陰性人群血清變應原sIgE陽性平均項目數為0.999個，anti－CCDIgE陽性人群血清變應原sIgE陽性平均項目數為2.551個，二者比較差異有統計學意義 (P＜0.001)。anti－CCDIgE陽性率與血清變應原sIgE陽性項目數呈線性正相關 (r=0.986，P＜0.05)。1個變應原sIgE陽性時anti－CCDIgE陽性率和總體anti－CCDIgE陽性率相當 (見圖1)。

圖1 血清anti－CCDIgE陽性率與血清sIgE陽性變應原項目個數的關系Figure1 The correlation between prevalence of anti－CCDIgE and number of sIgE positive items

2.3 不同人群anti－CCDIgE陽性率比較 女性體檢者的anti－CCDIgE陽性率高于男性，有過敏癥狀者的anti－CCDIgE陽性率高于無過敏癥狀者，差異均有統計學意義 (P＜0.05)。不同年齡、職業人群比較，anti－CCDIgE陽性率間差異均無統計學意義 (P＞0.05，見表1)。

2.4 sIgE各陽性變應原項目中anti－CCDIgE陽性率 屋塵44.6%、蟑螂33.9%、狗上皮22.6%、樹22.1%、蝦21.7%、艾蒿15.6%、淡水魚15%、蟹14.4%、塵螨12.2%、豚草11.9%、海魚11.7%、霉菌8.9%、貓毛6.7%、牛奶5.2%、花生3.7%、黃豆3.1%、羊肉2.1%、雞蛋白1.8%、牛肉1.2%、葎草1.2%。

表1 不同分組人群血清anti－CCDIgE陽性率比較Table1 Comparison of different sub－groups positive rate of serum anti－CCDIgE

3 討論

本研究根據大樣本探討人群血清anti－CCDIgE的分布特征及與臨床變態反應的相關性，結果顯示1 377例體檢者中anti－CCDIgE陽性 327例，陽性率為23.7%，略高于歐洲一般人群的anti－ CCDIgE陽性率 (20%)［1］，其中 1級185例 (占 56.6%)，2級85例 (占26.0%)，3級46例 (占14.1%)，4級6例 (占 1.8%)，5級 5例 (1.5%)，隨著級別遞增，anti－CCDIgE陽性率明顯降低。上述數據顯示北京地區人群anti－CCDIgE陽性中大部分為低濃度 (1級)水平。文獻報道CCD引起的IgE水平為低水平、低親和力、低活性的［4］，因此可能是不會引起臨床癥狀的原因。

本研究結果顯示，anti－CCDIgE陽性人群血清變應原sIgE的陽性項目數明顯高于 anti－CCDIgE陰性人群，并且隨sIgE陽性項目增加，anti－CCDIgE陽性率有增高趨勢，即多種變應原陽性時，可能anti－CCDIgE抗體對sIgE檢測的干擾就越大。

本研究結果顯示，女性anti－CCDIgE陽性率高于男性，有臨床過敏癥狀者高于無臨床過敏癥狀者，因此對有過敏癥狀的就診者，特別是女性，在評估變應原時應考慮anti－CCDIgE的影響。而不同年齡、職業人群 anti－CCDIgE陽性率無差異，說明年齡和職業暴露不同不會引起anti－CCDIgE差異產生。西班牙地區的調查報道，男性anti－CCDIgE水平高于女性，45歲及以上和45歲以下者anti－CCDIgE水平無差別，有過敏癥狀者anti－CCDIgE水平高于無過敏癥狀者［4］，與北京地區不同的是，北京地區女性anti－CCDIgE陽性率高于男性，整個中國乃至亞洲地區人群是否與歐洲地區不同需進一步研究探索。

本研究表明在一般人群中anti－CCDIgE陽性率最高樣本中的變應原是屋塵 (44.6%)，這與國外相關報道首位的是花粉［5］不同，可能與人類基因的多態性和接觸的頻率有關。

大部分吸入或食入變應原都含有糖基化的低聚糖，它們是有免疫原性的，可使人體產生針對糖類的抗體anti－CCDIgE，干擾血清中sIgE的測定，可能引起假陽性或假陰性的產生，其原因可能是機體產生的anti－CCDIgE結合與其有相同表位的變應原導致。根據國外相關報道，大多數交叉反應導致的假陽性不是因蛋白表位的交叉反應，而是由于anti－CCDIgE的產生所致，如有大量證據顯示膜翅目毒液和蜜蜂毒液之間的交叉反應大多是由N－糖基鏈所致，而不是蛋白之間的交叉反應［6］，因此當出現多種變應原時應考慮anti－CCDIgE的影響。研究估計15%～30%的變態反應病患者會產生針對糖基蛋白的 sIgE，即 anti－CCDIgE［7］。41%對花粉產生變態反應的患者，產生了針對糖基蛋白的sIgE，而SPT顯示為陰性［8］。

本研究未能分析anti－CCDIgE對SPT的影響是否也會引起SPT假陽性或假陰性，以及有文獻報道蜜蜂叮咬人群anti－CCDIgE陽性率明顯高于其他人群［4］，在進一步研究中將考慮。此文亦未能分析當sIgE和anti－CCDIgE同時存在時，其他具有相同蛋白表位的變應原是否也有干擾，是以哪種為主，具體個案分析有待進一步研究。

綜上可見，anti－CCDIgE普遍存在于過敏人群中，從有過敏的患者到無過敏的人群，都有anti－CCDIgE的存在，所以使用天然或重組糖蛋白作為靶抗原建立的sIgE檢測方法必須認真評估anti－CCDIgE的普遍存在，其是引起多種與臨床診斷不相符合的變應原sIgE假陽性的因素之一。對于變態反應病首先應盡快明確其變應原，在血清學檢查中應將anti－CCDIgE考慮其中，必要時使用抑制劑預處理，從而得到準確的結果，指導臨床有效預防和控制變態反應病的發生。

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