地佐辛注射液細菌內毒素檢查法研究

時榮同 謝冬梅 郭道華 王群

地佐辛注射液細菌內毒素檢查法研究

時榮同 謝冬梅 郭道華 王群

目的 建立地佐辛注射液細菌內毒素檢查方法。方法 參照《中國藥典》2010版(二)部附錄細菌內毒素檢查法及其原則進行實驗。結果 當地佐辛注射液稀釋至100倍時可消除對鱟試劑與細菌內毒素凝聚反應的干擾。 結論 可以用細菌內毒素檢查法對地佐辛注射液進行熱原檢查。

地佐辛注射液； 細菌內毒素檢查； 鱟試劑； 干擾試驗

地佐辛是一種強效阿片類鎮痛藥, 能有效緩解術后疼痛,其鎮痛強度、起效時間和作用持續時間與嗎啡相當。當穩態血藥濃度超過5~9 ng/ml時, 能較好的緩解術后疼痛, 但是對阿片類鎮痛藥過敏的患者禁用。筆者通過研究, 發現地佐辛注射液目前沒有細菌內毒素檢查法這方面的研究。為了控制地佐辛注射液的質量和減少臨床熱原反應的發生, 筆者參照有關文獻［1,2］,對地佐辛注射液細菌內毒素檢測方法進行了可行性試驗,現總結如下。

1 試驗材料

1.1 樣品 地佐辛注射液3批, 規格1 ml(0.5 mg), 批號13042721,13051621 13062921, 生產廠家:揚子江藥業集團有限公司。

1.2 試劑 鱟試劑:批號121206, 規格0.1 ml:λ=0.5 EU/ml, 湛江安度斯生物有限公司；批號130120, 規格0.1 ml:λ=0.25EU/ ml, 湛江博康海洋生物有限公司。

細菌內毒素工作標準品:批號2012-3, 效價120EU 規格1ml, 中國藥品生物制品檢定所。細菌內毒素檢查用水, 以下簡稱(BET), 批號1207150, 規格5 ml/支 湛江安度斯生物有限公司。

1.3 儀器 XW_80A旋渦混旋器, 上海醫科大學儀器廠；HH.214電熱恒溫水浴鍋,江蘇醫療器械廠。

2 試驗方法與結果

2.1 鱟試劑靈敏度復核［3］按照《中國藥典》2010版(二部)進行鱟試劑的標示靈敏度復核, 結果見表1所示。

2.2 樣品內毒素理論限值(L)的確定及最大有效稀釋濃度倍數MVD的計算［3］。

2.2.1 樣品內毒素理論限值(L)的確定 本品臨床使用每次最大劑量是20 mg,成人體重按60 kg計,人體致熱閥(k)為5.0 EU/(kg·h)則L=K/M=5.0 EU·(kg·h)-1÷(20 mg÷60 kg)=15 EU·mg-1。

2.2.2 最大有效稀釋濃度倍數的計算MVD 根據公式計算MVD=CL/λ計算。

MVD(λ=0.5)=5.0 mg·ml-1×15 EU·ml-1÷0.5 EU·ml-1=150倍。

MVD(λ=0.25)=5.0 mg·ml-1×15 EU·ml-1÷0.25 EU·ml-1=300倍。

2.3 樣品干擾試驗

2.3.1 干擾預試驗 為排除樣品自身對TAL與細菌內毒素凝膠反應可能存在干擾,取樣品批號為13042721的原液, 分別按表2所列的稀釋倍數稀釋, 制成樣品溶液濃度系列, 并制備含2λ 細菌內毒素的樣品稀釋液(PPC)進行干擾預試驗,同時作陽性和陰性對照。結果見表2。

由干擾預試驗可見, 兩個廠家鱟試劑對地佐辛注射液用細菌內毒素檢查在100倍稀釋時無干擾。

2.3.2 干擾確證試驗 為了最終確定是否存在干擾, 現進行以下正式干擾試驗。取地佐辛注射液用細菌內毒素檢查用水進行稀釋100倍, 按《中國藥典》2010版(二部)附錄細菌內毒素檢查供試品干擾試驗項進行試驗, 結果見表3。

干擾試驗表明, 最大濃度2.0λ管均為陽性, 最低濃度0.25λ管均為陰性, 陰性對照管均為陰性, 用BET水和樣品溶液制成的內毒素溶液的反應終點濃度幾何平均值Es在0.5~ 2.0λ, Et在0.5~2.0Es范圍內, 說明樣品在該濃度下對兩批鱟試劑均無干擾, 可進行細菌內毒素檢查。

2.4 樣品細菌內毒素檢查 取地佐辛注射液3批, 將原液1:100倍稀釋后用以上兩批鱟試劑分別按《中國藥典》2010版(二部)附錄細菌內毒素檢查法進行細菌內毒素檢查, 結果3個批號供試品的內毒素檢查均符合規定, 與家兔法檢查一致。結果見表4。

表1 鱟試劑靈敏度復核結果

表2 干擾預試驗結果鱟試劑批號121206 λ=0.5 EU/ml, 批號130120 λ=0.25 EU/ml

表3 干擾試驗結果(1:100稀釋液)

表4 地佐辛注射液細菌內毒素檢查結果

3 討論

地佐辛注射液的原液對TAL凝聚反應存在干擾, 通過預試驗確證樣品在1:100倍稀釋時, 對細菌內毒素檢查無干擾作用。本法操作簡單, 精確度高, 重現性好, 因此本試驗細菌內毒素法代替熱原檢查法是可行的［4］。通過本試驗證明了地佐辛注射液的細菌內毒素檢查法的可行性。本文通過干擾預試驗確定樣品的有效稀釋倍數, 再由干擾試驗進一步驗證,從而減少干擾試驗的盲目性。用不同廠家的鱟試劑進行試驗且結果相同, 由此說明鱟試劑可以用于本品的細菌內毒素檢查。

［1］ 蔡彤,張國來,李波,等.84種注射液藥品細菌內毒素檢查法的方法學研究.中國藥學雜志, 2010,45(2):150-155.

［2］ 朱勤.復合磷酸氫鉀注射液的細菌內毒素檢查法.安徽醫藥, 2012,16(8):1190-1192.

［3］ 國家藥典委員會.中國藥典(二部).北京:中國醫院科技出版社, 2010:附錄99-102.

［4］ 王群,謝冬梅.阿扎司瓊注射液的細菌內毒素檢查法的探討.安徽醫藥, 2011,15(5):564-565.

Study of bacterial endotoxin test for dezocine injection

SHI Rong-tong, XIE Dong-mei, GUO Dao-hua, WANG Qun.
Pharmacy Department,General Hospital of Wanbei Coal Mine Bureau, Suzhou Anhui 234011, China.

Objective To establish the bacterial endotoxin test in Dezocine Injection.Methods According to the CHP(2010 Edt.), inhibition or enhancement test forbacterial endotoxin test was carried out of sodium bicarbonate injection.Results The interference could be eliminated when Dezocine injection was diluted by 100 times .Conclusion bacterial endotoxin inspection method can be used for testing the pyrogen of Dezocine injection.

Dezocine injection; Bacterial endotoxin test(BET); Tachypleus amebocyte lysate(TAL); Interference test

234011 宿州市皖北煤電集團總醫院藥劑科(時榮同)；蚌埠醫學院第一附屬醫院藥劑科(謝冬梅 郭道華 王群)

謝冬梅 E-imal:xiedongmei410@163.com