人絨毛膜促性腺激素定量檢測方法的評價

全媛 王潔珣 陳小春

人絨毛膜促性腺激素(HCG)是糖蛋白激素家族中的一員,一旦妊娠后絨毛生成, 即可在血循環中檢測到。因此測定HCG的水平可用于診斷早孕及宮外孕, 進行先兆性流產的動態觀察及判斷預后, 還可作為孕期的監護觀察指標。此外, 也可用于絨毛膜癌、惡性葡萄胎等作為輔助診斷及治療后隨訪的觀察指標。因為血中HCG變化較快, 能及時反映出絨毛的分泌活動［1,2］。HCG檢測方法多種多樣, 現對江蘇省泰州市第二人民醫院兩種檢測HCG方法的重復性、穩定性等指標進行評價。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 化學發光免疫法 采用美國貝克曼公司UniCel DXI 800免疫分析儀及其配套檢測試劑。

1.1.2 酶聯熒光免疫法 采用法國生物梅里埃MINI VIDAS和配套檢測HCG試劑。

1.2 標本

1.2.1 質控品 美國貝克曼公司提供的質控品。

1.2.2 血樣 隨機抽取住院及門診患者共100例。

1.3 試驗原理

1.3.1 化學發光免疫法檢測HCG原理 UniCel DXI 800免疫分析系統采用化學發光技術和磁性微粒分離技術相結合的測定方法, HCG測定原理為雙抗體夾心法。

1.3.2 MINI VIDAS檢測 HCG原理 是一種定量全自動ELISA(酶聯免疫吸附劑測定)法, 將兩步的免疫夾心法與最后的熒光檢測結合起來, 利用現成的單劑量試劑和分析儀中儲存的校準系統, 對單份樣品進行檢測。

1.4 方法

1.4.1 重復性實驗(批內精密度) 根據CLSI的EP5-A2文獻［3］對于精密度評價的要求, 分別在UniCel DXI 800免疫分析儀和MINI VIDAS測定三個水平質控HCG含量, 3 h內各水平測試20次, 計算均值()、標準差(s)、變異系數(CV)。1.4.2 穩定性實驗(日間精密度) 按上述方法分別測定三個水平質控HCG含量, 1次/d, 連續測定20 d, 計算均值(x-)、標準差(s)、變異系數(CV)。

1.4.3 比對實驗 根據CLSI EP9-A2文獻［4］, 選取隨機的住院及門診患者新鮮血樣標本100例, 采用上述兩種方法平行檢測HCG含量, 最后對檢測結果進行相關性分析。

1.5 統計學方法 用SPSS17.0統計軟件進行相關性分析。

2 結果

2.1 重復性與穩定性 化學發光免疫法和酶聯熒光免疫法的重復性結果, 見表1, 穩定性結果, 見表2。

2.2 比對實驗 將檢測結果作回歸曲線, 得到化學發光免疫法和酶聯熒光免疫法比對結果的回歸方程：y=0.885x+31.24,相關系數r=0.985。根據CLSI文獻要求(r>0.975), 可見兩種方法相關性理想。

表1 重復性實驗結果

表2 穩定性實驗結果

3 討論

HCG是孕卵著床后由人體滋養層細胞分泌的一種糖蛋白激素, 在正常與異常妊娠期有一定的分泌規律, 滋養細胞的數量和活力與HCG的分泌密切相關, 因此, 血清HCG測定能夠在臨床上診斷早孕、異位妊娠、先兆流產、葡萄胎及妊娠滋養細胞腫瘤等, 并在治療中和治療后的隨診中成為重要檢測指標。

根據上述實驗結果, 兩種定量檢測方法均有穩定性、重復性較好的特點, 對比實驗結果顯示, 兩種方法相關性較好。另外, 兩種方法有各自的優點, 實驗室可根據具體情況選擇。UniCel DXI 800免疫分析儀：①磁性微粒子/超聲波清洗分離技術, 使攜帶污染率<1 ppm, 避免了交叉污染和攜帶效應嚴重等問題。②分析速度最高可達400測試/h, 急診項目分析時間≤15 min。③一次裝載量≥50個試劑位, 試劑儲存在4～10℃, 該系統自動化、智能化程度高。MINI VIDAS：①所有試劑都已經預先分裝在獨立的試劑條中, 減少了交叉污染和干擾, 同時對操作者是較好的保護, 特別是高危標本。②該方法可單個或多個標本多個項目同時測定, 比較適合小型實驗室或大型實驗室的急診檢測。

［1］衛生部臨床檢驗中心.臨床實驗室室間質評的要求(草案).全國臨床化學室間質評資料匯編, 2000:1-3.

［2］葉應嫵,王毓三.全國臨床檢驗操作規程.第2版.南京：東南大學出版社, 1997,21(10):601-604.

［3］NCCLS.Evaluation of performance of quantitative Measurement methods；approved guideline-second edition.NCCLS document EP5-A2, 2004.

［4］NCCLS.Method comparison and bias estimation using patient samples; approved guideline-second edition.NCCLS document EP9-A2.NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne,Pennsylvania 19087-1898 USA, 2002.