老年乳腺癌組織中cortactin和FASCIN的表達及相關性

江朝娜 (海南醫學院形態學實驗室，海南 海口 570102)

乳腺癌發生發展與生物學行為密切相關，由于腫瘤是多因素作用的結果，因此研究蛋白的表達有重要意義〔1〕。cortactin是一種微絲肌動蛋白結合蛋白，在細胞足突和板狀偽足的形成，膜胞輸送，細胞內吞噬和腫瘤的形成及侵襲等方面有重要的作用〔2，3〕。FASCIN蛋白是一種結構獨特的細胞骨架蛋白，其高表達時能促使活性細胞膜突起，增加細胞運動性，并改變細胞與細胞、細胞與細胞外基質的黏附性〔4〕。本實驗應用流式細胞術檢測老年乳腺癌組織中cortactin和FASCIN的表達情況，探討其臨床價值。

1 材料與方法

1.1 材料 我院2007年11月至2010年11月老年乳腺癌手術后的凍存新鮮標本作為觀察組95例，均為女性，年齡60～75歲，平均66.7歲。標本均再次行HE染色并由病理醫師進行判讀，納入均符合2008年(WHO)的診斷標準。患者術前均未進行放療和化療。同時選取部分老年患者乳腺其他象限的正常乳腺組織55例作為對照組，年齡60～69(平均63.9)歲。

1.2 cortactin和FASCIN蛋白檢測 兔抗人cortactin及FASCIN蛋白的濃縮液均購自武漢博士德生物技術有限公司。cortactin及FASCIN蛋白的表達均采用流式細胞術進行檢測，上機前制備好單細胞懸液，取1 ml并嚴格按實驗步驟操作后上機檢測〔5〕，應用美國BC公司的流式細胞儀進行檢測，做好質量控制，應用系統自帶的軟件進行數據分析。

1.3 cortactin和FASCIN蛋白的判斷標準 以熒光指數(FI)表示cortactin和FASCIN蛋白的半定量表達。FI=(cortactin或FASCIN蛋白表達的熒光強度-對照樣品平均熒光強度)÷對照樣品平均熒光強度。

1.4 統計學處理 應用SAS6.12軟件，應用t檢驗、相關分析及生存分析。

2 結果

2.1 兩組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達 觀察組中cortactin和FASCIN的表達量明顯高于對照組(P＜0.000 1)。見表1。

表1 兩組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達(±s)

表1 兩組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達(±s)

組別 n cortactin t值 P值 FASCIN t值 P值對照組 95 1.32±0.31 13.87 ＜0.000 1 1.42±0.39 18.27 ＜0.000 1觀察組55 1.00±0.35 1.00±0.29

2.2 觀察組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達與乳腺癌臨床病理特征的關系 觀察組中cortactin及FASCIN的表達與腫瘤的淋巴結轉移、脈管浸潤、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)的表達密切相關。見表2。

2.3 觀察組中cortactin及FASCIN表達的相關性 經線性相關分析顯示，觀察組中cortactin及FASCIN的表達呈正相關性(r=-0.46，P=0.012 5)。

2.4 觀察組中cortactin及FASCIN的表達及生存的相關性 隨訪時間為8～60個月，平均29.7個月。經生存分析顯示觀察組中cortactin(P=0.021 8)及FASCIN(P=0.013 0)的表達與生存時間相關，即cortactin和FASCIN高表達的患者預后差。

表2 觀察組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達與乳腺癌臨床病理特征的關系(±s)

表2 觀察組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達與乳腺癌臨床病理特征的關系(±s)

臨床病理特征n cortactin t值 P值 FASCIN t值 P值脈管浸潤無 55 1.23±0.24 7.65 0.019 2 1.31±0.37 7.12 0.024 1有 40 1.44±0.31 1.57±0.35淋巴結轉移無 53 1.21±0.23 7.13 0.018 2 1.32±0.29 7.46 0.019 9有 42 1.46±0.19 1.55±0.38 ER+ 50 1.25±0.23 6.57 0.020 1 1.33±0.37 5.43 0.039 2- 45 1.40±0.25 1.50±0.35 PR+ 52 1.23±0.27 6.86 0.023 1 1.21±0.31 9.85 0.009 2- 43 1.43±0.25 1.54±0.34

3 討論

Cortactin的結構有特殊性，cortactin的NTA區域可與肌動蛋白相關蛋白(ARP)復合物形成相互作用，中間的序列參與ARP復合物的激活，羥基端SH3區域在大多數細胞內與細胞膜的微線網絡關系密切〔6〕。Cortactin可以引起細胞骨架的改變。Cortactin的過表達時，可以有效增加細胞的運動和遷移能力，對腫瘤的侵襲有重要影響。Cortactin突變時，可以引起細胞形態和運動狀態的改變，如細胞變圓、細胞發生堆疊，此時cortactin可以引起微絲組裝活動的改變〔7〕。也有觀點認為cortactin的表達能針對腫瘤細胞的發展過程，此時主要影響分裂增殖和侵襲轉移〔8，9〕。Cortactin及相關肌動蛋白骨架在卵母細胞分裂過程中發揮作用，此機制與紡錘體定位有關。Cortactin在卵母細胞核內的紡錘體的突起與肌動蛋白結合而形成帽狀結構，引起染色質向細胞周圍移動，有效地實現細胞的分裂〔10，11〕。FASCIN基因編碼的FASCIN蛋白是一種肌動蛋白結合蛋白，可以通過增加細胞膜突起、改變細胞與細胞外基質的黏附作用以及通過細胞信號轉導通路促進腫瘤的侵襲和轉移。FASCIN在正常的乳腺上皮中低表達，在腫瘤進展時表達增強。有研究顯示FASCIN蛋白表達的增加，細胞膜表面突起增多、細胞分化程度降低、細胞增生能力增強、肌動蛋白的骨架重建，細胞的運動功能增強，即FASCIN通過參與細胞突起形成來促進腫瘤細胞的進展〔12〕。也有觀察認為FASCIN是一種潛在的腫瘤轉移促進基因，可能與其強效地促進腫瘤細胞的遷移有關〔1〕。

本實驗提示cortactin和FASCIN對腫瘤的發生具有明顯的促進作用，FASCIN對腫瘤的作用與可能與促進增殖有關〔13〕。cortactin和FASCIN二者可能具有協同作用。cortactin和FASCIN的協同作用與二者同為細胞骨架相關蛋白有關，也與二者共同促進腫瘤細胞的遷移有關〔14〕。cortactin和FASCIN均有促進腫瘤細胞外基質降解的作用，使限制腫瘤細胞遷移的屏障丟失，為腫瘤細胞轉移提供直接的條件。cortactin和FASCIN高表達也可能是通過影響細胞支架結構和整合素介導的信號傳遞，參與的血管發生的激活階段有關。cortactin和FASCIN高表達時提示腫瘤進展，尤其是提示腫瘤的活動性增強、轉移能力增強。由于淋巴結轉移、脈管浸潤、ER、PR的表達在常規病理診斷及臨床觀察中均為與預后相關的密切指標，因此聯合檢測cortactin和FASCIN的表達可能和乳腺癌的預后相關，而生存分析直接證實了此結論。

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