不同方法檢測正常人群血清甲胎蛋白比較

陳衛文 劉雪輝 吳麗美 朱演葵

甲胎蛋白（A-fetoprotein，AFP）是原發性肝癌（PHC） 實驗室診斷和判斷肝病預后的重要指標，準確測定患者血清中AFP含量非常重要。臨床上測定AFP的常規方法有放射免疫法（RIA），酶免疫法（EIA）和膠體金法。近年來，化學發光免疫檢測技術（CLIA）因其具有反應快、靈敏度高、準確度高，標記物穩定、對人體無放射性或毒性危害且特異性強等特點，是目前為止公認最好的微量定量檢測方法[1]。

筆者所在醫院的健康監護科常年以正常健康體檢人群為調查對象，大批量篩查甲胎蛋白陽性的標本，酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）試劑成本低，敏感度高，適于大批量普查。本文旨在探討酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）和化學發光免疫檢測法（CLIA）檢測AFP敏感度和特異度，評價兩種方法的適用性。

1 材料與方法

1.1 標本 2012年6月到筆者所在醫院體檢的某單位正常公務員血清標本共2000份，其中男性1500例，女性500例。年齡28～56歲。

1.2 儀器與試劑 深圳愛康Uranus AE150全自動酶免儀，西門子Centuar化學發光儀。酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）試劑由鄭州安圖綠科生物工程有限公司提供。西門子Centuar化學發光免疫檢測法（CLIA）試劑均為原裝配套西門子Centuar校準物、質控物和試劑。

1.3 方法 分別用酶聯免疫吸附試驗法，化學發光免疫檢測法測定某單位正常公務員血清標本共2000份，其中男性1500例，女性500例。

1.4 統計學處理 本實驗采用SPSS 11.0軟件。計數資料行 χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2000份正常公務員健康體檢的血清標本中，用酶聯免疫吸附試驗法和化學發光免疫檢測法檢測2000份正常公務員健康體檢的血清標本的甲胎蛋白，其中男性1500例，女性500例。年齡28～56歲。用酶聯免疫吸附試驗法檢出17例陽性，陽性率0.85%，敏感性為80.9%，1例經確證為陰性，特異性為95%。假陽性率為5%[2]。用化學發光法檢測甲胎蛋白21例高于正常范圍，化學發光法檢出AFP高于正常范圍的21例中，陽性率1.05%，經確證AFP高于正常范圍的21例均為陽性，敏感性為100%。化學發光法和酶聯免疫吸附試驗法的敏感性比較差異有統計學意義（P<0.05），化學發光法和酶聯免疫吸附試驗法的特異性比較差異有（P<0.05）。酶聯方法的精密度測定：批內精密度測定用質控血清在同一反應板內測定20個孔，測得（OD/CO值）X=2.30，S=0.2，CV=12.17%；批間精密度測定用同一批號質控血清在每一反應板測定一孔，連續測定20 d，測得（OD/CO值）X=2.21，S=0.30，CV=13.57%（OD為吸光度，CO為cut off值，X為均值，CV為變異系數）[3]。見表1。

表1 ELISA法和化學發光免疫檢測法檢測結果比較

3 討論

甲胎蛋白（α-fetoprotein，αFP或AFP）主要在胎兒肝中合成，分子量6.9萬，在胎兒13周AFP占血漿蛋白總量的1/3。在成人，AFP可以在大約80%的肝癌患者血清中升高，在生殖細胞腫瘤出現AFP陽性率為50%[4]。在其他腸胃管腫瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患者亦可出現不同程度的升高。但當肝細胞發生癌變時，卻又恢復了產生這種蛋白質的功能，而且隨著病情惡化它在血清中的含量會急劇增加，甲胎蛋白就成了診斷原發性肝癌的一個特異性臨床指標。過去一直認為是診斷原發性肝癌的特異性腫瘤標志物，具有確立診斷、早期診斷、鑒別診斷的作用[5]。近年大量的臨床卻發現，部分肝硬化患者會長期出現AFP達到上千，但多年都沒有肝癌的跡象；同時發現約20%的晚期肝癌患者，直至病故前，AFP仍不超過10。甲胎蛋白是肝癌的特異性標志，但血清甲胎蛋白陽性未必都是肝癌。在臨床中發現，血清谷丙轉氨酶（ALT）升高的患者同時有血清甲胎蛋白升高[6-7]。

酶聯免疫法是1971年瑞典學者Engvail和Perlmann，荷蘭學者Van Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術發展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，即酶聯免疫吸附測定法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）[8]。ELISA現在已成為目前分析化學領域中的前沿課題，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術（immunoenzymatic techniques）的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術。酶聯免疫吸附劑測定法，簡稱酶聯免疫法，或者ELISA法。它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。化學發光（chemiluminescence）是指伴隨化學反應過程所產生的光的發射現象。某些物質（發光劑）在化學反應時，吸收了反應過程中所產生的化學能，使反應的產物分子或反應的中間態分子中的電子躍遷到激發態，當電子從激發態回復到基態時，以發射光子的形式釋放出能量，這一現象稱為化學發光。由于方法學原理的不同，化學發光法較之酶聯免疫法敏感度和特異度高[9-10]。

本實驗運用酶聯免疫法和化學發光法分別測定2000份健康人血清甲胎蛋白含量，除有1例經用酶聯免疫法測不出，1例假陽性外，其余都相符。化學發光法敏感度和特異度高，但試劑成本較高。酶聯免疫法的敏感度雖無化學發光法高，且受其他因素干擾會產生假陽性，但其試劑成本較低，適合于大批量健康人群體檢篩查用。為節約成本，可先采用酶聯免疫法篩查，血清甲胎蛋白陽性的標本用化學發光法定量測定，保證排除假陽性。對影像學肝臟異常的人用酶聯免疫法測不出甲胎蛋白陽性的標本用化學發光法定量測定，保證不漏檢1例。

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[5]王羽.全國臨床檢驗操作規程[S].南京：東南大學出版社，2006：689.

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