老年肺結核患者血清血管活性腸肽的變化及臨床意義

楊曉敏 董德瓊 楊渝浩 (遵義醫學院附屬醫院呼吸一科，貴州 遵義 563000)

肺結核的發生與機體細胞免疫功能失衡有關，Th1/Th2應答平衡對結核病的進展、惡化、控制和預防起著決定作用〔1〕。老年肺結核由于患病率高、菌陽率高、死亡率高而治愈率低，已成為我國結核病控制難題。已有研究表明血管活性腸肽(VIP)參與機體免疫功能調節，并在Th細胞分化調節方面起著相當重要的作用。本研究旨在探討VIP在老年肺結核患者血清中的表達及其與Th1型細胞因子γ-干擾素(IFN-γ)和Th2型細胞因子白細胞介素(IL)-4的相關性。

1 對象與方法

1.1 對象 老年活動性肺結核患者40例，男性24例，女16例，年齡(66.5±11.7)歲，老年非活動性肺結核患者30例，男性16例，女14例，年齡(64.3±8.5)歲，中青年活動性肺結核患者30例，男性18例，女12例，年齡(40.5±10.7)歲，為2007年5月至2008年5月我院住院和門診患者。老年活動性肺結核患者經胸部CT診斷病灶在2個肺野內患者23例，男性13例，女10例，年齡(65.3±9.8)歲，病灶超過2個肺野或有空洞形成患者17例，男性11例，女6例，年齡(67.4±12.3)歲。活動性肺結核患者均為初治繼發型肺結核，診斷符合2001年中華醫學會結核病學分會制定的診斷標準〔2〕，并除外心、肝、腎等臟器并發癥及其感染，無糖尿病、腫瘤等免疫相關性或免疫性疾病，4個月內未用過糖皮質激素及免疫抑制劑，均抗結核治療前采血。非活動性肺結核患者診斷符合以下標準:①無明顯結核中毒癥狀;②CT顯示病灶已消失或處于穩定狀態;③痰抗酸染色涂片陰性3次以上。健康組，25例，為健康體檢者，年齡(68.8±7.8)歲。本研究經遵義醫學院附屬醫院倫理委員會批準，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 方法 抽空腹靜脈血8 ml，低溫以2 500 r/min離心15 min，分離血清放置-70℃保存，測定前取出復蘇至室溫。采用放射免疫分析(RIA)法測定VIP，試劑盒由第二軍醫大學神經生物學教研室提供，按照說明書的要求進行操作;采用酶聯免疫吸附測定(ELISA)法測定IFN-γ和IL-4，試劑盒由美國ADL公司提供，按照說明書的要求進行操作。

1.3 統計學處理 采用SPSS13.0統計軟件進行統計學分析，實驗數據以±s表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較用方差分析，兩組間相關性采用直線相關分析。

2 結果

2.1 老年肺結核患者血清VIP等細胞因子的測定結果 老年活動性肺結核組血清VIP、IL-4水平均明顯高于老年非活動性肺結核組及健康組，IFN-γ水平低于健康組(P＜0.01，P＜0.05)，見表1。老年活動性肺結核組IFN-γ水平與老年非活動性肺結核組差異無統計學意義。

2.2 病情嚴重程度與血清中VIP等細胞因子的關系 病灶超過2個肺野或有空洞形成的患者血清VIP、IL-4水平高于病灶范圍小的患者(均P＜0.05)，見表2。兩組IFN-γ水平差異無統計學意義。

2.3 不同年齡患者血清中VIP等細胞因子的比較 老年活動性肺結核組血清VIP、IL-4及IFN-γ水平均稍高于中青年活動性肺結核組，差異無統計學意義(均P＞0.05)，見表3。

表1 老年肺結核患者血清中VIP、IFN-γ及IL-4含量(ng/L，±s)

表1 老年肺結核患者血清中VIP、IFN-γ及IL-4含量(ng/L，±s)

與健康組比較:1)P＜0.01，2)P＜0.05;與老年非活動性肺結核組比較:3)P＜0.01

組別 n VIP IL-4 IFN-γ老年活動性肺結核組 40 36.8±15.31)3)28.8±12.21)3)43.5±18.22)20 16.5±7.0 14.3±6.8 60.7±23.1老年非活動性肺結核組 30 20.6±10.2 15.7±7.9 54.7±19.8健康組

表2 不同病情程度患者血清VIP、IFN-γ、IL-4水平比較(ng/L，±s)

表2 不同病情程度患者血清VIP、IFN-γ、IL-4水平比較(ng/L，±s)

與病灶在2個肺野內組比較:1)P＜0.05

組別 n VIP IL-4 IFN-γ病灶超過2個肺野或有空洞形成38.5±13.2病灶在2個肺野內17 40.8±17.31) 31.8±14.21)23 28.6±14.2 21.7±8.9 45.7±15.8

表3 不同年齡患者血清中VIP、IFN-γ、IL-4 水平(ng/L，±s)

表3 不同年齡患者血清中VIP、IFN-γ、IL-4 水平(ng/L，±s)

組別 n VIP IL-4 IFN-γ 40 36.8±15.3 28.8±12.2 43.5±18.2中青年活動性肺結核組老年活動性肺結核組30 34.6±11.8 24.3±11.9 35.3±19.4

2.4 血清VIP與IL-4、IFN-γ水平的相關性 老年活動性肺結核患者治療前VIP與IL-4呈正相關(r=0.672，P＜0.01)，與IFN-γ呈負相關(r=-0.406，P＜0.01)。老年非活動性肺結核組血清VIP與IL-4、IFN-γ之間均無相關性(r值分別為0.256、-0.240，均 P ＞0.05)，健康組血清 VIP 與 IL-4、IFN-γ 之間均無相關性(r值分別為0.204、-0.130，均P＞0.05)。

3 討論

老年人因機體退行性病變出現胸腺萎縮、骨髓造血干細胞減少，外周血免疫細胞數量及功能下降，免疫細胞之間相互調節失去平衡，導致機體免疫功能紊亂與衰退，使得老年人成為結核桿菌的易感人群。其中淋巴細胞亞群的免疫變化，尤其是老年人感染結核分枝桿菌后T淋巴細胞介導的免疫殺傷作用減退，成為老年人結核病高發的重要原因之一。本研究提示老年肺結核患者確實存在Th1/Th2失衡，Th1保護性免疫反應減弱，Th2反應增強，繼而出現遲發型變態反應，伴隨免疫病理損傷。研究還顯示病變范圍大或出現空洞患者Th2優勢表達明顯，表明Th2反應優勢使病灶趨于擴大和加重。

本研究結果顯示，老年活動性肺結核患者血清VIP水平顯著增高。VIP是體內重要的內分泌免疫調節肽，在特異性抗原刺激后優先由Th2細胞產生，通過作用于抗原遞呈細胞和Th細胞本身，調節Th細胞分化及Th1/Th2應答反應。VIP可優先誘導抗原遞呈細胞表面上的共刺激分子B7-2在靜止巨噬細胞和未成熟樹突狀細胞的表達，促進Th2型免疫應答〔3，4〕，并可維持Th2效應細胞的存活和記憶性Th2細胞的產生，通過抑制顆粒酶及Fas1配體的表達使Th2型細胞免遭克隆清除〔5〕。另一方面，IL-12是Th1細胞分化的主要驅動因素，VIP通過抑制活化巨噬細胞分泌IL-12，并直接干涉T細胞IL-12的 JAK2/STAT4信號通路，抑制Th1分化〔6〕。在肺結核病變時Th2優勢表達可能促進VIP的分泌，導致血清中VIP水平增高。

特異性的細胞因子在Th細胞分化過程中被認為是最主要的因素，VIP通過多種途徑影響IFN-γ、IL-4等細胞因子的水平，以促進Th2細胞的分化，抑制Th1細胞增殖。Voice等〔7〕研究發現VIP通過血管活性腸肽受體2受體顯著上調IL-4轉錄因子c-Maf和Junb水平，IL-4的高表達導致Th2細胞免疫的應答。VIP抑制Th1特異性轉錄因子T-bet，使IFN-γ基因轉錄失活，影響機體IFN-γ水平，Th細胞分化向Th2方向偏移〔8〕。本研究結果提示在老年活動性肺結核患者VIP水平可能是誘發IFN-γ降低而IL-4增高的重要因素，進而導致了機體的Th1/Th2失衡。

本研究結果提示不同年齡段活動性肺結核患者均可能存在Th1/Th2失衡，導致細胞免疫功能紊亂。老年活動性肺結核患者肺部病變越重，則細胞免疫功能改變越明顯，VIP水平增高越顯著。隨著結核病變的控制好轉，Th1/Th2失衡糾正，細胞免疫功能逐漸恢復。因此，對于老年肺結核患者血清VIP水平的檢測可能對評價病變嚴重程度、活動性以及判斷其轉歸具有一定的參考意義。

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4 Delgado M，Martinez C，Gomariz RP，et al.Vasoactive intestinal peptide and pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide stimulate the induction of Th2 response by up-regulating B7.2 expression〔J〕.J Immunol，1999;163(7):3629-35.

5 Sharma V，Delgado M，Ganea D.Granzyme B，a new player in activationinduced cell death，is down-regulated by vasoactive intestinal peptide in Th2 but not Th1 effectors〔J〕.J Immunol，2006;176(1):97-110.

6 Liu L，Yen JH，Ganea D.A novel VIP signaling pathway in T cells cAMP--＞ protein tyrosine phosphatase(SHP-2)-＞ JAK2/STAT4--＞Th1 differentiation〔J〕.Peptides，2007;28(9):1814-24.

7 Voice J，Donnelly S，Dorsam G，et al.C-Maf and JunB mediation of Th2 differentiation induced by the Type 2 G Protein-Coupled Receptor(VPAC2)for vasoactive intestinal peptide〔J〕.J Immunol，2004;172(12):7289-96.

8 Voice JK，Grinninger C，Kong Y，et al.Roles of vasoactive intestinal peptide(VIP)in the expression of different immune phenotypes by wild-type mice and T cell-targeted type Ⅱ VIP receptor transgenic mice〔J〕.J Immunol，2003;170(1):308-14.