人參皂苷Rg1對小鼠腦缺血再灌注后腦組織損傷及Nrf2/HO-1途徑的影響*

吳 露， 黃小平， 鄧常清， 嚴 杰， 張秋雁

(1湖南中醫藥大學附屬第二中西醫結合醫院心血管科，湖南 瀏陽 410300； 2湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410208)

人參皂苷Rg1對小鼠腦缺血再灌注后腦組織損傷及Nrf2/HO-1途徑的影響*

吳 露1， 黃小平2△， 鄧常清2， 嚴 杰2， 張秋雁2

(1湖南中醫藥大學附屬第二中西醫結合醫院心血管科，湖南 瀏陽 410300；2湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410208)

目的觀察人參皂苷Rg1對小鼠腦缺血再灌注后腦組織損傷的影響，并從核因子E2相關因子2(Nrf2)/血紅素加氧酶1(HO-1)信號通路研究其作用機制。方法C57BL/6小鼠隨機分組，連續給藥3 d，末次給藥1 h后，結扎雙側頸總動脈造成腦缺血20 min，再灌注24 h。以具有抗氧化應激損傷作用、治療缺血性腦血管病有效的藥物依達拉奉作為陽性對照藥。取腦組織行海馬CA1區神經細胞病理學測定，RT-PCR法測定Nrf2和HO-1 mRNA表達，Western bloting測定腦組織胞核、胞漿Nrf2和全細胞HO-1蛋白含量。結果(1)缺血再灌注24 h后，神經細胞出現病理性損傷，細胞存活率顯著降低。人參皂苷Rg1和依達拉奉可使神經細胞損傷明顯減輕，細胞存活率顯著升高。(2)腦缺血再灌注24 h，腦組織Nrf2 mRNA和HO-1 mRNA表達增強，同時腦組織胞核和胞漿中Nrf2蛋白含量增加，核轉位率升高，HO-1蛋白表達增強。人參皂苷Rg1和依達拉奉均能降低腦組織胞漿Nrf2蛋白含量，升高胞核Nrf2含量，使Nrf2核轉位率升高，并使腦組織HO-1 mRNA和蛋白表達顯著增加。依達拉奉的作用強于人參皂苷Rg1，但兩藥對腦組織Nrf2 mRNA表達無顯著影響。結論人參皂苷Rg1具有抗腦缺血再灌注損傷的作用，其機制可能與激活Nrf2/HO-1信號途徑、促進Nrf2合成和核轉位、從而促進下游抗氧化蛋白HO-1的表達有關。

腦缺血； 再灌注損傷； 人參皂苷Rg1； 氧化性應激； 核因子E2相關因子2； 血紅素加氧酶1

Figure 1. Chemical structure of ginsenoside Rg1.

圖1人參皂苷Rg1化學結構圖

氧化應激損傷在腦缺血再灌注損傷中具有重要的意義[3]。腦缺血再灌注后，腦組織產生大量的自由基對神經細胞具有損傷作用。抑制腦缺血后氧化應激反應是防治缺血性腦損傷的重要手段。近年來研究表明，核因子E2 相關因子2(nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2)/血紅素加氧酶1(heme oxyge-nase 1，HO-1)信號途徑在抗氧化損傷中具有重要的作用[11]。因此，本文研究了三七的主要成分人參皂苷Rg1抗腦缺血再灌注后腦組織損傷的作用，并從Nrf2/HO-1途徑研究了其作用機制。

材 料 和 方 法

1材料

1.1動物 SPF級雄性C57BL/6小鼠，體重18～22 g，由湖南維通利華實驗動物有限公司提供。動物合格證號為SCXK(湘)2009-0004。飼養于SPF級動物實驗室，濕度45%、室溫25 ℃的環境。

1.2受試藥物 人參皂苷Rg1購自成都曼思特生物科技有限公司，純度≥98%，用時以5%羧甲基纖維素鈉配成混懸液備用。依達拉奉(3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one)，南京先聲東元制藥有限公司生產，規格10 mg/5 mL，以生理鹽水配成400 mg/L溶液。

1.3試劑 全蛋白提取試劑盒KGP2100購自南京凱基生物科技發展有限公司；細胞核和細胞漿蛋白提取試劑盒、磷酸酶抑制劑復合物Ⅲ和改良型BCA蛋白質定量檢測試劑盒購自上海生工生物工程股份有限公司；動物組織總RNA提取試劑盒購自天根生物試劑有限公司；Reverse Transcription System逆轉錄試劑盒購自Promega；兔抗小鼠β-actin 多克隆抗體和兔抗小鼠HO-1多克隆抗體和兔抗小鼠Nrf2多克隆抗體購自Santa Cruz，過氧化物酶標記的羊抗兔IgG購自北京中杉生物技術有限公司。

2方法

在傳統教學中，教師在備課時更多的考慮是怎怎樣才能講的到位，怎樣才能讓學生聽明白聽得懂。而合作學習的理論認為，教師備課時應該更多的考慮如何使學生更加主動的積極的參與學習，使學生學得更多更好。合作學習的實踐成果是由學習目標和學習內容的特點決定的。所以，教師精心選擇適用于合作學習的學習內容就顯得尤為重要。要使合作學習進行得有價值有成果，教師首先就應該要吃透教材，在深入理解教材的基礎上制定出具體的、適合學生的年齡特點和認知結構的學習內容和學習任務。

2.1腦缺血模型制作[4]乙醚麻醉小鼠，仰臥位固定，在頸部正中做1 cm切口，暴露頸總動脈及伴行的迷走神經，分離并夾閉雙側頸總動脈造成腦缺血，20 min后恢復血流再灌注24 h。假手術組也同樣進行手術，但不進行腦缺血和再灌注。再灌注24 h后，將小鼠迅速斷頭，取出腦組織置于冰上，去除小腦及腦干后做相應指標檢測。

2.2動物分組和給藥方法 將小鼠隨機分為4組：假手術組、腦缺血再灌注組(模型組)、人參皂苷Rg1(50 mg/kg)+腦缺血再灌注組(人參皂Rg1組)和依達拉奉(4 mg/kg)+腦缺血再灌注組(依達拉奉組)。依達拉奉組腹腔注射給藥，每天給藥2次，人參皂苷Rg1組灌胃給藥，假手術組和模型組灌胃給予0.5%羧甲基纖維素鈉，給藥體積均為10 L/kg，每天給藥1次。連續3 d，第3天末給藥1 h后造模。再灌注期間同前給藥。

2.3海馬CA1區神經細胞存活率測定 取視交叉后2 cm腦組織，4%多聚甲醛固定，常規HE染色，計數海馬CA1區神經細胞。正常神經細胞胞膜完整、核仁清晰，蘇木素染色均勻。損傷神經細胞胞核固縮或溶解，胞漿出現“嗜伊紅”染色或正常細胞結構消失甚至出現空泡。每張切片在×400視野下取海馬CA1區5個視野進行測定，計算正常細胞占細胞總數的百分比，即得神經細胞存活率。取5個視野平均值進行統計分析。

2.4RT-PCR法測定腦組織Nrf2和HO-1 mRNA表達 取右腦視交叉前組織，以Trizol法提取腦組織總RNA，測定A260/A280為1.8～2.0，純度>90%。逆轉錄成cDNA，以此為模板進行PCR擴增。Nrf2引物：上游序列5’-ATCAAAAAGCCCCATTCACA-3’，下游序列5’-CCGCCTTTTCAGTAGATGGA-3’，擴增片段為364 bp。HO-1引物：上游序列5’-AGCCCCACCAAGTTCAAACA-3’，下游序列5’-TGCCAACAGGAAGCTGAGAG-3’，擴增片段321 bp。β-actin引物：上游序列5’-GAGACCTTCAACACCCCAGC-3’，下游序列5’-CCACAGGATTCCATACCCAA-3’，擴增片段446 bp。按PCR試劑盒操作，反應體系 20 μL，擴增條件為：95 ℃ 2 min，94 ℃ 45 s，60 ℃ 30 s,72 ℃ 2 min，35個循環，72 ℃ 10 min。取擴增產物進行1%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統對目的條帶進行掃描，Image-Pro Plus圖像分析軟件測定目的條帶的相對吸光度(A)，以目的基因條帶的A/Aβ-actin作為目的基因表達的相對強度，以相對表達強度進行分析。

2.5Western bloting測定腦組織Nrf2和HO-1蛋白表達 取大腦組織，按說明書分別進行全細胞、胞核和胞漿蛋白的提取，以改良型BCA蛋白質定量法檢測蛋白質含量，確定全細胞蛋白質上樣總量110 μg，細胞漿蛋白質上樣總量110 μg，細胞核蛋白質上樣總量50 μg。取蛋白樣品與1/3量的4×SDS凝膠上樣緩沖液混合使上樣總體積為20 μL，煮沸變性5～10 min。SDS-PAGE 分離2～3 h，300 mA恒流1 h濕轉至PVDF膜上，用含5%脫脂奶粉的TBS溶液封閉3 h，TBST溶液洗3次，每次10 min。再分別與兔抗小鼠β-actin抗體(1∶1 000)、兔抗小鼠Nrf2抗體(1∶500)和兔抗小鼠HO-1抗體(1∶500)溶液3 mL混合，4 ℃靜置過夜，TBST溶液洗3次，每次15 min。然后與辣根過氧化物酶(HRP)標記的Ⅱ抗(1∶1 000)5～8 mL室溫孵育1 h，TBST洗膜3次。取增強型HRP-DAB底物顯色試劑盒進行顯影，染色為藍紫色。將PVDF膜掃描，Image Pro-Plus 6.0圖像分析軟件測定目的條帶的累積吸光度(integrated absorbance，IA), 以總蛋白中的β-actin為內參照，以目的條帶IA值與總蛋白β-actinIA值的比值作為該目的蛋白的相對表達量。

3統計學處理

數據用均數±標準差(mean±SD)表示，運用SPSS 16.0統計軟件分析。先將各組數據進行方差齊性檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，方差齊者用LSD檢驗。方差不齊時先將數據轉換后使之方差齊，再行分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1人參皂苷Rg1對腦組織神經細胞損傷的影響

再灌注24 h，假手術組幾乎未見神經細胞損傷，腦組織細胞結構層次清楚，形態正常。模型組腦組織細胞排列紊亂，細胞腫脹明顯，部分細胞出現嗜酸性變性或核固縮改變，細胞存活率顯著低于假手術組(P<0.01)。與模型組比較，各藥物組神經細胞損傷均減輕，細胞存活率均顯著升高(P<0.01)。人參皂苷Rg1 組與依達拉奉組比較無顯著差異(均P>0.05)，見圖2、表1。

Figure 2. Effect of ginsenoside Rg1 on brain nerve cell injury in hippocampal CA1 region (HE staining, ×400).1: sham; 2: cerebral I/R; 3: ginsenoside Rg1+cerebral I/R； 4: edaravone+cerebral I/R.

圖2人參皂苷Rg1對腦組織海馬CA1區神經細胞損傷的影響

表1人參皂苷Rg1對海馬CA1區神經細胞存活率的影響

Table 1. Effect of ginsenoside Rg1 on survival rate of nerve cells in hippocampal CA1 region (%.Mean±SD.n=8)

GroupSurvivalrateofnervecellsSham92.0±3.7CerebralI/R47.1±8.3**GinsenosideRg1+cerebralI/R77.0±6.3△△Edaravone+cerebralI/R84.8±5.6△△

**P<0.01vssham;△△P<0.01vscerebral I/R.

2人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2、HO-1mRNA表達的影響

與假手術組比較，模型組、人參皂苷Rg1組和依達拉奉組Nrf2 mRNA表達均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較，各給藥組Nrf2 mRNA表達無顯著變化(均P>0.05)，見圖3、表2。

與假手術組比較，模型組、人參皂苷Rg1組和依達拉奉組HO-1 mRNA表達均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較，人參皂苷Rg1組和依達拉奉組HO-1 mRNA的表達均顯著升高(P<0.01)。依達拉奉組HO-1 mRNA的表達顯著高于人參皂苷Rg1組(P<0.05)，見圖3、表2。

Figure 3. Effects of ginsenoside Rg1 on the expression of Nrf2 and HO-1 mRNA in brain tissues.1： Sham;2： cerebral I/R; 3： ginsenoside Rg1+cerebral I/R;4： edaravone+cerebral I/R.

圖3人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2、HO-1mRNA表達的影響

表2 人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2和HO-1 mRNA表達的影響

◇P<0.05,◇◇P<0.01vssham;△△P<0.01vscerebral I/R;▲P<0.05vsginsenoside Rg1+cerebral I/R.

3人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2和HO-1蛋白表達的影響

與假手術組比較，模型組胞漿和胞核Nrf2蛋白表達顯著升高(P<0.01)，Nrf2核轉位率顯著增加(P<0.01)。與模型組比較，人參皂苷Rg1組及依達拉奉組胞漿Nrf2蛋白表達量顯著降低(P<0.05或P<0.01)，胞核Nrf2蛋白表達量顯著升高(P<0.01)，Nrf2核轉位率顯著增加(P<0.01)。依達拉奉組胞漿Nrf2蛋白含量顯著低于人參皂苷Rg1組(P<0.05)，胞核Nrf2蛋白含量顯著高于人參皂苷Rg1組(P<0.05)，Nrf2核轉位率顯著高于人參皂苷Rg1組(P<0.05)，見圖4、表3。

與假手術組比較，模型組HO-1蛋白表達量顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，人參皂苷Rg1組及依達拉奉組HO-1蛋白表達量均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。依達拉奉組HO-1蛋白表達量顯著高于人參皂苷Rg1組(P<0.05)，見圖4、表3。

Figure 4. Effects of ginsenoside Rg1 on the protein expression of Nrf2 and HO-1 in brain tissues.1: sham; 2: cerebral I/R; 3: ginsenoside Rg1+cerebral I/R;4: edaravone+cerebral I/R.

圖4人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2和HO-1蛋白表達的影響

討 論

建立穩定的動物模型對研究腦缺血再灌注損傷及保護機制有著重要的意義。Yang等[4]經過對比研究后發現，C57BL/6 小鼠由于其先天椎動脈后交通支(Willis環)發育不全，是非常好的研究全腦缺血的動物模型，只要夾閉雙側頸總動脈即可造成全腦缺血。

表3 人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2和HO-1 蛋白表達的影響

◇◇P<0.01vssham;△P<0.05,△△P<0.01vscerebral I/R;▲P<0.05vsginsenoside Rg1+cerebral I/R.

腦缺血時，特別是再灌注時，自由基大量產生，導致腦組織氧化損傷。氧自由基多攻擊不飽和脂肪酸，引發脂質過氧化反應，導致細胞損傷；NO也是一種自由基，生理量的NO對腦具有保護作用，而高濃度的NO可抑制腦組織能量代謝，引起DNA損傷，并抑制DNA的合成和修復，誘導細胞凋亡[5]。正常情況下，體內還存在天然的自由基清除系統，如谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)等。腦缺血后由于自由基生成增加，體內抗氧化物質被消耗，使SOD、GSH-Px、GSH 等顯著下降[6]。

本研究表明，腦缺血再灌注24 h后，海馬CA1區神經細胞發生水腫、變性和死亡，存活率降低。人參皂苷Rg1和依達拉奉均可抑制海馬CA1區神經細胞存活率的降低，提示人參皂苷Rg1可抑制腦缺血再灌注后神經細胞的損傷。

Nrf2屬于亮氨酸拉鏈家族的調節抗氧化應激反應的重要轉錄因子，Kelch樣ECH相關蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1)是其特異性受體。正常情況下，在胞漿內Keap1與Nrf2形成復合物以抑制Nrf2 的活性。在氧化應激等情況下，Keap1與Nrf2 解離，Nrf2發生核轉位進入細胞核，與抗氧化反應元件(antioxidant response elements，ARE)結合，啟動ARE 調控的第Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶基因表達，增強細胞對氧化應激和親核化合物的抗性[7]。ARE 調控的抗氧化蛋白有HO-1、谷胱甘肽S-轉移酶(glutathioneS-transferase,GST)、GSH等，這些酶能夠保護機體免受活性氧(reactive oxygen species, ROS)的侵害。在動物實驗、細胞體外實驗和Nrf2基因敲除實驗均已證實，Nrf2基因剔除小鼠的腦缺血損傷程度加重[8-9], 激活Keap1/Nrf2/ARE 通路，促進HO-1 等蛋白的表達，減輕腦缺血性損傷[10-11]。

HO屬微粒體酶系，是血紅素分解代謝的限速酶。HO有3種同工酶，分別是HO-1、HO-2和HO-3。其中HO-1為誘導型酶，參與血紅素代謝，在腦內廣泛表達，并在短暫腦缺血時表達升高[12]。用HO-1誘導劑或轉基因技術使組織中HO-1表達增加可增強組織的抗氧化損傷能力，抑制炎癥反應，減輕缺血/再灌注損傷[13]。研究顯示，HO-1表達上調增加神經元對氧化應激的耐受性[14]。

本研究表明，腦缺血再灌注后，腦組織Nrf2 mRNA和HO-1 mRNA表達增強，同時胞核和胞漿中Nrf2蛋白含量、核轉位率增加，HO-1蛋白表達增強，表明腦缺血后，為適應缺血缺氧等應激刺激，腦組織Nrf2 mRNA和蛋白表達增加，激活Nrf2/HO-1途徑，Nrf2與Keap1解離，前者發生核轉位進入胞核，與ARE 結合，啟動了下游抗氧化蛋白HO-1等的表達，使HO-1蛋白合成增加，從而對抗缺血缺氧導致的腦組織損傷，這是機體產生的一種保護性反應。人參皂苷Rg1和依達拉奉均能使胞漿Nrf2蛋白含量降低而胞核含量升高，Nrf2核轉位率增加，HO-1表達增加。但各給藥組腦組織Nrf2 mRNA表達未見明顯增強，表明各藥物抗缺血性腦損傷的作用與促進Nrf2蛋白的核轉位有關，即人參皂苷Rg1和依達拉奉可進一步激活Nrf2/ARE信號途徑，促進Nrf2蛋白的合成和核轉位，從而促進了抗氧化物質HO-1 mRNA表達及蛋白合成，發揮抗氧化損傷作用。而依達拉奉對Nrf2/ARE信號途徑的激活作用強于人參皂苷Rg1。

[1] Li H, Deng CQ, Chen BY, et al. Total saponins ofPanaxNotoginsengmodulate the expression of caspases and atte-nuate apoptosis in rats following focal cerebral ischemia-reperfusion[J]. J Ethnopharmacol, 2009,121(3): 412-418

[2] 唐映紅, 黃小平, 譚 華, 等. 三七總皂苷對腦缺血再灌注后神經元凋亡及凋亡線粒體途徑c-Jun氨基末端激酶表達的影響[J]. 中國實驗方劑學雜志, 2010, 16 (16): 129-132.

[3] Rodrigo J, Fernandez AP, Serrano J, et al. The role of free radicals in cerebral hypoxia and ischemia[J]. Free Radic Biol Med, 2005, 39(1): 26-50.

[4] Yang G, Kitagawa K, Matsushita K, et al. C57BL/6 strain is most susceptible to cerebral ischemia following bilateral common carotid occlusion among seven mouse strains:selective neuronal death in the murine transient forebrain ischemia[J]. Brain Res, 1997, 752(1-2): 209-218.

[5] 陳慎仁，陳林興，陳少如. 誘導型一氧化氮合酶與疾病[J]. 中國病理生理雜志，2000, 16(2): 179-183.

[6] Nishi T, Maier CM, Hayashi T, et al. Superoxide dismutase 1 overexpression reduces MCP-1 and MIP-1 alpha expression after transient focal cerebral ischemia[J]. J Cereb Blood Flow Metab, 2005, 25(10): 1312-1324.

[7] Motohashi H, Yamamoto M. Nrf2-Keap1 defines a physiologically important stress response mechanism[J]. Trends Mol Med, 2004, 10(11): 549-557.

[8] Shih AY, Li P, Murphy TH. A small-molecule-inducible Nrf2-mediated antioxidant response provides effective prophylanxis against cerebral ischemiainvivo[J]. J Neurosci, 2005, 25(44): 10321-10335.

[9] Shah ZA, Li RC, Thimmulappa RK, et al. Role of reactive oxygen species in modulation of Nrf2 following ischemic reperfusion injury[J]. Neuroscience, 2007, 147(1): 53-59.

[10] Yang C, Zhang X, Fan H, et al. Curcumin upregulates transcription factor NRF2, HO-1 espression and protects rat brains against focal ischemia[J]. Brain Res, 2009, 1282: 133-141.

[11] Son TG, Camandola S, Arumugam TV, et al. Plumbagin, a novel Nrf2/ARE activator, protects against cerebral ischemia[J]. J Neurochem, 2010, 112(5): 1316-1326.

[12] Schipper HM, Song W, Zukor H, et al. Heme oxygenase-I and nuerodegeneration: expanding frontiers of engagement [J]. J Neurochem, 2009,110(2): 469-485.

[13] Li Volti G, Sorrenti V, Murabito P, et al. Pharmacological induction of heme oxygenase-1 inhibits iNOS and oxidative stress in renal ischemia-reperfusion injury [J]. Transplant Proc, 2007, 39(10): 2986-2991．

[14] Li Q, Li J, Zhang L, et al. Preconditioning with hyperbaric oxygen induces tolerance against oxidative injury via increased expression of heme oxygenase-1 in primary cultured spinal cord neurons[J]. Life Sci, 2007, 80(12): 1087-1093．

撤稿聲明

因署名爭議，作者提出撤銷發表在本刊2005年第9期的2篇文章，即：

急性心肌梗死后輔助性T細胞功能失衡的意義[J]. 中國病理生理雜志, 2005, 21(9):1691-1695.

急性心肌梗死大鼠淋巴細胞體外增殖及殺傷效應的觀察[J]. 中國病理生理雜志, 2005, 21(9):1848-1850.

特此聲明。

《中國病理生理雜志》編輯部

2013年11月1日

EffectsofginsenosideRg1ofPanaxnotoginsengonbraintissueinjuryandNrf2/HO-1signalpathwayaftercerebralischemia/reperfusioninmice

WU Lu1, HUANG Xiao-ping2, DENG Chang-qing2, YAN Jie2, ZHANG Qiu-yan2

(1DepartmentofCardiology,theSecondAffiliatedHospitalofIntegratedTraditionalandWesternMedicine,HunanUniversityofChineseMedicine,Liuyang410300,China;2HunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410208,China.E-mail:jialeliu@hotmail.com)

AIM: To observe the effects of ginsenoside Rg1 ofPanaxnotoginsengon brain tissue injury after mouse cerebral ischemia/reperfusion(I/R), and to explore the mechanisms involving nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2)/heme oxygenase 1 (HO-1) signal pathway.METHODSC57BL/6 mice were randomly divided into sham group, cerebral I/R group, ginsenoside Rg1+cerebral I/R group and edaravone+cerebral I/R group. Ginsenoside Rg1 was successively administered for 3 d. One hour after final administration, bilateral common carotid arteries were ligated to induce brain tissue injury for 20 min, and then reperfusion for 24 h. Edaravone, a drug for anti-oxidative stress injury in the treatment of ischemic cerebro-vascular disease, was used as a positive control. The brain tissues were obtained to determine the neural cellular pathology in hippocampal CA1 region. The mRNA expression of Nrf2 and HO-1 was detected by RT-PCR. The protein levels of Nrf2 in the nucleus and cytoplasm and HO-1 in the whole cells in the brain tissues were measured by Western blotting.RESULTSAfter ischemia/reperfusion for 24 h, the pathological injury in the neural cells was obvious, and the cell survival rate decreased. Ginsenoside Rg1 and edaravone attenuated the neural cell injury, and significantly increased the cell survival rate. After ischemia/reperfusion for 24 h, the mRNA expression of Nrf2 and HO-1 significantly increased in the brain tissues. The protein levels of Nrf2 in the nucleus and cytoplasm in the brain tissues were increased, the nuclear translocaition rate and the protein expression of HO-1 also increased. Ginsenoside Rg1 and edaravone both decreased the protein levels of Nrf2 in the cytoplasm of the brain tissues, increased that in the nucleus, and also increased Nrf2 nuclear translocation rate and the protein expression of HO-1. The effect of edaravone was higher than that of ginsenoside Rg1, but they had no significant effect on the mRNA expression of Nrf2 in the brain tissues.CONCLUSIONGinsenoside Rg1 has the effect of anti-brain tissue injury on cerebral ischemia/reperfusion. The mechanisms may be related to activating the Nrf2/HO-1 signal pathway, promoting Nrf2 synthesis and nuclear translocation, thus promoting the expression of downstream antioxidant protein HO-1.

Brain ischemia; Reperfusion injury; Ginsenoside Rg1; Oxidative stress; Nuclear factor E2-related factor 2; Heme oxygenase 1

R285.5

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.11.027

1000- 4718(2013)11- 2066- 06

2013- 06- 18

2013- 09- 09

國家自然科學基金資助項目(No. 81102557)；教育部高等學校博士學科點專項科研基金資助項目(No. 20104323110001)；湖南省高校創新平臺開放基金資助項目(No. 11K050)；湖南省中醫藥管理局重點項目(No.201301)；湖南省教育廳項目(No. 11C0963)；湖南省高?？萍紕撔聢F隊支持計劃項目

△通訊作者Tel: 0731-88458201; E-mail: jialeliu@hotmail.com