丁苯酞注射液對急性腦梗死患者血清NO和NOS表達及臨床療效的影響

劉昌云 陳枝挺 黃華品 (福建醫科大學附屬協和醫院神經內科，福建 福州 350001)

腦梗死約占腦血管病的80%，大量的研究證實丁苯酞對于腦梗死具有良好的效果，并且發現其可能降低花生四烯酸含量，抑制谷氨酸釋放，降低細胞內鈣濃度，提高血管內皮一氧化氮(NO)的水平，抑制自由基和提高抗氧化酶活性等機制發揮腦血管保護作用。近年來，丁苯酞對腦梗死區域中NO和一氧化氮合酶(NOS)的調節機制逐步成為研究熱點〔1〕。本文探討丁苯酞注射液對急性腦梗死患者血清NO和NOS表達及臨床療效的影響。

1 對象與方法

1.1 對象 我院2010年1月至2012年10月急性腦梗死患者76例，均符合全國第四屆腦血管病會議制訂的診斷標準〔2〕，并經腦CT或MRI證實。入選標準:①初次發病，發病距離治療的時間6～72 h;②美國國立衛生院神經功能缺損評分(NIHSS)4～20分;③均行頸動脈及腦動脈CTA檢查，病因為大動脈粥樣硬化。排除標準:①心源性栓塞;②小動脈病變;③嚴重肝腎功能不全;⑤對阿司匹林過敏等藥物過敏。隨機分為常規治療組(常規組)36例，男20例，女16例;年齡45～76歲，平均61.6歲;丁苯酞注射液治療組(丁苯酞組)40例，男22例，女18例;年齡45～79歲，平均62.5歲。兩組患者的性別、年齡、病程、血尿便常規、血脂、血尿酸、血液流變學指標、NIHSS評分、日常生活活動能力量表(ADL)評分等差異均無統計學意義，具有可比性。

1.2 給藥方法 兩組均常規給予奧拉西坦靜滴6 g，每天1次，共用14 d，依達拉奉30 mg靜滴，每天2次，共14 d。常規拜阿司匹林、阿托伐他汀鈣(立普妥)治療及康復治療，并根據病情必要時給予護胃、脫水、抗感染等治療。丁苯酞組給予丁苯酞注射液滴注100 mg，每天2次，共14 d。常規組給予生理鹽水100 ml滴注，每天2次，共14 d。

1.3 療效評估 分別采用NIHSS和ADL評分，藥物治療前和治療后第14天及3個月，各評分一次。監測血尿常規、血糖、血脂、肝腎功能和心電圖等，詳細記錄不良反應。臨床療效評定參照腦卒中患者NIHSS標準及臨床療效評定標準進行:①基本痊愈:功能缺損評分減少90% ～100%，病殘程度0級;②顯著進步:減少46% ～89%，病殘程度1～3級;③進步:減少18% ～40%;④無變化:減少或增加18%以內;⑤惡化:增加18%以上;⑥死亡。

1.4 標本采集及NO和NOS 分別在發病后用藥前和治療后1 d(第15天)采集靜脈血5 ml各2份。NO含量和NOS活性檢測均采用南京建成生物工程研究所提供的NO含量和NOS活性測試盒，NO含量采用硝酸還原酶法測定，以NO-2/NO-3濃度間接反映血清 NO水平。取兩組各1份血標本，4 000 r/min離心10 min，取上清液用于NO含量測定，操作步驟按試劑盒說明書進行，NO含量以U/ml表示;取兩組各1份血標本，4 000 r/min離心10 min，取上清液直接測定NOS活性，操作步驟按試劑盒說明書進行，NOS活性以μmol/L表示。

1.5 統計學分析 采用SPSS13.0統計軟件進行t和χ2檢驗。

2 結果

2.1 NIHSS評分、ADL評分的比較 治療前，常規組和丁苯酞組的NIHSS評分和ADL評分無顯著差異(P＞0.05)。治療后14 d，常規組和丁苯酞組的NIHSS評分、ADL評分及基本痊愈和顯著進步的臨床療效組間無顯著差異(P＞0.05)。治療后90 d，丁苯酞組的NIHSS評分、ADL評分及基本痊愈和顯著進步的臨床療效均優于常規組(P＜0.05)。見表1。

2.2 NO含量和NOS活性的比較 治療前，常規組和丁苯酞組的NO含量和NOS活性無顯著差異 (P＞0.05)。治療后14 d，丁苯酞組的NO含量和NOS活性均低于常規組 (P＜0.05)。治療后90 d，常規組和丁苯酞組的NO含量和NOS活性的組間差異也無統計學意義 (P＞0.05)。見表1。

表1 兩組治療前后NIHSS評分、ADL評分、NO含量和NOS活性的變化(s)

表1 兩組治療前后NIHSS評分、ADL評分、NO含量和NOS活性的變化(s)

與常規組比較:1)P＜0.05

指標 常規組(n=36)治療前 治療14 d 治療90 d 90 d NIHSS(分)7.3±2.7 5.2±1.3 4.2±0.8 7.8±2.9 5.4±1.5 2.8±0.61)丁苯酞組(n=40)治療前 治療14 d 治療ADL(分)23.4±4.3 53.8±10.2 61.8±12.8 21.5±5.3 58.3±13.6 73.5±16.71)NO(U/ml)64.5±7.3 53.7±6.4 33.7±3.4 65.8±9.7 36.7±3.91) 29.7±3.2 NOS(μmol/L)35.7±6.3 30.3±3.9 28.3±3.9 34.2±6.8 14.6±2.91) 27.6±2.9基本痊愈和顯著進步(n)－ 4 11 － 8 251)

3 討論

左旋丁苯酞又名芹菜甲素，是從芹菜種籽中分離出的有效成分，根據其結構式，其異構體右旋丁苯酞被合成出來。之后它們的混合物消旋丁苯酞(NBP)作為臨床藥物被發展起來〔3〕;于2002年11月正式通過國家食品藥品監督管理局的審批成為治療腦卒中的臨床藥物，適應于腦梗死急性期治療〔4〕。它可以通過多種機制發揮腦血管保護作用，其中抗氧化作用近年來尤其被研究工作者重視，并且在肌萎縮側索硬化和帕金森病的動物模型中已經證實其存在保護作用〔5，6〕。缺血性腦卒中病理生理機制復雜，其中NO和NOS是腦缺血神經損傷的關鍵因素之一〔7～9〕。NO是機體內重要的信使分子和效應分子，為神經傳遞、血管舒張、神經功能內源性介質，與神經系統生理和病理過程關系密切，作為NO生物合成限速酶的NO合酶(NOS)，在腦缺血中發揮神經元保護和神經毒性的雙重作用。國內有學者觀察原代培養的胎鼠皮層神經細胞外液的NO水平，發現d-NBP能使低糖低氧條件下皮層神經細胞外液NO水平明顯升高〔10〕。但是對于缺氧狀態下的內皮細胞，NBP則可以明顯抑制iNOS的激活，減少NO的生成，從而發揮對內皮細胞的保護作用〔11〕。這說明急性缺血缺氧條件下，丁苯酞對不同細胞的NO和iNOS的調節作用并不完全相同。

本研究說明丁苯酞對于促進神經恢復確實存在積極的作用。丁苯酞在整體水平降低了NO相關性氧化應激對患者神經功能的影響。丁苯酞對NO及NOS的影響主要限于急性期，也提示腦梗死急性期治療的重要性。綜上所述，NO和NOS在腦缺血神經損傷中起著重要的作用，丁苯酞可能在整體上降低缺血灶中NO含量和NOS活性從而發揮神經血管的保護作用，促進神經功能恢復。

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3 Peng Y，Zeng X，Feng Y，et al.Antiplatelet and antithrombotic activity of L-3-n-butylphahalide in rats〔J〕.J Cardiovasc Pharmacol，2004;43:876-81.

4 崔麗英，劉秀琴，朱以誠，等.Dl-3-正丁基苯酞治療中度急性缺血性腦卒中的多中心、隨機、雙盲和安慰劑對照研究〔J〕.中華神經科雜志，2005;38(4):251-4.

5 Xiong N，Huang J，Chen C，et al.Dl-3-n-butylphthalide，a natural antioxidant，protects dopamine neurons in rotenone models for Parkinson's disease〔J〕.Neurobiol Aging，2012;33:1777-91.

6 Feng XH，Yuan W，Peng Y，et al.Therapeutic effects of dl-3-n-butylphthalide in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis〔J〕.Chin Med J，2012;125:1760-6.

7 Stoyanova II，Lazarov NE.Localization of nitric oxide synthase in rat trigeminal primary afferent neurons using NADPH2 diaphorase histochemistry〔J〕.J Mol Histol，2005;36:187-93.

8 HenekaMT，Feinstein DL.Expression and function of inducible nitric oxide synthase in neurons〔J〕.J Neuroimmunol，2001;114:8-18.

9 Holopainen IE.Organotypic hippocampal slice cultures:a model system to study basic cellular and molecular mechanisms of neuronal cell death，neuroprotection，and synaptic plasticity〔J〕.Neurochem Res，2005;30:1521-8.

10 閻超華，馮亦璞.丁基苯酞對原代培養胎大鼠皮層神經細胞外液NO及胞漿內cGMP水平的影響〔J〕.藥學學報，1998;33(6):418-23.

11 Gerald DE，Berra YM，Frapart DA，et al.JunD reduces tumor angiogenesis by protecting cell from oxidative stress〔J〕.Cell，2004;118:781-94.