樂胃飲顆粒制備工藝研究

[摘要] 目的 研究樂胃飲顆粒的水提醇沉制備工藝。 方法 以尿囊素、陳皮苷含量和浸膏得率為考察指標，通過L9（34）正交實驗設計優選水提工藝條件，并單因素考察醇沉質量分數，以確定樂胃飲顆粒的最佳制備工藝。 結果 水提工藝影響因素依次為：提取時間（C）>提取次數（D）>加水量（B）>浸泡時間（A），最佳水提工藝條件為A3B3C1D2，即處方藥材加10倍量水、浸泡1.5 h、提取2次、提取時間為1 h。醇沉質量分數以75%為佳。 結論 該制備工藝合理，有效成分提取率高。

[關鍵詞] 樂胃飲顆粒；正交設計；尿囊素；陳皮苷；高效液相色譜法

[中圖分類號] R283 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）13-0094-03

樂胃飲顆粒由臨床經驗效方化裁而來，是以山藥、薏苡仁、陳皮等中藥組成的純中藥制劑，具有健脾益氣、疏肝理氣的功效，臨床用于治療腸易激綜合征（IBS）、功能性消化不良（FD）等消化道疾病。然而，傳統水煎方法不僅耗時，而且煎煮方法難以規范。因此，為了優化制備工藝，使之服用方便，并進行有效的質量控制，確保臨床療效，我們采用水提醇沉制備工藝，并用正交實驗法和單因素考察方法對其進行了研究。

1 材料

日本島津高效液相色譜儀；G02色譜工作站（綠綿安特分析系統裝備公司）；尿囊素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號111501-200202）；陳皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110721-200613）；處方中所有藥材均由浙江中醫藥大學第二門診部提供，經鑒定符合中國藥典2005年版一部標準；甲醇（色譜純）；乙腈（色譜純）；水（純化水）；實驗所用其他試劑為分析純。

2 制備方法

取藥材山藥60 g、薏苡仁60 g、陳皮30 g，將1/4山藥粉碎成細粉（6號篩）備用，其余藥材加水提取2次，第1次加10倍量水，浸泡90 min，提取60 min，第2次加8倍量水提取30 min，合并兩次煎液，過濾，濾液減壓濃縮至0.8 g/mL的清膏。取清膏，攪拌加入95%的乙醇，使乙醇最終濃度為75%，靜置48 h，取上清液，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對密度為1.35（70～80℃）的稠膏，按等量遞加法加入山藥粉末，混勻、制粒、過篩，70℃干燥，分裝即得。

3 制備工藝

3.1 水提工藝條件

3.1.1 正交實驗設計 為了符合中醫湯劑的特點，保持處方中水溶性成分的有效性，本實驗在制備工藝上采取水提醇沉法。考慮到浸泡時間（A）、加水量（B）、提取時間（C）、提取次數（D）是與提取效果相關的主要因素，因此，水提工藝的考察對象是以上4因素，以尿囊素、陳皮苷含量和浸膏得率為評價指標得出綜合評分，按L9（34）正交實驗設計優選樂胃飲顆粒最佳水提工藝條件。因素水平見表1。

3.1.2 浸膏得率的測定 用L9（34）正交表安排試驗，稱取2倍處方量藥材90 g，按設定方案進行煎煮、濾過、濃縮，定容至100 mL。精密吸取20 mL，放置到蒸發皿中（已干燥至恒重），水浴揮干，并在105℃烘箱內干燥3 h，置干燥器中冷卻0.5 h，迅速稱重W，按下式計算浸膏得率，結果見表4。

浸膏得率（%）=■×100%

3.1.3 尿囊素含量的測定 ①色譜條件 色譜：HypersilBDS C18，4.6 mm×250 mm；流動相：甲醇-氯仿-水（0.2：0.012：100）；流速：0.6 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：224 nm；進樣量：20 μL；檢測靈敏度為0.01AUFS。①對照品溶液的制備 取尿囊素對照品，精密稱取5 mg，放置于5 mL量瓶中，加熱水（50℃）溶解并稀釋至刻度，制成1.0 mg/mL的溶液，備用。③標準曲線的制作 精密取對照品儲備液適量，加重蒸水稀釋成（0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125）mg/mL的溶液。精密吸取上述對照品溶液20 μL進樣，按上述色譜條件測定，以尿囊素峰面積（Y）為縱坐標，進樣量（X）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程：Y = 395.95 X+89.331，相關系數r = 0.9995，結果表明，尿囊素在0.25～4 μg范圍內呈良好線性關系。④供試品溶液的制備 精密取樣品溶液10 mL，精密加入10 mL甲醇，超聲30 min，離心15 min（4000 r/min），取上清液，濃縮至干，用重蒸水溶解并定容至10 mL量瓶中，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。⑤陰性樣品溶液的制備 按處方比例及供試品溶液制備方法配制缺山藥的陰性樣品溶液。分別精密量取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各20 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，根據上述回歸方程計算尿囊素含量。陰性樣品色譜無干擾。見圖1。⑥精密度試驗 精密吸取同一樣品溶液，連續進樣5次，在上述色譜條件下測定，并按上述回歸方程測定峰面積，計算RSD=1.74%，表明精密度良好。⑦穩定性試驗 精密吸取同一樣品溶液，在上述色譜條件下于0、2、4、6、8、10 h分別進樣。測定峰面積，計算RSD=3.80%（n = 6），表明樣品在10 h內是穩定的。⑧重復性試驗 取樣品溶液5份，按樣品溶液制備方法操作，測定其峰面積，計算RSD=4.44%（n = 5）。⑨加樣回收率試驗 將高、中、低含量的尿囊素對照品分別加入精密稱取的已知含量的3份樣品中，充分混勻，按上述色譜條件測定，每份樣品測定3次，計算平均回收率及RSD，結果見表2。⑩樣品含量測定 按正交設計制備9份樣品，精密取樣品適量，按上述色譜條件測定，每一樣品測定3次，記錄峰面積平均值，代入回歸方程計算尿囊素含量，結果見表4。

3.1.4 陳皮苷含量的測定 ①色譜條件 色譜柱：HypersilBDS C18，4.6 mm×250 mm；流動相：乙腈-水-磷酸（20：80：0.1）；流速：1 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：283 nm；進樣量：20 μL；檢測靈敏度為0.01AUFS。②對照品溶液的制備 精密稱取陳皮苷對照品10 mg，置5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成2.0 mg/mL的溶液，備用。③標準曲線的制作 精密取對照品儲備液適量，加甲醇稀釋成（0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125）mg/mL的溶液。精密吸取上述對照品溶液20 μL進樣，按上述色譜條件測定，以陳皮苷峰面積（Y）為縱坐標，進樣量（X）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程：Y = 1798.5 X + 3.2237，相關系數r=0.9999，結果表明，陳皮苷在0.25～4 μg范圍內呈良好線性關系。④供試品溶液的制備 精密取樣品溶液5 mL，精密加入20 mL甲醇，超聲30 min，離心15 min（4000 r/min），取上清液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。⑤陰性樣品溶液的制備 按處方比例及供試品溶液制備方法配制缺陳皮的陰性樣品溶液。分別精密量取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各20 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，根據上述回歸方程計算陳皮苷含量。陰性樣品色譜無干擾。見圖2。⑥精密度試驗 精密吸取同一樣品溶液，連續進樣5次，在上述色譜條件下測定，并按上述回歸方程測定峰面積，計算RSD=3.0%，表明精密度良好。⑦穩定性試驗 精密吸取同一樣品溶液，在上述色譜條件下于0、2、4、6、8、24h分別進樣。測定峰面積，計算RSD=2.76%（n = 6），表明樣品在24h內是穩定的。⑧重復性試驗 取樣品溶液5份，按樣品溶液制備方法操作，測定其陳皮苷峰面積，計算RSD=3.65%（n = 5）。⑨加樣回收率試驗 將高、中、低含量的陳皮苷對照品分別加入精密稱取的已知含量的3份樣品中，充分混勻，按上述色譜條件測定，每份樣品測定3次，計算平均回收率及RSD，結果見表3。⑩樣品含量測定 按正交設計制備9份樣品，精密取樣品適量，按上述色譜條件測定，每一樣品測定3次，記錄峰面積平均值并計算陳皮苷含量，結果見表4。

由表4、表5可見，以浸膏得率為考察指標，浸膏得率越低者越佳，由表中極差R值大小顯示，各因素作用主次為C>D>B>A，以A3B1C1D1為佳。以尿囊素含量為考察指標，由表中極差R值大小顯示，各因素作用主次為B>A>D>C，以A3B3C1D2為佳。以陳皮苷含量為考察指標，由表中極差R值大小顯示，各因素作用主次為D>A>B>C，以A2B3C3D2為佳。實際生產中應盡量提高有效成分的含量，故以綜合評分為考察指標，由表中極差R值大小顯示，各因素作用主次為A>B>D>C；方差分析結果表明：A、B、D因素影響具有顯著性意義（P < 0.05），C因素無顯著性意義（P > 0.05），以A3B3C1D2為佳，即浸泡1.5 h，加10倍量水，提取時間為1h，提取2次為佳。

3.2 醇沉質量分數的考察

按處方比例稱取山藥、薏苡仁、陳皮5份，分別加10倍量水，浸泡1.5 h，煎煮2次，第1次1 h，第2次加8倍量水，煎煮0.5 h，合并煎液，過濾，濾液濃縮至0.8 g/mL（即每毫升藥液含生藥0.8 g）。分別加入不同體積的95%乙醇，使乙醇濃度達到30%、45%、60%、75%、90%，攪勻，靜置48 h，濾取上清液，回收乙醇并濃縮至0.45 g/mL。以尿囊素、陳皮苷含量及浸膏得率（操作方法同上）為指標得出綜合評分，結果見表6。結果表明，以75%乙醇醇沉濃度最佳。

3.3 工藝驗證

根據上述正交實驗結果和醇沉質量分數考察的結果分別制備3批樂胃飲顆粒進行驗證，結果表明樂胃飲顆粒各種客觀指標較好，該制備工藝條件合理，符合顆粒劑質量要求，每克顆粒劑含尿囊素為（3.62～3.88）mg/g，陳皮苷為（5.57～5.97）mg/g。

4 討論

樂胃飲顆粒處方中淮山藥補脾氣而益胃陰，培補脾胃，性質平和；薏苡仁健脾滲濕，性微寒而不傷胃，益脾而不滋膩；陳皮理氣運脾，調中快膈，性溫和且燥而不烈，全方清補脾胃，健運中州。現代藥理研究證實，山藥有緩解腸管平滑肌痙攣及對抗神經介質的作用，還能增強小腸吸收功能，抑制血清淀粉酶的分泌[1]。而山藥中所含尿囊素具有抗菌消炎作用，且能修復上皮組織，促進皮膚潰瘍面和傷口愈合，具有生肌作用，可用于胃及十二指腸潰瘍[2]。陳皮對腸平滑肌的作用是雙向的，既能抑制胃腸運動，又能興奮胃腸運動，主要與消化道的機能狀態及陳皮不同有效部位有關[3]。此外，陳皮水煎劑對離體唾液淀粉酶活性有明顯促進作用[4]。陳皮的活性成分陳皮苷具有利膽、抗潰瘍等作用[5]。但是，研究表明，煎煮時間不同，其藥理作用也不盡相同[6]，傳統煎煮方法難以嚴格按照規范執行，保證藥效。因而，本實驗以君藥山藥中的尿囊素為主要考察指標，同時將陳皮苷和浸膏得率納入評價范圍，將發揮樂胃飲顆粒的最佳功效。根據樂胃飲顆粒中的有效成分，我們采用分步考察的制備工藝路線，通過正交試驗優選水提最佳工藝，并以單因素考察醇沉質量分數。結果顯示，所制定的制備工藝合理、可行，為保證該制劑穩定的臨床療效提供了基礎理論依據。

[參考文獻]

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（收稿日期：2013-03-18）