血清HE4和CA125聯合檢測在卵巢癌早期診斷的臨床價值

[摘要] 目的 探討HE4、CA125單獨和聯合檢測，在卵巢癌診斷及疾病轉歸中的價值，探討HE4水平與卵巢癌病理分型的關系，而且與腫瘤分期的相關性。方法 應用ELISA法檢測血清中HE4水平，應用電化學發光法檢測血清CA125水平，其中卵巢癌的婦女40例、卵巢良性腫瘤30例、卵巢子宮內膜異位囊腫30例、健康婦女40例，比較各組的水平差異。 結果 在卵巢癌組血清HE4及CA125水平明顯高于其他各組，差異均有統計學意義（P<0.05）。血清HE4在卵巢子宮內膜異位囊腫組與健康婦女組水平比較差異無統計學意義；但CA125在異位囊腫組水平卻明顯升高，與健康婦女組比較差異有統計學意義；卵巢癌組術前血清HE4水平與年齡相關，與病理分級、臨床分期密切相關；經過全面卵巢癌分期手術患者術后血清HE4水平明顯低于術前，差異有統計學意義（P<0.05）；以健康婦女、卵巢良性疾病作參考人群，血清HE4水平在67 pmol/L時，為最佳界值點。HE4診斷卵巢癌的ROC-AUC為0.969，敏感度為92.5%特異度為98%。聯合HE4及CA125檢測，敏感度最高。結論 HE4是敏感的卵巢癌腫瘤標志物，敏感性較CA125高，聯合檢測有利于提高卵巢癌的診斷效率，血清HE4可以作為卵巢癌術后病情監測及臨床轉歸的敏感血清標志物。

[關鍵詞]人附睪蛋白4；CA125；卵巢癌；早期診斷

[中圖分類號] R737.31 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）10-23-03

卵巢癌起病隱匿，預后差，死亡率高。隨著腫瘤細胞減滅術及有效化療的使用，其5年存活率有一定提高，但仍維持在30%左右，而早期卵巢癌患者治療后5年存活率高達90%。因此，早期診斷是改善卵巢癌預后的關鍵。目前，最常用于早期診斷卵巢癌的血清指標物是CA125，但其在盆腔炎癥、子宮內膜異位癥等疾病以及任何刺激到腹膜的損傷均可出現升高[1]，故應用CA125診斷卵巢癌假陽性率較高，有時還會導致不必要的手術。新型腫瘤標志物——人附睪蛋白4（human epididymis gene product 4，HE4）被認為是一個對卵巢癌的早期診斷和鑒別具有重要價值的血清指標，是近年研究熱點，本研究通過監測不同病理類型及臨床分期卵巢癌患者術前、術后血清HE4及CA125的水平變化。探討HE4、CA125單獨和聯合檢測，在卵巢癌診斷及疾病轉歸中的價值，可以評估HE4在漢族人群中診斷卵巢癌的敏感度和特異度，并與歐美國家數據對比。為早期診斷卵巢癌及治療監測選擇敏感的腫瘤標志物提供理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年12月～2012年10月在福建醫科大學附屬第一醫院婦產科初次住院手術治療的盆腔腫物患者，所有患者均無明顯影響腫瘤標志物的合并癥存在，且術前未經放化療等治療。根據術后石蠟病理分為卵巢惡性腫瘤組40例、卵巢良性卵巢瘤30例，卵巢子宮內膜異位囊腫30例。卵巢癌組手術病理分期按照國際國際婦產科聯盟（FIGO）標準：Ⅰ期11例，Ⅱ期6例，Ⅲ期19例，Ⅳ期4例。高分化6例，中分化11例，低分化23例。包含漿液性卵巢癌21例，黏液性卵巢癌13例，透明細胞癌2例，卵巢子宮內膜腺癌4例。卵巢惡性腫瘤患者年齡11～69歲，（47.57±13.45）歲，非卵巢惡性腫瘤患者年齡16～71歲，平均（40.57±14.45）歲，取材前患者均未接受任何相關治療。并選擇本院同期體檢的健康婦女40例，抽取肘靜脈血檢測HE4和CA125。以上病例采血時均非月經期，無甲狀腺、乳腺疾病及其他腫瘤病史。

1.2 方法

1.2.1 標本收集 所有血液標本取自術前2、3 d及術后第7天（其中10例卵巢惡性腫瘤患者經全面分期手術）空腹肘靜脈全血3 mL，置于未加抗凝劑的試管中，標本采集后在室溫下靜置1 h，離心機離心后（3000 r/min）取上清，保存在-80℃冰箱待測。健康婦女組標本采集同患者組。

1.2.2 實驗方法 血清HE4采用ELISA法測定，其試劑盒購自瑞典Conag公司嚴格按照說明書操作。酶標儀：伯樂550，HE4測定值>150 pmol/L為陽性。血清CAl25采用電化學發光方法定量測定儀器：羅氏e601，試劑：羅氏配套試劑，嚴格按照說明書操作，CAl25測定值>35 U/mL為陽性，

1.3 統計學處理

采用SPSS13.0軟件進行統計學處理。HE4和CA125水平以中位數（M）表示，以病理診斷為標準，繪制ROC曲線，計算靈敏度和特異度。多組間比較采用非參數Kruskal-Wallis檢驗，兩兩比較采用Mann-Whitney檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 各組血清HE4、CA125水平比較

在卵巢癌、卵巢良性腫瘤、卵巢子宮內膜異位囊腫及健康婦女血清中，HE4的中位數分別是103.00（77.85，175.91），24.75（7.56，45.00），36.05（28.75，50.93），44.90（34.25，54.00） pmol/L。CA125的中位數分別是76.48 （15.48，433.03）、22.73（11.65，30.89）、86.51（48.65，312.38）、21.00（11.50，31.00）U/mL；血清HE4水平在卵巢癌組明顯高于其他各組，差異均有統計學意義（x2=79.792，P<0.01）。其他3組兩兩比較，差異無統計學意義（P>0.05）。

血清CA125水平在卵巢癌組與良性腫瘤組、正常組有差別（x2=46.891，P<0.01），但與卵巢子宮內膜異位囊腫組無差別（P>0.05），異位囊腫組與良性腫瘤組、正常組有差別（P<0.05），良性組與正常組無差別（P>0.05）。

2.2 卵巢惡性腫瘤組術前血清HE4水平與年齡、病理類型、病理分級、臨床分期之間的關系

血清HE4與年齡相關，差異有統計學意義（r=0.324，P<0.05），漿液性卵巢癌HE4水平中位數120.6（71～500）pmol/L，黏液性卵巢癌中位數75.00（28～157.5）IU/L，差異有統計學意義（Z=-2.12，P<0.05），低、中、高分化3者中位數水平分別126.00（85.04，313.227）、99.50（74.38，132.00）、83.50（72.70，91.70） pmol/L，差異有統計學意義（x2=6.981，P<0.05）。Ⅰ～Ⅱ期HE4水平中位數80.75（72.45，97.80），Ⅲ～Ⅳ期中位數121.517（95.75，294.79），差異有統計學意義（Z= -3.534，P<0.01）。HE4水平與分期正相關關系，差異有統計學意義（r=0.854，P<0.01）；與分化負相關關系，差異有統計學意義（r=0.688，P<0.01）。

2.3 經過滿意的卵巢癌全面分期手術患者術后血清HE4水平

10例經過滿意的卵巢癌全面分期手術患者術后血清HE4水平32.19（21.67～293.40）pmol/L明顯低于術前血清水平63.37（29.10～444.80）pmol/L，差異有統計學意義（Z=-2.310，P=0.021）.

2.4 血清HE4的診斷閾值

以健康婦女、卵巢良性腫瘤及卵巢子宮內膜異位囊腫作參考人群，血清HE4水平在67 pmol/L時，為最佳界值點。HE4診斷卵巢惡性腫瘤的ROC-AUC為0.969，敏感度為92.5%，特異度98%。見圖1。

在早期（Ⅰ、Ⅱ期）卵巢惡性腫瘤中，HE4的檢出率83.33%，CA125檢出率38.8%，在晚期（Ⅲ、Ⅳ）卵巢惡性腫瘤中HE4的檢出率100%，CA125檢出率72.72%，聯合HE4及CA125檢測，敏感度95.4%，特異度96.8%。按HE4試劑盒提供的參考值，>150 pmol/L，診斷卵巢惡性腫瘤的敏感度為27.5%，特異度為100%，兩者比較，差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

3.1 血清HE4的表達及意義

HE4基因最早是Kirchoff等[3]在人附睪遠端上皮細胞中發現的，為WFDC2基因的編碼產物，是一酸性和半胱氨酸豐富的多肽為特點的分泌蛋白。HE4基因定位在染色體20q12～q13.1，包括5個外顯子和4個內含子，約12 kb長。Wang等[2]研究顯示，HE4在正常的卵巢組織和癌旁組織中不表達，而在卵巢癌組織中高表達。近年來有研究者提出[4]，HE4在消化系統、淋巴結、肌肉組織中不表達；在近端氣管上皮、男性附睪和女性生殖道中高表達。以上研究表明HE4是卵巢癌的相關基因，可以作為一種有效的卵巢腫瘤標志物。Moore等[5]提出：特異性為95%前提下，HE4診斷卵巢癌的敏感性最高；尤其對于鑒別良性腫瘤和I期卵巢癌患者方面，聯合檢測HE4和CA125對卵巢癌的診斷效能最高，進一步為HE4早期預測卵巢癌提供了依據。

本研究顯示血清HE4水平在卵巢癌組明顯高于其他各組；卵巢良性腫瘤、內膜異位囊腫及健康婦女兩兩比較，差異無統計學意義。血清CA125在卵巢癌及卵巢內膜異位囊腫患者均會出現升高，對卵巢腫瘤的診斷引起混淆，而血清HE4有更好的鑒別作用，減少誤診，對于患者可以避免不必要的手術和過度治療。而且CA125 水平僅在約50%的早期卵巢癌患者中升高[6]。本研究顯示不論在早期還是晚期卵巢癌，HE4檢出率均高于CA125，這與劉亞南等[7]研究結果一致，進一步證實HE4在對卵巢良惡性疾病的鑒別及早期診斷方面優于CA125。

有研究[8-9]表明血清CA125水平及年齡都是影響卵巢癌患者預后的因素。本研究顯示卵巢癌組術前血清HE4水平與年齡相關，與病理分級、臨床分期密切相關。考慮隨著卵巢癌病情進展，HE4表達水平增高，提示HE4蛋白可能參與了腫瘤細胞的侵襲和轉移，HE4可能是卵巢癌預后不良的標記物。Drapkin等[10]通過免疫組化研究發現，HE4在大多數非卵巢腫瘤組織中不表達或低表達，在卵巢癌組織中的表達與組織類型相關，HE4在93%的漿液性卵巢癌和100%的子宮內膜癌中表達，在透明細胞癌中僅有50%表達，黏液性癌中未見表達。本研究顯示血清HE4在漿液與黏液性卵巢癌水平不同，由于研究病例有限，可能與總體存在差異，提示黏液性卵巢癌與非黏液性卵巢癌在發生機制、信號傳導途徑及激活、基因表達等存在差異，這提示HE4的表達與卵巢癌病理類型相關。

3.2 血清HE4的診斷閾值

本研究應用ROC曲線來尋找HE4診斷卵巢癌的最佳界值點。以健康婦女及卵巢良性疾病為參照，其ROC曲線上最佳界值點為67 pmol/L，HE4診斷卵巢癌的敏感度92.5.%特異度98%，聯合HE4及CA125檢測，敏感度最高。按HE4試劑盒提供的參考值>150 pmol/L為診斷界值點，診斷卵巢惡性腫瘤的敏感度為27.5%，特異度為100%。由于HE4試劑的研發在歐美人群，診斷界值點的差別可能是由于所選擇樣本的人種不同，其體質及特性有別所致；同時本研究所使用的血清標本為凍存標本，并非新鮮血清，這可能使血清HE4濃度人為降低。本研究說明應在不同人種不同地域進行大規模臨床驗證，確立血清HE4最佳診斷區間 。

3.3 血清HE4在卵巢癌患者術后病情監測及預后評估中的作用

Havrilesky等[11]報道，56%患者的血清HE4比CA125提前6～69周出現升高。本研究顯示，經過全面卵巢癌分期手術患者術后血清HE4水平明顯低于術前血清水平，差異有統計學意義（P<0.05）。與上述研究結果基本一致，提示HE4可以作為監測卵巢癌患者病情轉歸的敏感腫瘤標志物，能較早發現腫瘤復發，但需要進一步擴大樣本研究。

綜上，提示HE4與CA125有各自的分布特點，兩者具有互補性，血清HE4和CA125聯合檢測能減少漏診率及誤診率，提高卵巢癌早期診斷的能力。上述研究提示血清HE4具備作為卵巢腫瘤標志物的優勢條件。

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（收稿日期：2013-04-22）