TRPM8在口腔白斑和口腔鱗癌中的表達及意義

[摘要] 目的 研究瞬時受體電位M8（TRPM8）在口腔白斑和口腔鱗狀細胞癌組織中的表達情況，并分析其與口腔鱗癌臨床病理特征的關系。 方法 采用免疫組織化學方法檢測20例正?？谇唤M織、20例口腔白斑、45例口腔鱗癌組織標本中TRPM8的表達。 結果 TRPM8的染色陽性率在正?？谇火つそM、白斑組、鱗癌組分別為5.0%、30.0%、66.7%。正常黏膜組、白斑組、鱗癌組染色陽性率差異均有統計學意義（P<0.05）。TRPM8的表達水平與腫瘤病理分級關系密切（P=0.01），而與是否有頸淋巴結轉移（P=0.639）、腫瘤的T分期（P=0.320）、患者的年齡（P=1.00）、性別（P=0.815）無明顯相關性。 結論 TRPM8在口腔鱗狀細胞癌中的高表達表明離子通道蛋白可能在腫瘤的發生和增殖的過程中發揮了重要作用。

[關鍵詞] TRPM8；口腔白斑；口腔鱗狀細胞癌；免疫組化

[中圖分類號] R739.8 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）10-28-03

鱗狀細胞癌是最常見的發生于口腔黏膜的惡性腫瘤，占該部位惡性腫瘤的90%以上，嚴重危害人類健康[1]?？谇击[癌的發生是多因素作用的結果，研究表明細胞內鈣離子水平與腫瘤有密切的關系，當腫瘤細胞迅速增殖時，胞內鈣離子濃度也隨之提高，但對于鈣離子如何從細胞外進入細胞內目前尚不清楚。近年來發現一種鈣離子通道蛋白——瞬時受體電位（transient receptor potential，TRP）可能介導鈣離子（Ca2+ ）內流，從而對腫瘤的發生發展起促進作用[2-3]。目前已發現多種TRP通道，尤其是TRPM亞家族，會參與到細胞的生存、增殖和死亡等基本生命活動中。本研究檢測TRPM8蛋白在口腔正常黏膜、口腔黏膜白斑及口腔鱗狀細胞癌組織中的表達情況，并分析其與口腔鱗癌臨床病理特征的關系，從而探索其在口腔疾病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例來源于鄭州大學第一附屬醫院口腔黏膜科及口腔頜面外科2010年5月～2012年5月活檢或術后標本。其中，口腔正常黏膜10例，白斑20例，扁平苔蘚20例，鱗癌45例，共計95例?？谇击[狀細胞癌病例按照下列標準進行選擇：組織病理學診斷明確，首次接受手術治療，術前無放化療史，無其他口腔惡性腫瘤病史。其中男33例，女12例；年齡43～75歲；T分級：T1 17例，T2 13例，T3 9例，T4 6例；有淋巴結轉移14例，無淋巴結轉移31例；病理學分級：高分化20例，中、低分化25例?？谇话装呓浥R床檢查和病理診斷后確診納入。正常對照組取自非腫瘤性活檢標本中正?？谇火つど掀?。

1.2 試劑與方法

兔抗人TRPM8抗體購自Abcam公司（英國），免疫組織化學染色試劑盒購自北京中杉生物技術有限公司。所有標本均經10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm連續切片。采用免疫組織化學SP法，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定

TRPM8主要表達于細胞漿，偶爾表達于細胞膜，陽性染色者呈棕黃色。高倍鏡下隨機選取5個視野， 每個視野計數200個細胞，染色判定標準采用半定量分析法[3]。按細胞染色有無及染色深淺評分：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。按陽性細胞百分率評分：陽性細胞百分率<5%為0分，5%～25% 為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，75%～100%為4分。結果取2項評分之積，≤4分為陰性，>4分為陽性。

1.4 統計學處理

采用SPSS 16.0軟件行x2檢驗，檢驗水準α=0.05。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TRPM8在各組中的表達

TRPM8在口腔鱗癌組中66.7%呈強陽性表達，在口腔白斑組中30.0%呈陽性表達，而在口腔正常組織中只有5.0%呈弱陽性表達。TRPM8的在3組中陽性表達率有統計學意義（P<0.05），x2值分別為4.33、21.11、7.53，見表1，見圖1～5。

2.2 TRPM8在口腔鱗狀細胞癌中表達水平與臨床病理資料的關系

TRPM8的表達水平與腫瘤病理分級關系密切（x2=5.98，P=0.012），在低分化的口腔鱗狀細胞癌中的表達明顯高于高、中分化的口腔鱗狀細胞癌。與患者的年齡（x2=0.00，P=1.00）、性別（x2=0.17，P=0.734）方面無明顯相關性。同時與腫瘤所處于的T分期（x2=0.14，P=0.902）及是否有頸淋巴結轉移（x2=0.23，P=0.419）也無明顯的相關性，見表2。

3 討論

腫瘤的發生是一個復雜的過程，已有研究表明膜離子通道參與腫瘤的形成過程，TRP作為一種跨膜離子通道蛋白，廣泛表達于哺乳動物的多種組織中，參與細胞增殖、分化、凋亡等功能，在腫瘤的發生中起著重要的作用[4-6]。實驗表明

Ca2+與腫瘤關系密切， 直接參與調控腫瘤的生長、侵襲、轉移和分化，而TRP被激活后可以非選擇性通透包括Ca2+在內的陽離子[5，7]。TRP基因超家族分為7個不同的亞家族：TRPC、TRPM、TRPV、TRPA、TRPP、TRPML及TRPN；TRP蛋白有龐大的功能分類，對各種疾病的發生有著深遠的影響[6-10]。

2001年Tsavaler[11]鑒別出一個新型的前列腺特異性基因TRPM8，之后的研究發現TRPM8分布廣泛，功能眾多，不僅參與冷感覺、疼痛感覺調控，血管的收縮和擴張，還參與細胞生長調控[12]，在多種原發性腫瘤中都有表達，實驗證實TRPM家族成員的蛋白表達水平與某些上皮惡性腫瘤的出現和發展關系密切[13-14]。實驗證明TRPM與口腔頜面部惡性腫瘤存在關聯，潘嫻等[15]發現TRPM8在舌鱗狀細胞癌中比癌旁正常組織中的表達顯著，李中連等[16]也發現TRPM亞家族在唾液腺腺樣囊性癌中表達增高。

本實驗結果顯示TRPM8在口腔正常組織中只有5.0%呈弱陽性表達，在口腔白斑組中30.0%呈陽性表達，而在口腔鱗癌組中66.7%呈強陽性表達，并且與病理分級密切相關，在低分化的口腔鱗狀細胞癌中的表達明顯高于高、中分化的口腔鱗狀細胞癌。本實驗證明TRPM8在口腔鱗狀細胞癌的發生發展中發揮的作用，并提示其可以作為檢測癌前病變向癌癥發生轉變的重要指標。由于TRPM8有明確的激動劑和拮抗劑，因此為口腔鱗癌的治療提供了新的思路及手段。目前TRPM8在口腔癌中的研究報道較少，今后仍需深入探索。

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（收稿日期：2013-04-16）