廣藿香揮發油對雙氯芬酸鈉經皮滲透動力學研究

[摘要] 目的 以雙氯芬酸鈉為模型藥物，研究廣藿香揮發油對藥物透皮吸收的促進作用。 方法 采用氮酮、廣藿香揮發油預處理皮膚的方法，通過離體大鼠皮膚滲透釋藥試驗，在不同時間點取樣，測定接受液中雙氯芬酸鈉的濃度，計算累積透過量、穩態流量、滲透系數和滯后時間等指標。 結果 廣藿香揮發油對雙氯芬酸鈉有促透作用，廣藿香揮發油組和氮酮組的促滲作用差異有統計學意義（P<0.05），但比氮酮的弱；揮發油組可延長雙氯芬酸鈉的時滯，而氮酮組縮短雙氯芬酸鈉的時滯；透皮實驗中，二者并未減弱雙氯芬酸鈉的貯庫效應；去角質層實驗中，二者均減弱了雙氯芬酸鈉的貯庫效應。 結論 廣藿香揮發油對雙氯芬酸鈉有一定的透皮吸收促進作用。

[關鍵詞] 廣藿香；揮發油；雙氯芬酸鈉；透皮吸收；貯庫效應

[中圖分類號] R94 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）10-33-03

藥物經皮吸收的主要障礙為皮膚的角質層，透皮吸收促進劑可有效地克服此障礙。許多中藥揮發性成分具有促透作用，且有起效快、效果好、副作用小、無污染的特點。因此，從中藥揮發性成分中尋找新的促滲劑已成為近年研究熱點[1-2]。為此，作者探討了廣藿香揮發油對模型藥物雙氯芬酸鈉經皮吸收的影響。

1 實驗部分

1.1 儀器、試藥與動物

THZ-82型數顯水浴恒溫振蕩器（江蘇金壇市宏華儀器廠）；UV-1800分光光度計（北京瑞利儀器廠）；透皮吸收擴散裝置（自制）。氮酮（AZ，中原化工廠）；雙氯芬酸鈉（廣東省藥品檢驗所），廣藿香揮發油（自提），所用試劑為分析純。

1.2 方法與結果

1.2.1 離體鼠皮的制備 剪短大鼠背部的毛，用脫毛劑脫毛，24 h后處死，直接取背部皮膚，仔細剝離皮下脂肪組織，用生理鹽水反復沖洗，至不渾濁，部分皮膚用膠帶，反復撕貼20次，即得去角質層皮膚。取完整皮膚和去角質層皮膚，置4℃冰箱中保存，1周內用完。取鼠皮，在常溫下解凍，用紗布覆蓋角質層表面，根據組別分別滴加0.5 mL廣藿香揮發油及0.5 mL的氮酮，使之濕潤至整個皮膚外表面，充分接觸12 h后，除去紗布，用生理鹽水反復沖洗干凈，再用吸水紙吸干皮膚表面的液體，立即使用。

1.2.2 標準曲線的制作 精密稱取50.00 mg雙氯芬酸鈉，置50 mL量瓶中，用生理鹽水溶解、定容，制成1 mg/mL的貯備液，精密量取貯備液，用生理鹽水稀釋成50.00、40.00、35.00、30.00、25.00、20.00、15.00、12.50、10.00、6.25、3.12 μg/mL的系列溶液，分別在276 nm處測定其吸光度，以吸光度為縱坐標，以濃度為橫坐標，求得標準曲線方程為y=2.33×10-2 x+6.86×10-2（r=0.9986），線性范圍為3.12～50.00 μg/mL。

1.2.3 回收率和精密度試驗 取已知準確含量的雙氯芬酸鈉，溶于100 mL生理鹽水中，制得不同濃度的供試溶液，測定其吸光度，計算回收率與精密度（表1）。

1.2.4 透皮試驗 實驗分為對照組（A組）、氮酮組（B組）、廣藿香揮發油組（C組）。將處理好的皮膚固定于雙室透皮擴散裝置上進行體外透皮吸收試驗。供給液為0.1 mL的10 mg/mL雙氯芬酸鈉的生理鹽水溶液，接受液為5.0 mL生理鹽水，實驗溫度為（37.0±1.0）℃，振速為120次/min，擴散面積為0.502 cm2，在2、4、8、12、24 h時分別取4.0 mL，同時補加等量的接收液，測定吸光度，代入回歸方程，計算藥物濃度。連續透皮24 h后，除去供給液，用生理鹽水反復清洗，并用濾紙條吸干，取5.0 mL接收液加入干凈的接收瓶中，按上述條件進行藥物貯庫效應的研究。根據參考文獻[3-4]中所列公式計算累計滲透量、滲透系數、時滯、增滲倍數等。

1.2.5 雙氯芬酸鈉的滲透曲線 將不同時間的累積透過量對時間作圖，可得雙氯芬酸鈉的透皮吸收滲透曲線（圖1、2），反映了藥物在完整皮膚和去角質層皮膚的滲透特征，經線性回歸得回歸方程如表2、3，由相關系數r可知，方程線性良好，可見雙氯芬酸鈉的體外滲透近似呈零級動力學方式，透皮速率近似恒定。

1.3 統計學處理

記錄每組實驗數據，根據參考文獻中計算公式，計算累計滲透量、滲透系數、時滯、增滲倍數等。所有數據采用醫學統計學軟件SAS8.2進行統計學分析，計量資料均采用（）表示，采用t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 回收率與精密度試驗

由表1可知，紫外分光光度法測定雙氯芬酸納的方法可靠、準確、重復性好。

2.2 廣藿香揮發油對雙氯芬酸鈉體外透皮速率的影響

由表2可知，從穩態流量和滲透系數來看（完整皮膚），廣藿香揮發油和氮酮對雙氯芬酸鈉均有顯著的促滲作用（P<0.05）；從對時滯的影響可以看出，氮酮可明顯縮短雙氯芬酸鈉的透皮吸收時滯（P<0.05），而廣藿香揮發油卻延長了其透皮吸收時滯；從增滲比ER可以看出氮酮對滲透系數提高倍數大。

由表3可知，從穩態流量和滲透系數來看（去角質層皮膚），兩種促滲劑在去除角質層后的促滲作用和增滲倍數差異無統計學意義（P>0.05）；從時滯來看，去除角質層后，氮酮可縮短雙氯芬酸鈉的透皮吸收時滯，而廣藿香揮發油則明顯延長了其透皮吸收時滯（P<0.05）。

經統計檢驗，去角質層的皮膚與完整皮膚比較，空白對照組A的穩態流量和滲透系數差異有統計學意義（P<0.05）；氮酮組與廣藿香揮發油組均差異無統計學意義（P>0.05）。提示角質層是藥物通過皮膚的主要障礙。

2.3 廣藿香揮發油對雙氯芬酸鈉體外透皮貯庫效應的影響

由表4可知，氮酮組和廣藿香揮發油組并未減弱雙氯芬酸鈉的貯庫效應，氮酮組和空白組之間差異有統計學意義（P<0.05），而廣藿香揮發油組和空白組之間差異無統計學意義（P>0.05）；從時滯上可以看出，氮酮縮短了雙氯芬酸鈉的透皮吸收時滯，但廣藿香卻明顯延長了雙氯芬酸鈉的透皮吸收時滯（P<0.05）。從增滲比ER可以看出氮酮的滲透倍數較廣藿香揮發油的大。

由表5可知，從穩態流量和滲透系數來看，氮酮組和廣藿香揮發油組均減弱了雙氯芬酸鈉的貯庫效應，而二者的促滲作用差異無統計學意義（P>0.05）；增滲倍數也無顯著性差異，但二者均縮短了雙氯芬酸鈉的透皮吸收時滯。

經統計學檢驗，去角質層的皮膚與完整皮膚比較，去除釋放液后，氮酮組中雙氯芬酸鈉的穩態流量和滲透系數差異有統計學意義（P<0.05）；廣藿香揮發油組中則無統計學意義；但兩者比較，廣藿香揮發油組雙氯芬酸鈉的穩態流量和滲透系數均減少，提示角質層具有貯庫作用。

3 討論

實驗研究中發現廣藿香揮發油和氮酮均具有促滲作用，廣藿香揮發油的促滲作用較氮酮弱，統計學檢驗發現二者之間差異無統計學意義（P<0.05）。但在貯庫效應的研究中，氮酮并沒有減弱雙氯芬酸鈉的貯庫作用，廣藿香揮發油卻減弱了雙氯芬酸鈉的貯庫效應，可見二者在促滲方面各具有特點。

在整個皮膚結構中，角質層作為藥物透皮吸收的限速層，使一些藥物的透皮吸收發生困難。實驗發現在去除角質層后，雙氯芬酸鈉的透皮作用明顯增加，提示角質層是雙氯芬酸鈉透皮吸收的主要障礙。角質層中含有與藥物結合的角蛋白，使藥物停留在角質層中形成貯庫，故去除釋放液后，仍有藥物釋放，且可維持一定的時間。本實驗研究發現在去除角質層的貯庫效應研究中發現，當去除釋放液后，仍有藥物釋放，可見藥物在皮膚中形成貯庫，并不是僅僅與角質層中的角蛋白結合，還可能與皮膚中的其他成分結合而停留在皮膚中。故而當去除釋放液后，仍有藥物釋放。

研究發現許多萜類化合物具有一定的促透作用且化合物毒性小[5-6]，廣藿香揮發油含有廣藿香醇、刺蕊草烯等萜類化合物[7]，可能是其發揮促透作用的有效成分。本研究是采用廣藿香總揮發油進行試驗，具體是其中的哪種成分或幾種成分在起作用，將是以后研究的一個方面。

[參考文獻]

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[7] 王吉春.廣藿香中揮發油成分的研究進展[J].中國醫藥指南，2010，8（11）：43-45.

（收稿日期：2013-03-15）