使用鏈脲佐菌素造模對1 型糖尿病大鼠調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞的影響

高永亮 盧覓佳 楊紅忠 黃敏聰 宣堯仙

1 型糖尿病被認(rèn)為是一種由調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞(regulatory T cells，Tregs)介導(dǎo)并對胰島β 細(xì)胞造成不可逆轉(zhuǎn)破壞的代謝性疾病［1］。對于自發(fā)性1 型糖尿病動物模型和人的研究表明Tregs 在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中很重要的作用［2］。1995 年Sakaguchi 等［3］報道CD4+CD25+細(xì)胞減少會導(dǎo)致多種自身免疫性疾病，引起了人們對于該類型細(xì)胞功能的重視。Tregs主要包括兩類:natural regulatory T cells (nTregs)和inducible regulatory T cells (iTregs)，這兩類細(xì)胞分別產(chǎn)生于胸腺和脾臟，它們共同發(fā)揮作用保證了機體的免疫穩(wěn)態(tài)，免疫穩(wěn)態(tài)被打破即Tregs 數(shù)量或者功能失衡時會導(dǎo)致自身免疫性疾病的出現(xiàn)，如自發(fā)性1 型糖尿病發(fā)生和Tregs 具有相關(guān)性［4］。使用鏈脲佐菌素(streptozocin，STZ)造模的實驗性1 型糖尿病動物模型能夠出現(xiàn)1 型糖尿病患者的大部分典型癥狀，廣泛應(yīng)用于糖尿病研究之中［5］。但使用STZ 造模1 型糖尿病大鼠致病機制Tregs 數(shù)量和功能的關(guān)系并未被完全揭示。本實驗在自發(fā)性1 型糖尿病模型與Tregs關(guān)系研究的基礎(chǔ)上，對實驗性1 型糖尿病模型大鼠Tregs 數(shù)量和功能的變化進(jìn)行了研究，以探討實驗性1 型糖尿病模型致病機制與Tregs 數(shù)量和功能的關(guān)系。

材料與方法

1.試劑和儀器:鏈脲佐菌素(streptozocin，STZ)購自Sigma公司;氯化氨溶液、檸檬酸和檸檬酸三鈉購自華東醫(yī)藥公司;FACS 溶血素、1640 培養(yǎng)液、HANKS 緩沖液購自聯(lián)科生物有限公司;CCK-8 試劑盒購自日本同仁化學(xué)研究所;pH 計購自梅特勒-托利多公司;羅氏卓越型血糖儀和血糖試紙購自Roche Diagnostics GmbH 公司;流式細(xì)胞儀、破膜試劑盒(transcription factor suit)、Anti-rat Foxp3+(PE)、Anti-ratCD4+(APC)、Anti-rat CD25+(PE)購自BD 公司;酶標(biāo)儀購自BioTek 公司;大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞提取試劑盒、MagCellect 磁性分離儀購自R＆D 公司。……