糖尿病患者脂肪干細胞(ADSCs)的分離、培養(yǎng)及鑒定研究

朱 琳 劉志飛 張 星 王曉軍

糖尿病是長期威脅人類健康的全球性難題，現(xiàn)有治療方法均不甚理想。目前認為，糖尿病慢性并發(fā)癥中血管病變是主要和始發(fā)的致病因素，而血管病變的關(guān)鍵靶組織為內(nèi)皮細胞［1］。通過移植內(nèi)皮細胞或者具有誘導(dǎo)分化為內(nèi)皮細胞能力的干細胞便成為一種極具前景的治療方法。最新研究發(fā)現(xiàn)，ADSCs 是血管組織工程優(yōu)秀的種子細胞，可被誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細胞。目前，關(guān)于糖尿病患者ADSCs 的研究較少，糖尿病患者ADSCs 是否具有和正常人ADSCs 類似的生物學特性，是實現(xiàn)糖尿病患者ADSCs 能否自體移植治療的關(guān)鍵問題。本研究目的在于建立糖尿病患者來源ADSCs 的分離、培養(yǎng)流程，并比較其與健康人ADSCs 的差異，為實現(xiàn)糖尿病患者ADSCs 自體移植治療提供理論依據(jù)。

資料與方法

1.材料:(1)實驗試劑:高糖DMEM 培養(yǎng)基、胎牛血清(美國GIBCO 公司);Ⅰ型膠原酶、胰酶(美國Sigma 公司);CD29、CD44、CD105 熒光標記抗體(美國BD Bioscience 公司)。(2)脂肪組織:糖尿病患者脂肪組織來源于北京協(xié)和醫(yī)院基本外科合并糖尿病的手術(shù)患者的腹壁脂肪。健康人脂肪組織來源于北京協(xié)和醫(yī)院整形外科吸脂手術(shù)患者。

2.實驗方法:(1)糖尿病患者ADSCs 提取培養(yǎng):①取糖尿病患者腹壁脂肪組織30ml，充分剔除血管、結(jié)締組織，充分剪碎為大小約1mm×1mm×1mm 小塊。將脂肪懸液轉(zhuǎn)入離心管內(nèi)，共3 管，每管加入PBS 洗滌，650r/min 離心，離心后吸出下層洗滌液。3 管分為以下3 組:A 組(2 倍體積0.075%Ⅰ型膠原酶)、B 組(2 倍體積0.10%Ⅰ型膠原酶)、C 組(2 倍體積0.20%Ⅰ型膠原酶)。根據(jù)上述3 管終體積按1∶200比例加入雙抗，封……