容量激活性氯離子通道在大鼠低氧性PASMCs 中的表達(dá)及與p38MAPK 通路的關(guān)系

黃林靜 黎關(guān)龍 鄭夢(mèng)曉 馬迎春 金可可 王萬(wàn)鐵

研究表明，肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary artery smooth muscle cells，PASMCs)上存在多種氯離子通道，但是其中含量最多的為容量激活性氯離子通道(volume activated chloride channels，CLC3)，并且CLC3在肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖方面起到了非常重要的作用［1］。低氧可以引起大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞上JNK、ERK1/2 和p38MAPK 這3 類酶的激活［2］。而目前關(guān)于氯離子通道功能及其表達(dá)上下游信號(hào)通路研究的文獻(xiàn)報(bào)道相對(duì)較少。本實(shí)驗(yàn)利用細(xì)胞培養(yǎng)方法觀察了容量激活性氯離子通道在大鼠低氧性PASMCs 中mRNA 和蛋白表達(dá)的變化，并探討其與p38 絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase，p38MAPK)信號(hào)通路的關(guān)系。

材料與方法

1.材料:SPF 級(jí)健康雄性Sprague - Dawley(SD)大鼠10只，體質(zhì)量為200 ±50g，由溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(浙)2010 -0101 號(hào)。

2.試劑及儀器:SB203580 (美國(guó)Sigma 公司);茴香霉素(Anisomycin，美國(guó)Sigma 公司);二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO 上海申工生物技術(shù)有限公司);胎牛血清、DMEM高糖培養(yǎng)基、胰酶/EDTA(美國(guó)Gibco 公司);SM -α -actin 鼠單克隆抗體、辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗兔二抗(英國(guó)abcam 公司);HRP 標(biāo)記β-actin(上海康城公司);CLC3 兔抗鼠多克隆抗體(美國(guó)Sigma 公司);RT - PCR 試劑盒、50bp DNA Marker(Fermentas life sciences 公司);BCA 蛋白定量試劑盒、增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑盒(美國(guó)Pierce 公司);RT -PCR 引物(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司);PVDF 膜(美國(guó)，Milipore 公司);彩色預(yù)染蛋白maker(MBI，F(xiàn)ermentas 公司)。低氧培養(yǎng)箱(Herareus，美國(guó));顯微外科用顯微鏡(Olympus，日本);生物倒置相差顯微鏡XDS-1B(重慶光學(xué)儀器設(shè)備廠);蛋白電泳轉(zhuǎn)移系統(tǒng)(Bio -Rad 公司);穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(DYY-3 型，北京六一儀器廠);EXL -808 酶標(biāo)儀(USA);恒溫二氧化碳培養(yǎng)箱(Thermo Forma，美國(guó));凝膠定量軟件Quantity One(Bio-Rad 公司);722N 分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司);PCR 儀(Thermo Hybaid，美國(guó))。……