從ICAM-1介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)探討下肢缺血再灌注對(duì)糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)的損傷機(jī)制

黃 達(dá) 李鳴鏑 林 蘭 鄭亞琳 王秋虹

缺血可以引起糖尿病大鼠嚴(yán)重的周?chē)窠?jīng)病變，缺血再灌注能夠進(jìn)一步加重神經(jīng)細(xì)胞軸索變性并導(dǎo)致施萬(wàn)細(xì)胞凋亡［1］。有研究表明，糖尿病周?chē)窠?jīng)組織在缺血再灌注中受損與氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，其中炎性介質(zhì)表達(dá)水平增高和炎性細(xì)胞黏附浸潤(rùn)是重要因素，但其損傷機(jī)制尚不完全清楚［1～3］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)糖尿病大鼠下肢缺血再灌注后血清、坐骨神經(jīng)組織中細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)和髓過(guò)氧化物酶(MPO)的表達(dá)情況以探討周?chē)窠?jīng)缺血再灌注的損傷機(jī)制。

材料與方法

1．實(shí)驗(yàn)材料:清潔級(jí)SD雄性大鼠24只，體重290～310g(北京華阜康生物科技股份有限公司提供)，鏈脲佐菌素(Sigma公司)，Rat sICAM-1/CD54 ELISA試劑盒(R＆D Systems公司)，MPO試劑盒(南京建成生物工程研究所)，ICAM-1(G-5)(Santa公司)，7160全自動(dòng)生化儀(日本日立公司)，STAT FAX 2100全自動(dòng)酶標(biāo)儀(Awareness Technology公司)。

2．模型制備:(1)糖尿病大鼠模型制備:大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，從24只SD大鼠中隨機(jī)選擇6只大鼠作為正常對(duì)照組，剩余18只大鼠禁食不禁水12h，次日使用pH 4．2的檸檬酸鹽緩沖液配制濃度為2%的鏈脲菌素(STZ)溶液，按60mg/kg的劑量腹腔注射，72h后使用羅氏血糖儀測(cè)定大鼠尾尖血糖，以隨機(jī)血糖持續(xù)＞16．7mmol/L作為糖尿病大鼠成模標(biāo)準(zhǔn)，3只大鼠血糖值未達(dá)標(biāo)，予以剔除，成功造模15只。(2)下肢缺血再灌注模型制備［3～5］:糖尿病大鼠飼養(yǎng)1個(gè)月后，從中隨機(jī)選擇6只大鼠作為糖尿病對(duì)照組，剩余9只糖尿病大鼠作為糖尿病缺血再灌注組，使用3%戊巴比妥鈉麻醉，沿腹壁正中線(xiàn)切開(kāi)長(zhǎng)約3cm切口，鈍……