TNF-a和NO在病毒性腦炎患兒腦脊液中的表達(dá)及臨床意義

楊聰琴 張玲 陳娟

河南科技大學(xué)第五附屬醫(yī)院兒科，河南洛陽471000

TNF-a和NO在病毒性腦炎患兒腦脊液中的表達(dá)及臨床意義

楊聰琴 張玲 陳娟

河南科技大學(xué)第五附屬醫(yī)院兒科，河南洛陽471000

目的探討TNF-a（腫瘤壞死因子-a）和NO（一氧化氮）在病毒性腦炎患兒腦脊液中的表達(dá)及臨床意義。方法選擇2009年10月—2011年10月收治的病毒性腦炎患兒86例（觀察組），留取治療前后腦脊液標(biāo)本2 mL室溫下以2000r/min離心后，取上清液置-20℃冰箱保存。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定腦脊液中的TNF-a；通過比色法測定NO2/NO3值表示NO的濃度。與無中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的患兒40例（對照組）進(jìn)行比較。結(jié)果觀察組急性期患兒腦脊液中TNF-a（1.78±0.44）ug/L，明顯高于對照組的（0.910.±37）ug/L。差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=9.8139，P＜0.05），恢復(fù)期患兒腦脊液TNF-a水平（0.96±0.32）ug/L，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；急性期患兒腦脊液中NO(23.89±6.54)mol/L，明顯高于對照組（7.24±2.31）mol/L，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.46,P＜0.01）。恢復(fù)期患兒腦脊液中NO水平（9.7±3.8）mol/L與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。故觀察組急性期重癥患兒腦脊液中TNF-a和NO水平，明顯高于輕癥及對照組患兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論檢測TNF-a和NO在病毒性腦炎患兒腦脊液中的水平，有助于臨床診斷和判斷病情的發(fā)展。

小兒病毒性腦炎；腦脊液；表達(dá)；腫瘤壞死因子-a；一氧化氮

小兒病毒性腦炎是由各種病毒感染引起的急性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，是腦實質(zhì)的炎癥，近年來患病率較以往有明顯上升。病毒性腦炎患兒病情危急而嚴(yán)重，可能出現(xiàn)驚厥、昏迷、腦水腫等神經(jīng)系統(tǒng)的癥狀，可并發(fā)心力衰竭、呼吸衰竭、肝腎功能損害等嚴(yán)重的并發(fā)癥。小兒重癥病毒性腦（severe viral encephalitis，SVE）病死率高，存活患兒常留有各種神經(jīng)系統(tǒng)的后遺癥[1-2]，嚴(yán)重影響患兒及其家庭的生活質(zhì)量，應(yīng)盡早診斷，積極正確治療。因此，早期診斷，控制疾病進(jìn)展，減少后遺癥的發(fā)生是關(guān)鍵。現(xiàn)回顧性分析我院2009年10月—2011年10月收治的病毒性腦炎患兒的臨床資料，研究患兒腦脊液中TNF-a和NO水平，旨在探討TNF-a（腫瘤壞死因子-a）和NO（一氧化氮）在病毒性腦炎患兒腦脊液中的表達(dá)及臨床意義，為臨床診斷、治療提供一定的參考信息。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病毒性腦炎患兒86例（觀察組），全部病例均為急性或亞急性起病，腰穿檢查腦脊液符合病毒性腦炎的特點，并攝胸片、PPD實驗除外結(jié)核感染；做腦CT或MRI檢查排除顱內(nèi)占位性病變，寄生蟲感染。頭顱CT，腦電圖檢查符合病毒性腦炎的臨床特點。腦炎組分為輕癥組和重癥組。輕癥組40例，男23例，女17例，年齡（5.4±1.1)歲。臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、嗜睡或精神異，常腦電圖異常，頭顱CT無異常。重癥組，其中男26例，女20例，年齡（5.6±1.1）歲，病程（12.6±3.0）d。臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、嗜睡或精神異常，部分患兒有高熱持續(xù)不退、頻繁抽搐或驚厥持續(xù)狀態(tài)、昏迷、癱瘓或出現(xiàn)不同程度的腦膜刺激征。其中昏迷（重度）22例，伴有昏迷（輕度）24例。入院后均給予止驚、鎮(zhèn)靜、降顱壓、抗感染、營養(yǎng)神經(jīng)等綜合治療。對照組40例，男21例，女19例；年齡（5.5±1.0）歲。患者發(fā)熱，嘔吐，頭疼，惡心，腦脊液檢查無病毒性腦炎的特點，拍胸片，PPD實驗除外結(jié)核感染，腦CT或MRI排除顱內(nèi)占位性病變，寄生蟲感染。患兒的年齡、性別相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有患兒入院24 h內(nèi)取腦脊液做常規(guī)檢查的同時，留取腦脊液標(biāo)本2 mL室溫下2000 r/min離心后，取上清液置-20℃冰箱保存，檢測腦脊液中TNF-a和NO的濃度。TNF-a檢測方法：用由海南華美公司提供的試劑盒，美國HyperionMR2III型酶標(biāo)儀作為檢測儀器，由專業(yè)人員用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）進(jìn)行測量。NO檢測方法：通過比色法測定NO2/NO3值表示NO的濃度，試劑盒用美國CAYMAN,由專業(yè)人員嚴(yán)格按說明書進(jìn)行檢測。兩組患兒治療7 d后按上述方法復(fù)查腦脊液中TNF-a和NO的水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

兩組患兒急性期和恢復(fù)期腦脊液中TNF-a、NO比較見表1、2。

表1 兩組患兒急性期和恢復(fù)期腦脊液中TNF-a、NO比較（±s）

表1 兩組患兒急性期和恢復(fù)期腦脊液中TNF-a、NO比較（±s）

注：*P＜0.05重癥組急性期與恢復(fù)期患兒腦脊液中TNF-a水平比較，**P＜0.01重癥組急性期與恢復(fù)期患兒腦脊液中NO水平比較,明顯高于對照組患兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

組別T N F -a（u g / L）N O（m o l / L）治療前治療后治療前治療后重癥組（n = 2 2）對照組（n = 4 0）t值1 . 7 8 ± 0 . 4 4*0 . 9 1 ± 0 . 3 7 2 . 9 3 3 0 . 9 6 ± 0 . 3 2 0 . 7 8 ± 0 . 2 3 3 . 1 3 6 2 3 . 8 9 ± 6 . 5 4**7 . 2 4 ± 2 . 3 1 7 . 3 6 4 9 . 7 ± 3 . 8 6 . 1 5 ± 1 . 2 6 3 . 6 6 9

表2 兩組患兒急性期和恢復(fù)期腦脊液中TNF-a、NO比較（±s）

表2 兩組患兒急性期和恢復(fù)期腦脊液中TNF-a、NO比較（±s）

注：△P＜0.05觀察組急性期與恢復(fù)期患兒腦脊液中TNF-a水平比較，△△P＜0.01觀察組急性期與恢復(fù)期患兒腦脊液中NO水平比較,明顯高于輕癥組患兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

組別T N F -a（u g / L）N O（m o l / L）治療前治療后治療前治療后重癥組（n = 2 2）輕癥組（n = 2 4）1 . 7 8 ± 0 . 4 4△1 . 3 5 ± 0 . 6 4 2 . 9 9 7 0 . 9 6 ± 0 . 3 2 0 . 7 9 ± 0 . 2 6 0 . 6 8 1 2 3 . 8 9 ± 6 . 5 4△△1 8 . 7 2 ± 7 . 1 5 7 . 8 8 9 9 . 7 ± 3 . 8 7 . 2 6 ± 2 . 0 1 0 . 6 6 1

3 討論

病毒性腦炎是由各種病毒入侵腦組織引起的急性炎癥反應(yīng)，可引起相應(yīng)的細(xì)胞功能受損病刺激機體發(fā)生免疫反應(yīng)，而細(xì)胞因子TNF-a和NO也參與了病毒與機體的反應(yīng)。TNF-a是一種由單核巨噬細(xì)胞分泌的具有廣泛生物活性的多肽調(diào)節(jié)因子，是體內(nèi)重要的炎癥因子，具有雙重作用[3]。由于各種病毒侵入腦組織引起急性炎性反應(yīng)，會引起相應(yīng)的細(xì)胞功能受損并刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，而細(xì)胞因子TNF-a也參與了病毒和機體的反應(yīng)[4]。當(dāng)病毒侵犯機體時，可激活免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生各種細(xì)胞因子和體液因子，適量的TNF-a對機體抵抗疾病有益，而過量的TNF-a可使組織嚴(yán)重?fù)p傷，器官衰竭[5]。TNF-a可進(jìn)一步誘導(dǎo)IL-6、8、10等細(xì)胞因子的產(chǎn)生，參與體內(nèi)急性期反應(yīng)，引起趨化肽等釋放、發(fā)熱，使內(nèi)皮細(xì)胞活化而導(dǎo)致血管通透性增加。Babu等[6]發(fā)現(xiàn)日本腦炎患者病死率隨腦脊液中TNF-a水平的增加而增加，腦脊液中高水平的TNF-a與致死性的預(yù)后有關(guān)。TNF-a可直接破壞血腦脊液屏障使其通透性增加，可直接刺激下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞引起發(fā)熱，作用于神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，使其表面表達(dá)更多的細(xì)胞因子及受體，加重神經(jīng)細(xì)胞損傷，從而引起炎性反應(yīng)，感染性休克及惡病質(zhì)的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，病毒性腦炎急性期血清TNF含量明顯高于對照組。說明TNF-a水平與病毒感染程度密切相關(guān)。過多的TNF-a除引起局部癥狀外，還可引起全身癥狀。因此可以通過檢測TNF-a水平，有助于判斷病毒性腦炎患兒的病情和腦損傷程度，可作為早期診斷參考指標(biāo)，并檢測病毒性腦炎的病程及可能死亡的病例，早期干預(yù)，降低病死率。

內(nèi)源性NO是在一氧化氮合酶（NOS）催化下由L—精氨酶轉(zhuǎn)化為L-瓜氨酸和NO，由于NO半衰期短，所以體內(nèi)NO水平的高低完全依賴NOS。NOS在體內(nèi)至少有兩種存在形式即結(jié)構(gòu)型鈣依賴性NOS(cNOS)當(dāng)其受生理刺激后活化釋放少量NO，發(fā)揮生理調(diào)節(jié)作用；而另一種是誘導(dǎo)型鈣非依賴性NOS（iNOS），它廣泛分布在感染，炎癥條件下，內(nèi)毒素和某些細(xì)胞因子誘導(dǎo)下進(jìn)行釋放和轉(zhuǎn)錄，合成大量NO而且持續(xù)時間較長，引起細(xì)胞毒素的作用[7-8]。病毒性腦炎患兒，由于病毒對機體的入侵，可激活以單核巨噬細(xì)胞為代表的防御體系，被激活的巨噬細(xì)胞通過非依賴性一氧化氮酶（iNOS）產(chǎn)生高水平的NO，病毒性腦炎急性期腦脊液的NO含量明顯高于正常人，且隨著病情的恢復(fù)，NO的含量較急性期明顯下降[9]。腦脊液中NO的增高雖可抑制病毒的復(fù)制，但過量的NO可導(dǎo)致腦組織的損傷。腦損傷嚴(yán)重時，顱內(nèi)壓增高，NO含量可明顯增高，因此,NO參與病毒性腦炎的發(fā)生、發(fā)展過程，腦細(xì)胞損傷越嚴(yán)重，NO含量越高成正相關(guān)系。所以，通過檢測腦脊液中NO的變化，判斷分析病情發(fā)展，早期干預(yù)，降低病死率。

本組資料結(jié)果顯示：觀察組急性期患兒腦脊液中TNF-a（1.78± 0.44）ug/L，明顯高于對照組的（0.910.±37）ug/L。差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=9.8139，P＜0.05），恢復(fù)期患兒腦脊液TNF-a水平（0.96±0.32）ug/L，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；急性期患兒腦脊液中NO(23.89±6.54)mol/L，明顯高于對照組（7.24±2.31）mol/L，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.46,P＜0.01）。恢復(fù)期患兒腦脊液中NO水平（9.7±3.8）mol/L與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。故觀察組急性期重癥患兒腦脊液中TNF-a和NO水平，明顯高于輕癥及對照組患兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。由此可見，檢測TNF-a和NO在病毒性腦炎患兒腦脊液中的水平，有助于臨床診斷和判斷病情的發(fā)展。

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R729

A

1672-5654（2014）11（a）-0183-02

2014-08-26）

楊聰琴（1969-），女，漢族，河南洛陽，醫(yī)學(xué)學(xué)士，副主任醫(yī)師，研究方向：兒科臨床。