人巨細胞病毒在冠心病患者中的免疫調節作用及其臨床意義

寧觀佳，陳漠水

人巨細胞病毒在冠心病患者中的免疫調節作用及其臨床意義

寧觀佳，陳漠水

目的：檢測冠心病患者人巨細胞病毒（HCMV）感染情況，探討HCMV感染對冠心病患者調節性T淋巴細胞的影響。

冠心病；人巨細胞病毒；調節性T淋巴細胞

(Chinese Circulation Journal, 2014,29:976.)

冠心病血管的基本病理改變是動脈粥樣硬化，動脈內膜上堆積的粥樣脂質斑塊，可直接引起管腔狹窄，誘發局部血栓形成，最終導致心絞痛和心肌梗死臨床癥狀的發生[1]。人巨細胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）即人皰疹病毒5型，近年來的研究顯示HCMV感染可能參與了動脈粥樣硬化的發生、發展過程[2]。本研究檢測了冠心病患者HCMV的感染情況，探討了HCMV感染對冠心病患者免疫功能的影響，以期闡明HCMV感染在動脈粥樣硬化發生、發展過程中的可能作用機制。

1 資料和方法

1.1病例資料

收集2012-04至2014-05我院心血管內科診治的冠心病患者86例為冠心病組，其中男43例，女43例，年齡56～75歲，平均(66.4±8.2)歲，心絞痛患者46例，心肌梗死患者40例。冠心病的診斷參照美國心臟病學會診斷標準[3]：并行冠狀動脈計算機斷層攝影術或冠狀動脈造影確診。排除標準：近期使用過免疫抑制劑者，伴發其他自身免疫性疾病者，伴發慢性炎癥、惡性腫瘤者。另取本院健康體檢者80例作為對照組，其中男性40例，女性40例，年齡53～74歲，平均年齡（65.7±8.4）歲。冠心病組和對照組性別、年齡差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2人巨細胞病毒感染的檢測

HCMV檢測使用酶聯免疫吸附測定（ELISA）法，檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。采集所有受試者靜脈血2 ml，1 000 g離心15 min分離上層血清送檢驗科，按試劑盒說明操作，并判斷陰性、陽性結果。

1.3調節性T淋巴細胞的流式細胞儀檢測

外周血單個核細胞中調節性T淋巴細胞的比例使用流式細胞儀檢測。采集所有受試者靜脈血5 ml，加入紅細胞裂解液（上海基因生物科技有限公司），1 000 g離心15 min，棄上清，PBS緩沖液洗滌沉渣2次，英國Abcom公司生產的FITC-CD4、PE-CD25特異性抗體染色細胞30 min，使用美國Beckman Coulter公司生產的流式細胞儀檢測CD4+/ CD25+的T淋巴細胞。

1.4白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達的檢測

白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α的表達檢測使用ELISA法，檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司，采集所有受試者靜脈血2 ml，1 000 g 離心15 min分離上層血清送檢驗科，按試劑盒說明操作，并根據標準品計算出上述因子的表達水平。

1.5統計學分析

2 結果

2.1冠心病組和對照組人巨細胞病毒感染情況分析

冠心病組檢出HCMV感染62例，陽性率為72.1%，對照組檢出HCMV感染22例，陽性率為27.5%，兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。表1

2.2冠心病組和對照組調節性T淋巴細胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達水平的比較

冠心病組調節性T淋巴細胞比例和白介素-10表達水平顯著低于對照組（P＜0.01），而白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達水平又顯著高于對照組（P＜0.01），差異均有統計學意義。表1

2.3心絞痛和急性心肌梗死患者人巨細胞病毒感染情況分析

46例心絞痛患者中檢出HCMV感染28例，陽性率為60.9%，40例急性心肌梗死患者中檢出HCMV感染34例，陽性率為85.0%，兩者之間差異有統計學意義（P＜0.05）。表1

2.4心絞痛和急性心肌梗死患者外周血單個核細胞中調節性T淋巴細胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達水平的變化

急性心肌梗死患者調節性T淋巴細胞比例以及血清中白介素-10表達水平顯著低于心絞痛患者（P＜0.01），而白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達水平急性心肌梗死患者又顯著高于心絞痛患者（P＜0.01），差異均有統計學意義。表1

表1 兩組患者人巨細胞病毒感染率、調節性T淋巴細胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達水平的比較

表1 兩組患者人巨細胞病毒感染率、調節性T淋巴細胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達水平的比較

注：與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01；與心絞痛患者比較△P＜0.05 △△P＜0.01

腫瘤壞死因子-α (μg/ml)對照組 80 27.5（22） 6.38±1.42 27.84±4.23 9.12±2.12 16.42±2.57冠心病組 86 72.1（62）* 3.32±0.73** 16.54±3.84** 28.91±4.38** 36.34±6.05**心絞痛患者 46 60.9（28） 4.24±1.03 21.43±4.16 20.55±3.43 31.12±5.83急性心肌梗死患者 40 85.0（34）△ 2.06±0.52△△ 10.91±2.23△△ 36.58±5.72△△ 44.49±7.24△△組別 例數 人巨細胞病毒感染率[% (例)]調節性T淋巴細胞比例(%)白介素-10 (μg/ml)白介素-6 (μg/ml)

3 討論

HCMV在自然界中存在潛伏性感染[4]，本研究在健康對照人群中檢測到27.5%的感染率，流行病學統計顯示人群HCMV感染率會隨著年齡增長而增加[5]，而冠心病就是一個老年性疾病，二者都有隨年齡增加而發病增加的趨勢，這一結果提示了二者之間存在一定的相關聯系[6]，本研究的檢測顯示冠心病患者的HCMV陽性檢出率顯著高于健康對照人群，而且在急性心肌梗死患者HCMV陽性檢出率又顯著高于心絞痛患者，上述結果提示了HCMV感染可能參與了冠心病的發生和病程進展。

國內外的研究顯示HCMV感染可以啟動動脈粥樣硬化形成程序[7]，但其具體機制仍未明了。調節性T淋巴細胞是最近幾年發現的CD4陽性T細胞亞群，在體內起到免疫抑制的作用[8]，已有研究觀察到HCMV感染的患者會出現調節性T淋巴細胞的減低[9]，可能是病毒感染T細胞，抑制了T細胞的活化，本研究觀察到了冠心病患者調節性T淋巴細胞較健康對照顯著減低，急性心肌梗死患者調節性T淋巴細胞又顯著低于心絞痛患者。調節性T淋巴細胞的體內效應因子是白介素-10，白介素-10可以抑制白介素-6和腫瘤壞死因子-α等炎性因子的表達，已知炎性因子是冠心病動脈粥樣硬化病變的主要始動因子[10]，本研究也觀察到了冠心病患者白介素-10表達的減低，并且急性心肌梗死患者較心絞痛患者減低的更顯著，同時冠心病患者白介素-6和腫瘤壞死因子-α炎性因子較健康對照人群顯著升高，急性心肌梗死患者較心絞痛患者升高的更加顯著。上述結果提示HCMV感染抑制了T細胞向調節性T淋巴細胞的分化，打破了機體的免疫抑制平衡狀態，從而誘發了高炎癥狀態，進一步導致了冠心病患者動脈血管病變的發生、發展。綜上所述，本研究顯示冠心病患者中HCMV檢出率高，HCMV感染可能通過抑制調節性T淋巴細胞的產生參與了冠心病患者動脈粥樣硬化病變的發生、發展過程，本研究提示控制HCMV感染有可能成為延緩冠心病患者動脈粥樣硬化病變的新靶點，HCMV感染調控調節性T淋巴細胞的具體機制還有待進一步的研究來證實。

[1] van Bruggen N, Ouyang W. Th17 cells at the crossroads of autoimmunity, inflammation, and atherosclerosis. Immunity, 2014, 40: 10-12.

[2] 陳華, 劉偉, 程潔, 等. 人類巨細胞病毒感染對血管平滑肌細胞脂代謝相關基因表達的影響. 中南醫學科學雜志, 2013, 41: 17-20.

[3] El-Hajj S, Hage FG. Risk stratification for coronary artery disease using pharmacological stress tests. J Med Liban, 2014, 62: 69-75.

[4] 孔偉麗, 戴京濤, 王雷, 等. 人巨細胞病毒感染及血清髓過氧化物酶水平與頸動脈粥樣硬化的相關性分析. 臨床薈萃, 2013, 28: 1139-1141.

[5] 沈雪莉, 張薇, 張斯萌, 等. 動脈粥樣硬化及腦梗死患者血中HCMV IgM抗體檢測及臨床意義. 中國醫科大學學報, 2011, 40: 346-348.

[6] 孫志敏, 郭力剛, 俎德玲. 老年冠心病患者感染性指標水平變化的臨床研究. 中華醫院感染學雜志, 2014, 24: 877-879.

[7] 黃從新, 王德勝, 楊波, 等. 人巨細胞病毒對培養人臍靜脈內皮細胞增殖和凋亡的影響. 中國循環雜志, 1999, 14: 381-387.

[8] Liu Z, Zhao Y, Wei F, et al. Treatment with telmisartan/rosuvastatin combination has a beneficial synergistic effect on ameliorating Th17/ Treg functional imbalance in hypertensive patients with carotid atherosclerosis. Atherosclerosis, 2014, 233: 291-299.

[9] Egli A, Silva M Jr, O'Shea D, et al. An analysis of regulatory T-cell and Th-17 cell dynamics during cytomegalovirus replication in solid organ transplant recipients. PLoS One, 2012, 7: e43937-43944.

[10] 黃巧娟, 龐毅恒, 郭遠林, 等. 冠狀動脈擴張患者外周血中性粒細胞與淋巴細胞比值的臨床意義. 中國循環雜志, 2014, 29: 189-193.

Immunity of Human Cytomegalovirus in Patients of Coronary Artery Disease With its Clinical Efficacy

NING Guan-jia, CHEN Mo-shui.
Department of Cardiology, Haikou People’s Hospital, Haikou (570208), Hainan, China

NING Guan-jia, Email: ngjlsy@126.com.cn

Objective: To detect the infectious condition of human cytomegalovirus (HCMV) in coronary artery disease (CAD) patients and to explore the effect of HCMV infection on Treg cells in CAD patieuts.Methods: A total of 86 CAD patients treated in our hospital from 2012-04 to 2014-05 were studied. The patients were divided into 2 groups: Angina Pectoris (AP) group, n=46 and Acute myocardial infarction (AMI) group, n=40. In addition, there was a Control group with 80 healthy subjects. The Treg cell amount was detected by fl ow cytometry analysis, the expression levels of HCMV and IL-10, IL-6, TNF-α were examined by ELISA.Results: The positive rate of HCMV infection was higher in CAD group than that in Control group as 72.1% vs 27.5%, P＜0.05. The ratio of Treg cell and the levels of IL-10, IL-6, TNF-α expression in CAD group were (3.32 ± 0.73) % and (16.54 ± 3.84) μg/ml, (28.91 ± 4.38) μg/ml, (36.34 ± 6.05) μg/ml, while in Control group were (6.38 ± 1.42) % and (27.84 ± 4.23) μg/ml, (9.12 ± 2.12) μg/ml, (16.42 ± 2.57) μg/ml respectively, all P＜0.01. The positive rate of HCMV infection was higher in AMI group than that in AP group as 85.0% vs 60.9%, P＜0.05. The ratio of Treg cell and the levels of IL-10, IL-6, TNF-α expression in AP group were (4.24 ± 1.03) % and (21.43 ± 4.16) μg/ml, (20.55 ± 3.43) μg/ml, (31.12 ± 5.83) μg/ml, while in AMI group were (2.06 ± 0.52) % and (10.91 ± 2.23) μg/ml, (36.58 ± 5.72) μg/ml, (44.49 ± 7.24) μg/ml respectively, all P＜0.01.Conclusion: CAD patients had the higher positive rate of HCMV infection, which may inhibit Treg cell production and then, involved in CAD occurrence and development.

Coronary artery disease; Human cytomegalovirus; Treg cell

2014-07-14）

（編輯：漆利萍）

570208 海南省，海口市人民醫院 心血管內科

寧觀佳 主治醫師 學士 主要從事冠心病臨床研究 Email: ngjlsy@126.com.cn 通訊作者：寧觀佳

R541

A

1000-3614（2014）12-0976-03

10.3969/j.issn.1000-3614.2014.12.005

方法：收集2012-04至2014-05我院心血管內科診治的冠心病患者（冠心病組）86例，其中心絞痛患者46例，心肌梗死患者40例。另取我院健康體檢者80例作為對照組。HCMV檢測使用酶聯免疫吸附測定（ELISA）法，調節性T淋巴細胞使用流式細胞儀檢測，白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達的檢測使用ELISA法。

結果：冠心病組HCMV陽性率為72.1%，顯著高于對照組的27.5%（P＜0.05）。冠心病組調節性T淋巴細胞比例以及白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達水平分別為（3.32±0.73）%、（16.54±3.84）μg/ml、（28.91±4.38）μg/ml、（36.34±6.05）μg/ml，對照組分別為（6.38±1.42）%、（27.84±4.23）μg/ml、（9.12±2.12）μg/ml、（16.42±2.57）μg/ml，上述指標在兩組間具有顯著性差異（P＜0.01）。急性心肌梗死患者HCMV陽性率為85.0%，顯著高于心絞痛患者的60.9%（P＜0.05）。心絞痛患者調節性T淋巴細胞比例以及白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達水平分別為（4.24±1.03）%、（21.43±4.16）μg/ml、（20.55±3.43）μg/ml、（31.12±5.83）μg/ml，急性心肌梗死患者分別為（2.06±0.52）%、（10.91±2.23）μg/ml、（36.58±5.72）μg/ml、（44.49±7.24）μg/ml，上述指標在兩組差異有統計學意義（P＜0.01）。

結論：冠心病患者中HCMV檢出率高，HCMV感染可能通過免疫系統抑制調節性T淋巴細胞的產生，并參與了冠心病患者動脈粥樣硬化病變的發生、發展過程。