miR-200c在胃癌組織中的表達及其臨床意義

黃 俊，伍菲菲，賀利恒，張志偉*

(1.南華大學 腫瘤研究所，湖南 衡陽 421001；2.邵陽醫學高等專科學校， 湖南 邵陽 422000；3.婁底市中心醫院，湖南 婁底 417000)

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miR-200c在胃癌組織中的表達及其臨床意義

黃 俊1,2，伍菲菲1,3，賀利恒1，張志偉1*

(1.南華大學 腫瘤研究所，湖南 衡陽 421001；2.邵陽醫學高等專科學校， 湖南 邵陽 422000；3.婁底市中心醫院，湖南 婁底 417000)

目的：探討miR-200c(Homo sapiens miR-200c)在人胃癌組織的表達改變情況及其臨床意義。方法：采用原位雜交檢測40例正常人群胃黏膜組織以及121例胃癌患者組織中miR-200c的表達情況。結果：原位雜交實驗證實miR-200c在胃癌組織中表達顯著下調。在121例胃癌組織中，miR-200c的表達水平與胃癌臨床分期(P<0.05)以及淋巴結轉移(P<0.01)情況顯著相關。結論：miR-200c在胃癌組織中表達下調，其下調程度與胃癌臨床分期以及淋巴結轉移情況相關。

miR-200c；胃癌；臨床意義

眾所周知，miRNA是分子生物學研究的熱點，人類miRNA充當腫瘤基因或抑瘤基因的作用，調控其靶基因的表達及相關信號通路，在腫瘤的發生、發展和轉歸過程中發揮重要作用[1]。研究表明，miRNA-200c通過靶基因ZEB1上調RASSF1A表達，從而抑制乳腺癌細胞的EMT效應[2]，且miR-200c在乳腺癌細胞和乳腺癌干細胞中表達下調[3-4]。以上研究結果提示，miR-200c表達下調可能在腫瘤的發生發展過程中起重要作用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

正常胃黏膜組織樣本40例，胃癌組織樣本121例，上述組織芯片均由中山大學腫瘤防治中心惠贈。

原位雜交探針：miR-200c miRCURYTM LNA custom detection probes (美國Exiqon公司)。

1.2 原位雜交

60℃烤片2h，二甲苯脫蠟，第1缸15min，第2缸25min，無水乙醇脫二甲苯5min；100%、85%、70%梯度酒精復水各5min，無酶水洗；3%過氧化氫室溫處理8min，無酶水洗1min×3次；3%胃蛋白酶37℃消化20min，PBS水洗5min×3次，無酶水洗1min×1次；1%多聚甲醛室溫固定10min，無酶水洗1min×3次；滴加適量預雜交液以覆蓋組織，55℃預雜交2h；將miR-200c探針按說明稀釋于滅菌無酶水中，終濃度為31nM，滴加適量雜交液以覆蓋組織，55℃雜交過夜，次日用2×SSC緩沖液洗5min×2次，0.5×SSC，0.2×SSC緩沖液洗各15mim×1次；滴加封閉液，37℃封閉30min；滴加生物素化鼠抗地高辛，室溫孵育2h，PBST緩沖液洗5min×4次；滴加SABC，室溫孵育30min，PBST緩沖液洗5min×3次；DAB顯色，0.75mL蒸餾水中加A、B、C顯色液各一滴，混勻，滴加至標本上，顯微鏡下控制顯色，充分水洗；蘇木素染色，充分水洗，中性樹膠封片保存。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 原位雜交檢測miR-200c在胃癌及正常胃黏膜組織中表達情況

原位雜交結果表明，在121例胃癌芯片組織中，miR-200c陽性表達51例，陽性率為42.1%；40例正常胃黏膜組織中，miR-200c陽性表達31例，陽性率為77.5%，兩組比較差異顯著，具有統計學意義(P<0.01)。

2.2 miR-200c表達與胃癌臨床病理參數之間的關系

原位雜交結果顯示，miR-200c在121例胃癌組織中，70例低表達，51例高表達。采用軟件分析發現，miR-200c的表達與胃癌患者的性別、年齡、細胞分化程度無顯著相關性，差異無統計學意義 (P>0.05)；miR-200c的表達隨著臨床分期的升高而降低，III～IV期胃癌組織中miR-200c的表達顯著低于I～II期胃癌組織中的表達，差異具有統計學意義(P<0.05)；胃癌患者中，有淋巴結轉移患者的miR-200c表達顯著低于無淋巴結轉移者，差異具有統計學意義(P<0.01)。

3 討論

miR-200家族包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429，其是從兩個染色體位點轉錄而來。miR-200b-200a-429簇位于染色體1p36，miR-200c-141簇位于染色體12p13[1]。最近，有研究報導miR-200家族與腫瘤的發生發展顯著相關，如卵巢癌、子宮內膜癌、肺癌以及胃癌等[5]。研究顯示，miR-200家族是抑癌基因，并且調控EMT。miR-200直接靶向EMT誘導轉錄因子ZEB1和ZEB2，而ZEB1和ZEB2可抑制鈣黏蛋白的表達。miR-200也通過靶向β-catenin mRNA 抑制β-catenin/Wnt 信號通路[3]，從而突出了miR-200在腫瘤中的侵襲和轉移作用。

本研究通過原位雜交實驗證實miR-200c在胃癌組織中表達顯著下調。在121例胃癌組織中，miR-200c的表達水平與胃癌臨床分期以及淋巴結轉移呈負相關，提示miR-200c可能作為胃癌的預后相關分子。miRNA作為腫瘤基因或抑瘤基因這一發現為腫瘤發病機制的研究提供了新思路，也為腫瘤的防治、診斷、分子分型、預后以及療效監測甚至輔助治療提供了新策略。筆者將繼續深入研究miR-200c在胃癌中的功能，系統闡明其參與胃癌發生發展可能的分子機制，為胃癌的防治提供理論依據和實驗基礎。

[1] TANG H, DENG M, TANG Y, et al. miR-200b and miR-200c as prognostic factors and mediators of gastric cancer cell progression[J].Clin Cancer Res,2013,19(20):5602-5612.

[2] ILIOPOULOS D,LINDAHL-ALLEN M,POLYTARCHOU C,et al.Loss of miR-200 inhibition of Suz12 leads to polycomb-mediated repression required for the formation and maintenance of cancer stem cells[J]. Mol Cell,2010,39(5):761-772.

[3] SHIMONO Y, ZABALA M, CHO RW, et al. Downregulation of miRNA-200c links breast cancer stem cells with normal stem cells[J]. Cell,2009,138(3):592-603.

[4] HOWE EN, COCHRANE DR, RICHER JK. Targets of miR-200c mediate suppression of cell motility and anoikis resistance[J].Breast Cancer Res, 2011,13(2):R45.

[5] CEPPI P, MUDDULURU G, KUMARSWAMY R, et al. Loss of miR-200c expression induces an aggressive, invasive, and chemoresistant phenotype in non-small cell lung cancer[J]. Molecular Cancer Research,2010(8):1207-1216.

(責任編輯：尹晨茹)

2013-12-24

國家自然科學基金(81101643)

黃俊(1982-)，男，邵陽醫學高等專科學校講師，研究方向為胃癌發病分子機制。

張志偉，南華大學腫瘤研究所副教授，碩士生導師，研究方向為胃癌發病分子機制。

R735.2

A

1673-2197(2014)08-0103-01